一种毛发中毒品荧光三联检试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种毛发中毒品荧光三联检试纸条及其制备方法，该试纸条将样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸依次搭接粘贴在底板上构成，所述的荧光标记物使用荧光微球替代以往的胶体金颗粒，大大提高了试纸灵敏度以及稳定性。本发明专利技术采用毛发作为检测样本，解决血液、尿液、唾液采样不便的问题，同时毛发样本能体现吸毒人员较长时间的吸毒情况，可以确定吸毒人员是否具有吸毒成瘾问题。相对于气相色谱、液相色谱、气质联用等检测技术，本发明专利技术的试纸可解决现场检测问题。即本发明专利技术为毒品检测提供了一种灵敏度高、稳定好的毛发中毒品三联检免疫荧光层析试纸，可应用于法医毒物检测以及相关案件侦破。

【技术实现步骤摘要】
一种毛发中毒品荧光三联检试纸条及其制备方法
本专利技术涉及生物检测领域，具体而言，涉及同时检测毛发中三种毒品的荧光联检试纸条及其制备方法。
技术介绍
毒品滥用危害极大，严重影响社会治安。毒品滥用不仅给吸毒者本人及其家庭带来严重危害，也诱发盗抢骗等一系列违法犯罪活动。长期滥用合成毒品还极易导致精神性疾病，由此引发的自伤自残、暴力伤害他人、“毒驾”等肇事肇祸案事件时有发生，给公共安全带来风险隐患。一直以来，在吸毒检测领域，检材一般仅限于唾液、血液或尿液样本，检材获取繁琐，配合度低下，检测效率低下，检测结果缺乏稳定度，同时由于样本的特殊性，也不适宜展开大规模的普遍性检测。而毛发检测技术，毛发样本提取更简便，无需特殊场所，不会侵犯受检人隐私问题，在最大程度保证了受检人的公民权益。另外毒品在唾液、血液或尿液样本中的毒品代谢速度很快，从24小时到几天不等，这些样本只能对吸毒人员进行即时检测，而毛发检测基于毒品代谢物会被毛发蛋白固定的原理，通过检测相应部位和长度的毛发，能够反映出较长一段时间内的被检测人是否具有吸毒行为，也就能确定吸毒人员是否具有吸毒成瘾的问题。在灵敏度上，与唾液、血液或尿液样本中的毒品μg/ml的检出级别对比，毛发中毒品检出能达到ng/mg的检出级别。毛发中毒品荧光三联检试纸条操作简单、快速、成本低、单条试纸可同时检测毛发中三个毒品，处理一份样本即可同时检测三个项目，大大节约了耗材的成本支出，同时，一个样本即可确定吸毒人员是否存在混合吸食或者转吸食另两种毒品的可能性，也解决了目前单条检测试纸仅能检测单个项目的问题，毛发中毒品荧光三联检试纸条在耗材支出及时间成本上都有极大优势。毛发中毒品荧光三联检试纸条采用的荧光定量免疫层析技术，是将免疫荧光与免疫层析技术相结合，克服了以胶体金标记为代表的传统免疫层析技术上的不足，朝向量化、多标记和直观检测方向发展的新型免疫检测技术。其基本特点为快速简便、灵敏度高、量化结果、读数稳定、结果重复性强。另一方面，相对于当前毛发毒品上机检测气相色谱、液相色谱、气质联用等方法，荧光定量免疫层析即解决了大型仪器无法现场/及时检测的问题也节约了检测时间以及经费成本问题。
技术实现思路
针对现有技术，本专利技术提供了一种毛发中毒品荧光三联检试纸条及其制备方法。本专利技术的技术方案如下：一种毛发中毒品荧光三联检试纸条检测样本为毛发，毛发采用超频物理研磨的方法研磨至粉末状再加入裂解液提取的方式，提取了毛发中毒品的裂解液直接滴加在三联检试纸条上进行检测，采用干式免疫荧光分析的方式，根据数据分析得出毛发中待测毒品的含量。具体使用步骤如下：步骤1)根据《涉毒人员毛发样本检测规范》，剪取被检测人A、B两份毛发，每份不少于50mg，其中一份装到离心管中，用超频震荡研磨仪将毛发研末至粉末状；步骤2)加入毛发裂解液1ml，充分混匀毛发粉末；步骤3)用滴管滴3滴(约80μl)裂解液至试纸样品垫上，试纸平铺，在毛细管层析作用下，裂解液分别通过第一类待测物检测区(T1)、第二类待测物检测区(T2)、第三类待测物检测区(T3)和质控区(C)；步骤4)15min后用干式免疫荧光检测仪对三联检试纸进行检测；步骤5)根据干式免疫荧光检测仪得出的数据，分别计算分析出三种毒品待检测物的含量。毛发裂解液组分由0.1M硼酸缓冲液、1MTris盐酸、0.1M吗啉乙磺酸以及其他试剂组成，PH值为7.0。在层析作用下，毛发裂解液在硝酸纤维素膜上分别通过三种检测线以及质控线，若样品中存在待检测物，则待测物将与结合垫上的荧光微球微球标记物形成“待检测物-抗体-荧光微球”复合物，“待检测物-抗体-荧光微球”复合物不再与硝酸纤维素膜上的待检测物抗原结合，则硝酸纤维素膜上待检测物检测区显示为阳性，若样品中不存在待检测物，则随着时间的推移，裂解液在硝酸纤维素膜上流动，其中结合垫上的荧光微球微球标记物将与硝酸纤维素膜上的待检测物抗原结合形成“抗体-荧光微球-抗原”复合物，硝酸纤维素膜上待检测物检测区显示为阴性，根据样品中待检测物的浓度变化，形成不同强度的荧光信号，用干式荧光读取仪进行检测，并与质控品标准曲线进行数据分析，计算得出待测样品中毒品含量一种毛发中毒品荧光三联检试纸条检测时间为15分钟，检测限为0.2ng/mg，质控品线性范围为1～100ng/ml，精密度偏差小于等于15％，线性系数大于等于0.9，质控品检测点检出值与标准值的相对偏差在正负15％以内。一种毛发中毒品荧光三联检试纸条包括样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、底板几个组成部分。其制备步骤如下：步骤1)将所述硝酸纤维素膜粘贴在所述底板固定位置；步骤2)将所述吸水纸粘贴在所述硝酸纤维素膜上部，吸水纸与硝酸纤维素膜之间保持1.5～2mm的重叠；步骤3)将所述荧光标记物结合垫粘贴在所述硝酸纤维素膜的下部底板上，荧光标记物结合垫与硝酸纤维素膜间有1.5～2mm的重叠；步骤4)荧光标记物结合垫另一端与所述样品垫连接，保持荧光标记物结合垫与样品垫有1.5～2mm的重叠。一种毛发中毒品荧光三联检试纸条，采用单条试纸同时检测三个项目的方式，荧光标记物结合垫上喷涂的是标记不同四种抗体的荧光微球混合物，同时避免了三个项目相互之间的检出影响问题：第一种微球标记了吗啡抗体，标记浓度为0.5～1.5mg/ml，喷涂时按照10％～20％的比例进行稀释；第二种微球标记了甲基苯丙胺抗体，标记浓度为1.0～2mg/ml，喷涂时按照5％～15％的比例进行稀释；第三种标记了氯胺酮抗体，标记浓度为1.0～2mg/ml，喷涂时按照5％～15％的比例进行稀释；第四种标记了羊抗兔IgG抗体，标记浓度为1.0～2mg/ml，喷涂时按照5％～15％的比例进行稀释。需要说明的是，一种毛发中毒品荧光三联检试纸条采用单条试纸同时检测三个项目的方式，其中硝酸纤维膜上有三条检测线和一条质控线，其制作过程如下：第一条检测线为吗啡检测线，包被有吗啡抗原-牛血清白蛋白复合物，浓度为0.3～1.0mg/ml，喷涂量为0.5～0.8μl/cm；第二条检测线为甲基苯丙胺检测线，包被有甲基苯丙胺抗原-牛血清白蛋白复合物，浓度为0.5～1.5mg/ml，喷涂量为0.5～0.8μl/cm；第三条检测线为氯胺酮检测线，包被有氯胺酮抗原-牛血清白蛋白复合物，浓度为0.5～1.5mg/ml，喷涂量为0.5～0.8μl/cm；质控线包被有羊抗兔抗体，浓度为0.5～1.0mg/ml，喷涂量为0.5～0.8μl/cm。本专利技术涉及荧光标记物结合垫上荧光微球标记物制备过程如下：步骤1)取荧光微球1mg，加入250μl的吗啉乙磺酸缓冲液，超声分散1～5min；步骤2)放置于高速冷冻离心机下离心5～15min，温度控制在4～10℃，离心速度为10000～16000rpm；步骤3)去除上清，加入240μl的吗啉乙磺酸缓冲液以及10μl的N-羟基琥本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种毛发中毒品荧光三联检试纸条，其特征在于，检测样本为毛发，毛发采用超频物理研磨至粉末状再加入裂解液的方式，使毛发中毒品充分释放，裂解液直接滴加在荧光定量联检试纸上进行检测，采用干式免疫荧光分析的方式，根据数据计算分析得出毛发中待测毒品的含量。/n

