肝细胞癌预后评估的生物标志物及其试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了一种肝细胞癌预后评估的生物标志物及其试剂盒和方法。所述生物标志物为肿瘤旁组织中的CD8

【技术实现步骤摘要】
肝细胞癌预后评估的生物标志物及其试剂盒和方法
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种肝细胞癌预后评估的生物标志物、试剂盒及方法。
技术介绍
肝细胞癌是最常见的原发性肝癌之一，在全世界癌症相关死亡中位居第四位。对于晚期患者，手术切除不能完全治愈该疾病。通常需要将放疗法、化学疗法、激素疗法和靶向疗法相结合。随着免疫疗法研究的迅速发展，免疫疗法有望可以给予晚期肝细胞癌患者更显著的疗效。尽管有些患者可以从抗PD-1治疗中受益，但没有迹象表明这些疗法可以明显改善预后。因此，迫切需要更深入地了解肝癌的免疫环境和免疫细胞的功能状态来评估患者的预后状况。以前的研究观察到肝细胞癌中CD8+PD-1+T细胞的富集具有较差的临床转归，但仍缺乏对CD8+PD-1+T细胞内异质性亚群的深入表型区分。PD-1是活化T细胞上的抑制性受体，是重要的免疫检查点治疗靶标，在癌症免疫治疗中用于活化细胞毒性T细胞。但是仅PD-1的表达并不能决定T细胞的耗竭状态，其中不同的亚群具有不同的分布模式、表型和功能。因此，对CD8+PD-1+T细胞亚群的深入研究将有助于肿瘤免疫治疗的进一步发展。
技术实现思路
为了探讨CD8+PD-1+T细胞的潜在作用，本专利技术人将CD8+PD-1+T细胞进一步细分为表达CD8和PD-1分子但是不表达CD161分子的T淋巴细胞亚群CD8+PD-1+CD161-T和表达CD8、PD-1和CD161分子的T淋巴细胞亚群CD8+PD-1+CD161+T，发现了它们在肝细胞癌中的独特分布，并在此基础上提供了评估HCC预后的标志物、试剂盒及方法。本专利技术的第一个方面，提供了一种肝细胞癌预后评估的生物标志物，该标志物为肿瘤旁组织中的CD8+PD-1+CD161+T细胞或肿瘤组织中的CD8+PD-1+CD161-T细胞；优选地，所述肿瘤组织为肿瘤核心区域的组织，所述肿瘤旁组织为距肿瘤与非肿瘤交界处大于0.6cm的非肿瘤组织。进一步，肿瘤旁组织中的CD8+PD-1+CD161+T细胞量与肝细胞癌的预后良好成正相关，肿瘤组织中的CD8+PD-1+CD161-T细胞量与肝细胞癌的预后良好成负相关。优选地，所述预后包括检测、疗效评估、复发监控。本专利技术第二个方面，提供了所述肝细胞癌预后评估的生物标志物在制备评估肝细胞癌预后的试剂或试剂盒中的应用。进一步，本专利技术提供了一种肝细胞癌预后评估试剂盒，所述试剂盒包括CD8+PD-1+CD161+T细胞和/或CD8+PD-1+CD161-T细胞的检测相关试剂。优选地，所述肝细胞癌预后评估试剂盒以肝细胞癌患者肿瘤旁组织中CD8+PD-1+CD161+T细胞在所有T细胞中的占比和/或肿瘤组织中CD8+PD-1+CD161-T细胞在所有T细胞中的占比为评估标准。优选地，所述肝细胞癌预后评估试剂盒还包括肝细胞癌患者肿瘤旁组织中CD8+PD-1+CD161+T细胞在所有T细胞中的占比的临界值和/或肿瘤组织中CD8+PD-1+CD161-T细胞在所有T细胞中的占比的临界值。优选地，所述肝细胞癌预后评估试剂盒包括染色液、缓冲液。优选地，所述肝细胞癌预后评估试剂盒包括CD8抗体、PD-1抗体和CD161抗体以及染色剂。优选地，所述肝细胞癌预后评估试剂盒包括免疫组化试剂，特别优选为多重免疫组化试剂。本专利技术的第三个方面，提供了一种肝细胞癌预后评估的方法，包括以下步骤：1)获取HCC患者肿瘤组织和/或肿瘤旁组织；2)检测出所述肿瘤旁组织中CD8+PD-1+CD161+T细胞在所有T细胞中的占比和/或所述肿瘤组织中的CD8+PD-1+CD161-T细胞在所有T细胞中的占比；3)将步骤2)得到的结果与设定的占比临界值进行对比，对比结果用于评估患者的预后情况。优选地，所述肿瘤组织为肿瘤核心区域的组织，肿瘤旁组织为距肿瘤与非肿瘤交界处大于0.6cm的非肿瘤组织。进一步，肿瘤旁组织中CD8+PD-1+CD161+T细胞的占比越高，患者的预后评估越好，预测生存期和无复发生存期越长。优选地，步骤3)中肿瘤旁组织中CD8+PD-1+CD161+T细胞的临界值可设定为5-10％，高于临界值患者预后评估为好，否则预后评估较差。进一步，肿瘤组织中CD8+PD-1+CD161-T细胞的占比越高，患者的预后评估越差，预测生存期和无复发生存期越短。优选地，步骤3)中肿瘤组织中CD8+PD-1+CD161-T细胞的临界值可设定为15-20％，高于临界值患者预后评估为差，否则预后评估较好。本专利技术首先发现了HCC患者的肿瘤与肿瘤旁组织存在CD8+PD-1+CD161+T细胞和CD8+PD-1+CD161-T细胞的差异性富集，并发现了不同区域的两类细胞细占比与HCC预后情况的相关性，CD8+PD-1+CD161+T在肿瘤旁组织中的富集表明临床预后较好，而CD8+PD-1+CD161-T在肿瘤组织中的富集表明临床预后较差。从而提供了一种新的评估HCC预后的有效方法、试剂盒和标志物，对HCC及肿瘤的研究以及肿瘤病人的治疗具有重要意义。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是从样本中分离白细胞进行CyTOF分析的工作流程图：提取手术切除的样品中的免疫细胞，用金属标记的抗体处理，然后用飞行时间质谱细胞仪检测；降维后获得的数据可视化，通过手动门控策略和聚类算法识别细胞簇；图2是T细胞的tSNE图，显示通过Rphenograph聚类方法在T细胞中鉴定出的30个簇；图3是T细胞的tSNE图，显示了已识别的经典T细胞亚群；图4是T细胞的簇和表型热图，显示了30个T细胞簇35个分子的表达情况，从左往右数，第1列表示T细胞簇的富集情况，第2至36列表示分子表达强度，第37列表示CD4和CD8的表达情况(其中Dp为双阳性、Dn为双阴性)，第38列表示已知的经典亚型分类；图5显示了T区和N区中CD8+PD-1+CD161+T细胞和CD8+PD-1+CD161-T细胞的差异性富集情况；图6显示了CD8+PD-1+CD161+T细胞(T11和T13)和CD8+PD-1+CD161-T细胞(T04、T15和T20)的35个分子表达谱差异；图7显示了CD8+PD-1+CD161+T细胞(T11和T13)和CD8+PD-1+CD161-T细胞(T04、T15和T20)的分化轨迹差异；图8是多重免疫荧光在组织原位染色的照片，显示了CD8+PD-1+CD161+T细胞和CD8+PD-1+CD161-T细胞的分布状况；图9是CD8+PD-1+CD161-T细胞在T/N区与总生存期(OS)/无复发生存期(RFS)之间相关性的Kaplan-Meier分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肝细胞癌预后评估的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为肿瘤旁组织中的CD8

