一种甘草属药用亲缘关系的研究方法技术

本发明专利技术公开了一种甘草属药用亲缘关系的研究方法。包括有建立同时测定不同基源甘草中化学成分含量，然后建立不同基源甘草双波长HPLC指纹图谱，基于不同基源甘草中化学成分含量和双波长HPLC指纹图谱及相似度确定甘草属药用亲缘关系。本发明专利技术具有简单可靠的特点，为我国药用甘草种质资源分类鉴定、收集保存、合理开发利用及优良品种选育提供理论依据，同时希望能够找到野生优质甘草的替代资源，解决野生甘草资源严重匮乏的问题，对甘草资源的保护和可持续利用、促进甘草药材产业化生产的良好发展、保证甘草药材质量以及临床用药的安全性和有效性等方面都具有重要的科学意义和现实意义。

【技术实现步骤摘要】
一种甘草属药用亲缘关系的研究方法
本专利技术涉及一种亲缘关系的研究方法，特别是一种甘草属药用亲缘关系的研究方法。
技术介绍
甘草，豆科植物多年生草本，多生长在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠边缘和黄土丘陵地带。甘草属GlycyrrhizaLinn.全球约20个物种，在亚洲、欧洲、澳洲、美洲等地都有分布，我国有8个种，分为2个组——甘草组Sect.Glycyrrhiza和刺果甘草组Sect.PseudoglycyrrhizaE.U.Krug.，其中，甘草组Sect.Glycyrrhiza中包含甘草(GlycyrrhizauralensisFisch.)、光果甘草(GlycyrrhizaglabraL.又名洋甘草)、胀果甘草(GlycyrrhizainflateBatal.)、无腺毛甘草(GlycyrrhizaeglandulosaX.Y.Li.)和粗毛甘草(GlycyrrhizaasperaPall.)5个物种，刺果甘草组Sect.PseudoglycyrrhizaE.U.Krug.包含刺果甘草(GlycyrrhizapallidifloraMaxim.)、云南甘草(GlycyrrhizayunnanensisChengf.etL.K.DaiexP.C.Li)和圆果甘草(GlycyrrhizasquamulosaFranch.)3个物种。甘草根与根状茎粗壮，气微，味甜而特殊，是其主要的药用和化工用部位。2015版《中华人民共和国药典》中明确指出我国药用甘草为甘草(G.uralensisFisch.)、光果甘草(G.glabraL.)及胀果甘草(G.inflataBat.)的干燥根及根茎。具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药的功效。甘草的药用和商用价值很高。在我国，甘草作为大宗药材，素有“十方九草”之称，且由于其无毒，可以药食同源，被《神农本草经》列为上品。此外，甘草还用于生活、畜牧和化工的多个方面。作为甘草产出大国，我国甘草资源丰富，但也确实存在诸多问题：甘草全球分布范围较广，在亚洲、欧洲、澳洲、美洲等地均有分布，我国甘草更是遍布了黄河以北的各个省份以及云南四川等地。由于不同地区之间甘草的生存环境差异较大，导致不同地区甘草的遗传差异较大。甘草广泛的药用和商用价值促使甘草需求量逐年增加，野生甘草资源因大量采挖急剧下降。尽管建国以来，国家对其进行了资源保护的同时，并大力提倡人工种植，但部分研究结果表明，栽培甘草和野生甘草的有效成分含量差异较大，甚至部分栽培甘草的质量根本达不到《中华人民共和国药典》标准。此外，本专利技术研究人员还发现：人工种植甘草中存在诸多变异和杂交现象，很难界定它的分类以及明确其是否为药用甘草基源物种，这就使得甘草用药的安全性和有效性受到了很大质疑。从国外引进优良甘草种质进行选育或直接进口采购也是解决国内甘草市场资源短缺的问题的可行方法之一，但全球甘草属下物种较多，国外甘草种属在我国是否适合药用也是我们需要亟待解决的问题。除以上原因外，有些地区将非《药典》中规定的其它甘草物种作为甘草收购和使用，如在新疆石河子等地，因为无腺毛甘草根和根茎有甜味，在当地将其作为甘草收购和使用；此外，还有云南甘草、粗毛甘草在当地也有作药用甘草使用的习惯。研究甘草的著名教授李学禹先生也指出民间将刺果甘草作为药用。虽然他同时指出刺果甘草并非商品药材，但甘草作为根茎类药材，属内各物种外形相似，不易区分，故混用现象也屡见不鲜，药用情况混乱，严重影响了临床用药的有效性和安全性。基于以上原因，我们发现，想要维持甘草市场的稳定发展，甘草属植物资源的保护、优质品种的筛选和属内物种的准确鉴别显得尤为重要。而亲缘关系研究是解决上述问题的基础和有效方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种甘草属药用亲缘关系的研究方法。本专利技术具有简单可靠的特点，为我国药用甘草种质资源分类鉴定、收集保存、合理开发利用及优良品种选育提供理论依据，同时希望能够找到野生优质甘草的替代资源，解决野生甘草资源严重匮乏的问题，对甘草资源的保护和可持续利用、促进甘草药材产业化生产的良好发展、保证甘草药材质量以及临床用药的安全性和有效性等方面都具有重要的科学意义和现实意义。本专利技术的技术方案：一种甘草属药用亲缘关系的研究方法，包括有建立同时测定不同基源甘草中化学成分含量，然后建立不同基源甘草双波长HPLC指纹图谱，基于不同基源甘草中化学成分含量和双波长HPLC指纹图谱及相似度确定甘草属药用亲缘关系。前述的甘草属药用亲缘关系的研究方法中，所述建立同时测定不同基源甘草中化学成分含量包括有以下步骤；(1)对照品溶液的制备：精密称取芹糖甘草苷、甘草苷、芒柄花苷、甘草素、甘草酸、半甘草异黄酮B、光甘草定、芹糖异甘草苷、异甘草苷、刺甘草查尔酮、异甘草素、甘草香豆素、甘草查尔酮A和甘草酚适量分别于50mL容量瓶中，以50％乙醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度分别为0.0156、0.0319、0.0032、0.0040、0.0816、0.0016、0.0048、0.0101、0.0005、0.0008、0.0040、0.0002、0.0020mg·mL-1的混合对照品溶液；(2)分别取不同基源甘草药材粉末0.200g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％乙醇50mL，密塞，称定重量，超声提取30min，取出，放置至室温，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，通过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液，作为试品溶液；(3)将试品溶液与混合对照品溶液分别进行液相色谱进样测定，将色谱对比后，并分别计算出试品溶液中芹糖甘草苷、甘草苷、芒柄花苷、甘草素、甘草酸、半甘草异黄酮B、光甘草定、芹糖异甘草苷、异甘草苷、刺甘草查尔酮、异甘草素、甘草香豆素、甘草查尔酮A和甘草酚的含量；所述建立不同基源甘草双波长HPLC指纹图谱包括有以下步骤；(4)分别取不同基源甘草药材粉末0.200g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％乙醇50mL，密塞，称定重量，超声提取30min，取出，放置至室温，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，通过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液，作为试品溶液；(5)将试品溶液按进行梯度洗脱，记录色谱图谱，得到265nmHPLC图谱和365nmHPLC图谱，将265nmHPLC图谱和365nmHPLC图谱与国家药典委员会研制的中药色谱指纹图谱进行对比，得到不同基源甘草双波长HPLC指纹图谱及相似度。前述的甘草属药用亲缘关系的研究方法中，所述步骤(3)中的色谱条件为：色谱柱：资生堂CAPCELLPAK-C18MGⅡ250mm×4.6mmID，5μm；流动相：流速：0.8mL·min-1检测波长：265nm和365nm柱温：30℃进样量：20μL；前述的甘草属药用亲缘关系的研究方法中，所述步骤(5)中的色谱条件为：色谱柱：资生堂CAPCELLPAK-C18MGⅡ250mm×4.6mmID，5μm；...

