一种改性硅藻土固定化含有葡萄糖异构酶细胞的方法技术

本发明专利技术涉及一种改性硅藻土固定化含有葡萄糖异构酶细胞的方法，所述方法是将含葡萄糖异构酶基因的基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体经缓冲液悬浮，制成菌悬液；向菌悬液中添加改性硅藻土，搅拌混匀，加入聚乙烯亚胺，然后再加入戊二醛进行交联，15～35℃搅拌交联0.5～5h后抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤后，粉碎成粒，得到含葡萄糖异构酶的固定化葡萄糖异构酶制剂；本发明专利技术所提供的固定化方法具有固定化材料成本低，操作简单，机械强度高，制备的固定化产葡萄糖异构酶重组大肠杆菌全细胞用于催化D‑葡萄糖生产D‑果糖，在60℃条件下，分批次反应重复使用40批次后，仍具有86％以上的残余酶活力；连续反应603h，时空产率为3.8kg/L/d，平均转化率大于42％，具有良好的工业化应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种改性硅藻土固定化含有葡萄糖异构酶细胞的方法(一)
本专利技术涉及一种改性硅藻土固定化含有葡萄糖异构酶细胞的方法。(二)
技术介绍
葡萄糖异构酶(Glucoseisomerase，GI)，又称木糖异构酶，能将D-葡糖转化成甜度比蔗糖更高的D-果糖，是工业上利用生物转化法生产果葡糖浆(HighFructoseCornSyrup，HFCS)的关键酶。HFCS是一种以玉米淀粉为原料，经液化、糖化、连续异构化加工成的D-葡萄糖和D-果糖组成的混合糖糖浆。果葡糖浆作为天然的甜味剂，具有溶解度高、化学和热稳定性好、渗透压大、吸潮性和保湿性强、与其它添加剂混合不影响食品风味等优势，广泛应用于食品、软饮料、医药等行业。葡萄糖异构酶在适宜的反应条件下，可以表现出较高的异构化性能，但在工业生产中游离酶的活性大幅度降低、稳定性差、不可重复使用、分离困难，大大降低游离酶在实际生产中的应用。为了克服上述游离酶在实际生产中的弊端，可将其固定化，固定化酶(细胞)是通过物理、化学的方法把酶细胞固定成具有高活力、水不溶性、颗粒状的固定化制剂，以实现生产的连续化、自动化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种改性硅藻土固定化含有葡萄糖异构酶细胞的方法，所述方法包括：/n(1)硅藻土改性：取适量天然硅藻土加入到2～3倍体积的5～6M的盐酸溶液中，充分反应后去离子水洗涤至中性，重新悬浮于H

【技术特征摘要】
1.一种改性硅藻土固定化含有葡萄糖异构酶细胞的方法，所述方法包括：
(1)硅藻土改性：取适量天然硅藻土加入到2～3倍体积的5～6M的盐酸溶液中，充分反应后去离子水洗涤至中性，重新悬浮于H2SO4浓度60～80％、HNO3浓度10～20％的混合酸中，40～50℃超声处理2～3h，冷却至室温，抽滤后用去离子水洗涤至中性。，得到氧化后的硅藻土加水搅拌制浆，置于马福炉中于500～600℃下焙烧2～3h，然后过滤、干燥、过筛制得到改性硅藻土，干燥储存备用；
(2)异构酶固定化：将含有葡萄糖异构酶的湿菌体用磷酸盐缓冲液悬浮，获得菌悬液；向菌悬液中加入改性硅藻土，在室温、600～700rpm条件下水浴搅拌20～30min；再加入质量浓度3～5％的聚乙烯亚胺水溶液，在室温、600～700rpm条件下水浴搅拌交联0.5～2h；然后加入质量浓度5～10％的戊二醛水溶液，在室温、600～700rpm条件下水浴搅拌交联0.5～2h，抽滤，滤饼用磷酸盐缓冲液清洗1～2次，粉碎，即获得葡萄糖异构酶固定化细胞；所述改性硅藻土与湿菌体质量之比为0.01～0.4:1。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中硅藻土质量与混合酸体积之比为1g：5～10mL。


3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中聚乙烯亚胺水溶液用量为0.3～0.7mL/g湿菌体。


4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中戊二醛水溶液用量为0.1～2.0mL/g湿菌体。


5.如权利要求1所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：金利群，柳志强，陈贤筱，贾东旭，张晓健，金怡婷，万克柔，李勉，郑裕国，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33