【技术特征摘要】
1.一种肝细胞癌预后评估的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为肿瘤旁组织中的CD8+PD-1+CD161+T细胞或肿瘤组织中的CD8+PD-1+CD161-T细胞。


2.如权利要求1所述的肝细胞癌预后评估的生物标志物，其特征在于，所述肿瘤组织为肿瘤核心区域的组织，所述肿瘤旁组织为距肿瘤与非肿瘤交界处大于0.6cm的非肿瘤组织。


3.如权利要求1或2所述肝细胞癌预后评估的生物标志物在制备评估肝细胞癌预后的试剂或试剂盒中的应用。


4.一种肝细胞癌预后评估试剂盒，其特征在于，包括CD8+PD-1+CD161+T细胞和/或CD8+PD-1+CD161-T细胞的检测相关试剂。


5.如权利要求4所述的肝细胞癌预后评估试剂盒，其特征在于，以肝细胞癌患者肿瘤旁组织中CD8+PD-1+CD161+T细胞在所有T细胞中的占比和/或肿瘤组织中CD8+PD-1+CD161-T细胞在所有T细胞中的占比为评估标准。


6.如权利要求5所述的肝细胞癌预后评估试剂盒，其特征在于，包括肝细胞癌患者肿瘤旁组织中CD8+PD-1+CD161+T细胞在所有T细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：王红阳，陈磊，李芷萱，郑博，
申请(专利权)人：中国人民解放军海军军医大学第三附属医院，
类型：发明
国别省市：上海;31