一种代谢改造酿酒酵母降低黄酒中氨基甲酸乙酯含量的方法技术

本发明专利技术涉及一种代谢改造酿酒酵母降低黄酒中氨基甲酸乙酯含量的方法，属于发酵和生物技术领域。其代谢改造的过程包括酿酒酵母CAR1基因敲除组件的构建、酵母转化、阳性克隆子筛选、黄酒酿造验证试验等步骤。以以酿酒酵母尿嘧啶缺陷型为筛选标记，构建精氨酸酶编码基因CAR1的敲除组件，通过同源重组获得敲除了CAR1基因的酵母工程菌。该工程在进行黄酒发酵试验时，能够减少发酵液中尿素和EC的含量，提高黄酒饮用的安全性。利用本发明专利技术获得的酵母工程菌为原养型菌株，代谢工程改造对其生长和发酵性能没有影响而且酵母工程菌的基因组不含外源基因，具有一定的生物安全性，更容易被大众所接受，具有潜在的应用可能性。

【技术实现步骤摘要】
一种代谢改造酿酒酵母降低黄酒中氨基甲酸乙酯含量的方法
本专利技术涉及发酵和生物
具体的涉及一种代谢改造酿酒酵母降低黄酒中氨基甲酸乙酯含量的方法。技术背景氨基甲酸乙酯(Ethylcarbamate，简称EC)，又名尿烷(Urethane)，广泛存在于发酵食品(如腐乳、酱油等)、酿造酒(如黄酒、清酒、葡萄酒、苹果酒等)和蒸馏酒(如威士忌、白兰地等)中。据文献报道，我国黄酒中EC含量普遍高于清酒和葡萄酒，最高达1210μg·L-1。黄酒中EC含量偏高的问题由来已久，不仅带来了严峻的食品安全问题，同时也使黄酒的出口受到严重限制，是我国黄酒产业的一个重要安全隐患。因此，探索适合我国黄酒企业控制EC含量的措施，降低黄酒中EC的含量，对于我国黄酒产业的发展具有重大意义。研究表明，发酵食品和酒精饮品中的EC主要由尿素和瓜氨酸等氨甲酰化合物与乙醇反应生成。在相同的反应条件下，黄酒中的尿素与乙醇反应形成EC的速率约为相同浓度的瓜氨酸与乙醇反应形成EC速率的3倍。因此，尿素是黄酒中形成EC的主要前体物质，而黄酒中的尿素主要由酿酒酵母Sacchar本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种代谢改造酿酒酵母降低黄酒中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于：/n(1)CAR1基因敲除组件的构建；/n(2)将所述组件转入酿酒酵母的尿嘧啶缺陷型突变株，并筛选阳性克隆子。/n

【技术特征摘要】
1.一种代谢改造酿酒酵母降低黄酒中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特征在于：
(1)CAR1基因敲除组件的构建；
(2)将所述组件转入酿酒酵母的尿嘧啶缺陷型突变株，并筛选阳性克隆子。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述CAR1基因敲除组件由酿酒酵母CAR1基因的上游同源臂(CAR1L)、下游同源臂(CAR1R)和完整的URA3基因组成，不含外源基因，具有一定的生物安全性。


3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述扩增URA3基因的引物序列如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示，扩增CAR1基因的引物序列如SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴殿辉，陆健，李晓敏，蔡国林，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32