一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡及其制备方法，包括如下步骤：1)利用柠檬酸钠还原法制备纳米金颗粒，将纳米金与化疗药物多柔比星偶联起来；2)制备聚合物囊泡的同时将水溶液中的金药复合物包入聚合物囊泡的水相中；3)将多肽Angiopep‑2偶联在聚合物囊泡上，用超滤法除去游离的金药复合物及多肽Angiopep‑2，得到一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡。该方法简单易行，成功率高，降低化疗药物的毒副作用，增强疗效，为临床应用研究提供可靠的实验研究数据及理论基础。

【技术实现步骤摘要】
一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡及其制备方法
本专利技术涉及复合纳米递药系统
，特别是涉及一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡及其制备方法。
技术介绍
在抗肿瘤治疗中同时使用多种药物进行治疗是常用手段，但是不同的药物很可能在溶解性质(亲疏水性)上有很大差异。目前临床及研究中常用的一些纳米药物载体都不具备同时大量装载两种或两种以上亲疏水性不同的药物的能力。例如，固体纳米粒多采用生物降解性高分子材料或高级脂肪酸制备，水溶性药物的装载性差，而且容易被富含内皮网状组织(如肝、脾)摄取，这类组织以外的肿瘤靶向性不理想。高分子胶束是指两亲性高分子在水中形成疏水内核和亲水外壳结构的自组装纳米粒，主要装载疏水性药物。脂质体是由磷脂为基本骨架，利用磷脂分子在水中的定向排列，构成的具有类似生物膜结构的双分子层微小囊泡。脂质体内含有亲水区，因此可以包裹水溶性药物，但对疏水药物的装载能力较差。由于磷脂疏水端构成的疏水双层不稳定，容易导致脂质体在血液循环过程中药物的过早泄漏。并且由于受磷脂种类的限制，脂质体作为给药系统其各方面性质的可调性非常差。由于这些不足，尽管目前市场上已有抗肿瘤药物的脂质体产品，但总体研发速度非常缓慢。脂质体纳米给药系统可以通过被动、主动或物理化学的作用机制实现肿瘤靶向给药，然而普通的纳米给药系统在释药行为上不具有特异性，药物载体虽然能够聚集在肿瘤部位，但包裹在载体内部的药物却往往不能及时释放出来，这使得治疗效果大打折扣。聚合物囊泡是一种良好的选择，其不同于脂质囊泡，是双层膜结构，与细胞膜有良好的相容性和渗透性，给药途径广泛，能提高药物增溶量、药物生物利用度和贮存稳定性，引起了普遍关注。此外，由于实体瘤与周围正常组织在酸度上的差异，pH响应性聚合物胶束已被广泛关注和研究，并显示出它们在更高效递送和快速药物释放方面的巨大潜力。利用这些特征，如果能够设计合适的pH敏感聚合物囊泡作为抗肿瘤药物载体，负载多种用于肿瘤诊断以及治疗的药物，就有可能实现在肿瘤部位定点释放药物。但是囊泡在体内的稳定性以及如何对胶质瘤的靶向性定位问题，是目前胶质瘤诊断和治疗过程中需要解决的。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡及其制备方法，以解决上述现有技术存在的问题，制得的靶向pH敏感性聚合物囊泡可以同时兼具CT成像和放疗功能以及药物治疗作用，为以后临床应用研究提供可靠的实验研究数据及理论基础。为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：本专利技术提供一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡，该聚合物囊泡的组成包含：以PCL-PEOz-MAL为膜材，外部偶联有靶标多肽Angiopep-2，以及负载金药复合物。作为本专利技术的进一步改进，金药复合物物包含广谱化疗药物多柔比星(DOX)以及金纳米颗粒组成的复合药物。本专利技术还提供了上述负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的制备方法，包括以下步骤：步骤1.用柠檬酸钠还原法制备纳米金颗粒；步骤2.用SH-PEG-NH2修饰步骤1得到的纳米金颗粒即AuNPs，离心，去上清液，将下层混匀4℃保存，所述离心转速为11000-13000rpm，优选12000rpm，温度为20℃，离心时间为10-15min；步骤3.配制浓度为1mg/ml的多柔比星,取80ul加入步骤2反应完成的溶液中，振荡，室温反应，离心，去上清液，将下层混匀，4℃保存，冷冻干燥后得到Au-DOX粉末，所述振荡时间为2-5min，所述室温反应时间为11-13小时，所述离心为在11000-13000rpm，20℃条件下离心10-15min，其中通过腙键将纳米金与化疗药物多柔比星偶联起来；步骤4.称量PCL-PEOz-MAL粉末溶于有机溶剂中，所述有机溶剂为二氯甲烷；步骤5.将步骤4中得到的混合溶液进行蒸发，使其中的有机溶剂充分挥发，形成薄膜，并放置于干燥箱中干燥；步骤6.取pH为7.0-8.2的磷酸盐缓冲液于烧杯中，加入步骤3得到的Au-DOX粉末，超声处理，形成溶液；步骤7.将步骤6中得到的溶液加入步骤5形成的薄膜内，水化至薄膜脱落，可得负载金药复合物的聚合物囊泡溶液，利用薄膜水化法制备聚合物囊泡的同时将水溶液中的金药复合物包入聚合物囊泡的水相中；步骤8.将Angiopep-2与步骤7所得产物避光搅拌反应，以超滤去除未反应的Angiopep-2以及游离的金药复合物，通过马来酰胺键将多肽Angiopep-2偶联在聚合物囊泡上，得到一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡。作为本专利技术的进一步改进，步骤1所述柠檬酸钠还原法制备纳米金颗粒为将氯金酸溶液溶于超纯水中，加热，迅速加入柠檬酸钠溶液，持续加热，待溶液变成酒红色后继续加热10-30分钟，而后冷却至室温；其中氯金酸溶液体积浓度为1％，柠檬酸钠体积浓度为1％，其中氯金酸、柠檬酸钠、超纯水体积比为1:5:100。作为本专利技术的进一步改进，步骤4PCL-PEOz-MAL粉末溶于有机溶剂二氯甲烷是按照10mg溶于4ml比例来进行添加。作为本专利技术的进一步改进，步骤5中的蒸发为减压旋转蒸发，蒸发时间为10min-15min，温度为20℃-25℃。作为本专利技术的进一步改进，步骤5干燥箱为40℃真空干燥箱，干燥时间为8h-12h。作为本专利技术的进一步改进，步骤7水化时间为6h-8h，温度为55℃-60℃。作为本专利技术的进一步改进，PCL-PEOz-MAL与Angiopep-2摩尔比为1∶1-1∶3，步骤8中，反应温度为20℃-25℃，反应时间为6h-12h。本专利技术还提供一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡在制备抗肿瘤药物中的应用。聚合物囊泡，是由具有双亲结构的嵌段共聚物自组装形成的一类高分子多聚体，具有稳定性高、通透性可设计以及可进一步功能化修饰等优点，此外，聚合物囊泡所具有疏水性的膜及巨大的亲水性的内腔，使其具有同时运载亲、疏水性药物的能力。由于聚合物囊泡的双层膜结构与细胞膜之间有良好的相容性，作为药物载体既可以降低药物的毒性和刺激性，又能保持药物的生理活性，达到低毒、高效、控释的目的，是理想的体内药物输送载体。PEOz是一种具有pH响应性的聚合物，其亲水链上包含一个叔酰胺基，该酰胺基易于与溶液系统中的氢离子结合，并与PEOz分子中的其他叔酰胺基形成氢键。在酸性条件下，大量氢键的形成将破坏核-壳结构，从而降低聚合物囊泡的稳定性并释放药物。由此可实现体内pH敏感递药。纳米金具有放疗增敏的作用，可以提高电离辐射对肿瘤组织的杀伤力，提高肿瘤放射治疗的疗效。此外，作为高质子量物质，金元素有显著的X射线衰减系数，是良好的CT示踪剂。由此可见，纳米金可以作为胶质瘤放射治疗及CT成像方面的一种新型放射增敏剂及良好的CT示踪剂。多柔比星为广谱抗肿瘤药，对机体可产生广泛的生物化学效应，具有强烈的细胞毒性作用。其作用机理主要是嵌入DNA而抑制核酸的合成。本专利技术利用聚合物囊泡进行包裹多柔比星，可以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡，其特征在于，该聚合物囊泡的组成包含：以PCL-PEOz-MAL为膜材，外表面偶联有靶标多肽Angiopep-2，以及内部负载有金药复合物。/n