【技术保护点】
1.一种甘草属药用亲缘关系的研究方法，其特征在于：包括有建立同时测定不同基源甘草中化学成分含量，然后建立不同基源甘草双波长HPLC指纹图谱，基于不同基源甘草中化学成分含量和双波长HPLC指纹图谱及相似度确定甘草属药用亲缘关系。/n

【技术特征摘要】
1.一种甘草属药用亲缘关系的研究方法，其特征在于：包括有建立同时测定不同基源甘草中化学成分含量，然后建立不同基源甘草双波长HPLC指纹图谱，基于不同基源甘草中化学成分含量和双波长HPLC指纹图谱及相似度确定甘草属药用亲缘关系。


2.根据权利要求1所述的甘草属药用亲缘关系的研究方法，其特征在于：所述建立同时测定不同基源甘草中化学成分含量包括有以下步骤；
(1)对照品溶液的制备：精密称取芹糖甘草苷、甘草苷、芒柄花苷、甘草素、甘草酸、半甘草异黄酮B、光甘草定、芹糖异甘草苷、异甘草苷、刺甘草查尔酮、异甘草素、甘草香豆素、甘草查尔酮A和甘草酚适量分别于50mL容量瓶中，以50％乙醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度分别为0.0156、0.0319、0.0032、0.0040、0.0816、0.0016、0.0048、0.0101、0.0005、0.0008、0.0040、0.0002、0.0020mg·mL-1的混合对照品溶液；
(2)分别取不同基源甘草药材粉末0.200g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％乙醇50mL，密塞，称定重量，超声提取30min，取出，放置至室温，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，通过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液，作为试品溶液；
(3)将试品溶液与混合对照品溶液分别进行液相色谱进样测定，将色谱对比后，并分别计算出试品溶液中芹糖甘草苷、甘草苷、芒柄花苷、甘草素、甘草酸、半甘草异黄酮B、光甘草定、芹糖异甘草苷、异甘草苷、刺甘草查尔酮、异甘草素、甘草香豆素、甘草查...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘育辰，刘刚，袁思文，
申请(专利权)人：贵州中医药大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52