一种高产檀香油的重组酵母菌及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种高产檀香油的重组酵母菌及其构建方法与应用，方法为：1)利用同源重组的方式将强启动子驱动的酿酒酵母菌来源的乙酰乙酰‑CoA硫解酶基因等基因，以及弱启动子驱动的CYP450还原酶基因整合入出发菌株酿酒酵母BY4742基因组；2)替换重组菌体内角鲨烯合酶基因的启动子；敲除半乳糖调节蛋白80基因等基因；3)在多拷贝游离型质粒中插入强启动子驱动的檀香烯合酶基因和CYP450单加氧酶基因得到表达质粒，并导入步骤(2)获得的重组酿酒酵母菌中，得到高产檀香油的重组酿酒酵母菌。本发明专利技术克服了檀香油的生产均为从檀木中提取的不足，重组酵母菌株每升檀香油产量达到1g。满足工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种高产檀香油的重组酵母菌及其构建方法与应用
本专利技术属于基因工程领域，涉及一种通过基因工程改造优化的高产檀香油的酵母菌株及其构建方法与应用。
技术介绍
檀香油(SandalwoodOil)属于倍半萜类化合物，主要存在于檀木的芯材中，是广泛应用的香料。檀香油主组分是四种醇的混合物，分别是α-檀香醇(α-santalol)，α-exo-bergamotol,epi-β-santalol和β-檀香醇(β-santalol)，其中，决定檀香油品质的是檀香醇的含量(BaldoviniN,DelasalleC,JoulainD.PhytochemistryoftheheartwoodfromfragrantSantalumspecies:areview[J].FlavourandFragranceJournal,2011,26(1):7-26.)，檀香油因其浓郁的芳香，广泛应用于化妆品、香水和芳香保健领域(PageT,SouthwellI,RussellM,etal.GeographicandPhenotypicVariationinHeartwood本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.高产檀香油的重组酿酒酵母菌的构建方法，其特征包括如下步骤：/n1)利用同源重组的方式将强启动子驱动的酿酒酵母菌来源的乙酰乙酰-CoA硫解酶基因、HMG-CoA合酶基因、截短型HMG-CoA还原酶基因、甲羟戊酸激酶基因、磷酸甲羟戊酸激酶基因、甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因、异戊烯基焦磷酸异构酶基因、法尼基焦磷酸合酶基因、人工合成的3-磷酸甘油脱氢酶基因，以及弱启动子驱动的CYP450还原酶基因整合入出发菌株酿酒酵母BY4742基因组；/n2)用SEQ NO.1所示序列替换步骤(1)获得的重组菌体内角鲨烯合酶基因的启动子；敲除半乳糖调节蛋白80基因、第一种焦磷酸磷酸酶基因和第二种焦磷酸磷酸酶基因；/...

【技术特征摘要】
1.高产檀香油的重组酿酒酵母菌的构建方法，其特征包括如下步骤：
1)利用同源重组的方式将强启动子驱动的酿酒酵母菌来源的乙酰乙酰-CoA硫解酶基因、HMG-CoA合酶基因、截短型HMG-CoA还原酶基因、甲羟戊酸激酶基因、磷酸甲羟戊酸激酶基因、甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因、异戊烯基焦磷酸异构酶基因、法尼基焦磷酸合酶基因、人工合成的3-磷酸甘油脱氢酶基因，以及弱启动子驱动的CYP450还原酶基因整合入出发菌株酿酒酵母BY4742基因组；
2)用SEQNO.1所示序列替换步骤(1)获得的重组菌体内角鲨烯合酶基因的启动子；敲除半乳糖调节蛋白80基因、第一种焦磷酸磷酸酶基因和第二种焦磷酸磷酸酶基因；
3)在多拷贝游离型质粒中插入强启动子驱动的檀香烯合酶基因和CYP450单加氧酶基因得到表达质粒，并导入步骤(2)获得的重组酿酒酵母菌中，得到高产檀香油的重组酿酒酵母菌。


2.如权利要求1所述的构建方法，其特征是所述强启动子是诱导型双向强启动子GAL1-10，所述诱导型双向强启动子GAL1-10的核苷酸序列如SEQNO.2所示。


3.如权利要求1所述的构建方法，其特征是所述弱启动子为弱启动子GAL3，弱启动子GAL3的核苷酸序列如SEQNO.3所示，所述乙酰乙酰-CoA硫解酶基因的NCBI数据库编号为856079，HMG-CoA合酶基因的NCBI数据库编号为854913，截短型HMG-CoA还原酶基因的核苷酸序列如SEQNO.4所示，甲羟戊酸激酶基因的NCBI数据库编号为855248，磷酸甲羟戊酸激酶基因的NCBI数据库编号为855260，甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因的NCBI数据库编号为855779，异戊烯基焦磷酸异构酶基因的NCBI数据库编号为855986，法尼基焦磷酸合酶基因的NCBI数据库编号为853272，人工合成的3-磷酸甘油脱氢酶基因的核苷酸序列如SEQNO.5所示，CYP450还原酶基因的核苷酸序列如SEQNO.6所示。


4.如权利要求1所述的构建方法，其特征是所述角鲨烯合酶基因的NCBI数据库编号为856597，所述角鲨烯合酶基因的启动子为所述角鲨烯合酶基因上游500个核苷酸序列，所述半乳糖调节蛋白80基因的NCBI数据库编号为854954，所述第一种焦磷酸磷酸酶基因的NCBI数据库编号为852114，所述第二种焦磷酸磷酸酶基因的NCBI数据库编号为851878。


5.如权利要求1所述的构建方法，其特征是所述多拷贝游离型质粒为酿酒酵母多拷贝游离型质粒pRS426。


6.如权利要求1所述的构建方法，其特征是所述檀香烯合酶基因的核苷酸序列如SEQNO.7或SEQNO.8所示，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张雁，张立新，胡逸灵，
申请(专利权)人：天津大学，华东理工大学，
类型：发明
国别省市：天津;12