【技术特征摘要】
1.一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡，其特征在于，该聚合物囊泡的组成包含：以PCL-PEOz-MAL为膜材，外表面偶联有靶标多肽Angiopep-2，以及内部负载有金药复合物。


2.根据权利要求1所述的一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡，其特征在于，所述金药复合物包含多柔比星以及金纳米颗粒。


3.一种如权利要求1或2所述的负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的制备方法，包括以下步骤：
步骤1.用柠檬酸钠还原法制备纳米金颗粒；
步骤2.用SH-PEG-NH2修饰步骤1得到的纳米金颗粒即AuNPs，离心去上清液，将下层混匀低温保存；
步骤3.配制浓度为1mg/ml的多柔比星,取80ul加入步骤2反应完成的溶液中，振荡，室温反应，离心去上清液，将下层混匀，低温保存，冷冻干燥后得到Au-DOX粉末；
步骤4.称量PCL-PEOz-MAL粉末溶于有机溶剂中，得到混合溶液；
步骤5.将步骤4中得到的混合溶液进行蒸发，使其中的有机溶剂充分挥发，形成薄膜，并放置于干燥箱中干燥；
步骤6.取pH为7.0-8.2的磷酸盐缓冲液于烧杯中，加入步骤3得到的Au-DOX粉末，超声处理，形成溶液；
步骤7.将步骤6中得到的溶液加入步骤5形成的薄膜内，水化至薄膜脱落；
步骤8.将Angiopep-2与步骤7所得产物避光搅拌反应，超滤去除未反应的Angiopep-2以及游离的金药复合物，获得最终产物。


4.根据权利要求3所述的一种负载金药复合物的靶向pH敏感性聚合物囊泡的制备方法，其特征在于，步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺晨，唐秋莎，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32