【技术特征摘要】
1.一种毛发中毒品荧光三联检试纸条，其特征在于，检测样本为毛发，毛发采用超频物理研磨至粉末状再加入裂解液的方式，使毛发中毒品充分释放，裂解液直接滴加在荧光定量联检试纸上进行检测，采用干式免疫荧光分析的方式，根据数据计算分析得出毛发中待测毒品的含量。


2.一种毛发中毒品荧光三联检试纸条，其特征在于，单条试纸可以同时检测到毛发中三种毒品并确定这三种毒品的含量，三个项目之间检出无交叉影响。


3.一种毛发中毒品荧光三联检试纸条，其特征在于，检测时间为15分钟，检测限为0.2ng/mg，质控品线性范围为1～100ng/ml，精密度偏差小于15％，线性系数大于等于0.9，质控品添加实际检出值与理论检出值的相对偏差在正负15％以内。


4.一种毛发中毒品荧光三联检试纸条，其特征在于，所述的试纸条包括样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、底板，底板在底部作为固定性材料，试纸条由加样端层析向上分别为样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸。


5.一种毛发中毒品荧光三联检试纸条，其特征在于，荧光标记物结合垫上喷涂的荧光微球标记有第一类待测物抗体、标...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦敏凤，曹佳坤，王泳钦，刘卓，王丽娜，彭媛媛，
申请(专利权)人：古镜科技深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44