一种利用基于树莓状金基底的拉曼仪检测鸭肉中残留抗生素的方法技术

一种利用基于树莓状金基底的拉曼仪检测鸭肉中残留抗生素的方法，利用鸭肉提取液稀释抗生素标准溶液，得到了含不同浓度抗生素的模拟液，将其与树莓状金溶胶混合，利用便捷式拉曼光谱仪进行扫描，得到该浓度范围的SERS光谱图；然后与标准溶液的SERS谱图的主要特征峰进行对比指认，同时计算模拟液的SERS峰积分强度与呋喃西林、呋喃妥因浓度之间的线性关系，判断检测范围和下限。制备的树莓状金溶胶因其独特的结构使得其在大粒径下仍具有很强的拉曼增强效果，很好的满足了785nm便携式拉曼仪对基底的要求。可用于检测鸭肉中的呋喃西林、呋喃妥因含量，且检测限为0.05mg/L，相较于普通金基底的检测下限增强了100倍。

【技术实现步骤摘要】
一种利用基于树莓状金基底的拉曼仪检测鸭肉中残留抗生素的方法
本专利技术涉及一种利用基于树莓状金基底的拉曼仪检测鸭肉中残留抗生素的方法，具体是指利用便捷式拉曼仪对鸭肉中残留的抗生素进行定性、定量检测的方法，属于食品安全、药品检测领域。
技术介绍
硝基呋喃类抗生素主要是指呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃它酮，对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌、某些真菌和原虫均有杀灭作用。这类抗生素曾经被广泛用于家禽、家畜、水产、蜂等动物传染病的预防与治疗，部分品种具有促生长的作用，曾被用作药物饲料添加剂。但近代有关研究证明，硝基呋喃类药物及其代谢物具有较强的毒副作用，能诱导有机体基因突变，有致畸胎的诱导作用，且能诱发癌症，因而引起了人们的高度重视。我国卫生部于2010年3月22日将硝基呋喃类药物列入可能违法添加的非食用物质黑名单。但最新调查显示，每年约有6000吨抗生素用于饲料添加剂，25％的抗生素被动物机体吸收，我国仍面临抗生素监管难题。随着社会对畜禽中抗生素污染的重视，SERS作为一种新兴的光谱分析技术，近年来在食品、临床、药品检测领域飞速发展。SERS分析技术具有操作简单、检测快速、成本低廉的特点。目前市场通用的便携式拉曼仪使用的激发光为785nm，普通的金、银溶胶因尺寸增长而SERS效果减弱，限制了其在便携式拉曼仪中的使用，便携式拉曼仪的检测灵敏度也一直难以突破。本专利技术将树莓状金溶胶应用于便携式拉曼仪中以实现对鸭肉中残留抗生素的检测，其操作简单便捷、灵敏度高、成本低，可以广泛应用于各种家禽养殖及其加工领域的抗生素残留检测。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题为提供一种利用基于树莓状金基底的拉曼仪检测鸭肉中残留抗生素的方法，该方法操作简单便捷、灵敏度高、成本低，可快速对食品中硝基呋喃类抗生素进行定性定量分析及检测。为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案为：一种利用基于树莓状金基底的拉曼仪检测鸭肉中残留抗生素的方法，步骤如下：1)、制备树莓状金溶胶：采用柠檬酸钠还原硝酸银得到银纳米溶胶作为种子溶液备用；以十六烷基三甲基溴化铵溶液、氯金酸、超纯水，混匀后加入L-抗坏血酸溶液，摇匀，混合溶液由淡黄色变为无色作为生长液；将银种子溶液加入生长液中反应，得到表面粗糙、部分空心的树莓状金溶胶；2)、鸭肉预处理：剔膜鸭肉与乙酸乙酯混合涡旋、超声、离心后取上清液，残留物重复提取一次，将两次提取得到的上清液合并，加入正己烷和二氯甲烷涡旋、离心，加热至干，再用丙酮定容，最后用有机滤膜过滤得到鸭肉提取液；3)、标准溶液的SERS检测：将配制的待测呋喃西林、呋喃妥因标准液分别与树莓状金基底混合并滴加在硅片上，用激发光源为785nm的激光拉曼光谱仪进行扫描，分别得到呋喃西林和呋喃妥因标准溶液的SERS光谱图；4)、模拟液的SERS检测：取呋喃西林、呋喃妥因分别加入至鸭肉提取液中，配制多组梯度浓度系列的呋喃西林鸭肉提取液、呋喃妥因鸭肉提取液作为模拟液，将模拟液与树莓状金溶胶基底混合并滴加在硅片上，用激发光源为785nm的激光拉曼光谱仪进行扫描，得到该系列浓度范围的SERS光谱图；然后分别与呋喃西林标准溶液、呋喃妥因标准溶液的SERS谱图的主要特征峰进行对比指认，同时计算模拟液的SERS峰积分强度与呋喃西林、呋喃妥因浓度之间的线性关系，判断检测范围和下限。作为本专利技术检测方法的优选技术方案，步骤2)鸭肉预处理步骤如下：用分析天平称取5g搅碎的剔膜鸭肉放入50mL离心管中，加入20mL乙酸乙酯涡旋1min，超声振荡10min，再用离心机4000r/min离心10min后取上清液，离心管中的残留物按上述步骤再重复提取一次，将两次提取得到的上清液合并；取10mL提取液，加入15mL正己烷和15mL二氯甲烷涡旋2min，用离心机4000r/min离心10min，60℃水浴加热至干，再用10mL丙酮定容，最后用0.45μm有机滤膜过滤得到鸭肉提取液。作为本专利技术检测方法的优选技术方案，步骤3)标准溶液的SERS检测步骤如下：用分析天平称取10mg呋喃西林置于50mL烧杯中，加入丙酮用玻璃棒搅拌，取100mL容量瓶定容至100mg/L；用分析天平称取10mg呋喃妥因置于50mL烧杯中，加入丙酮用玻璃棒搅拌，取100mL容量瓶定容至100mg/L；分别取0.05mL呋喃西林标准溶液、呋喃妥因标准溶液于5mL试管中，向其中滴加0.05mL树莓状金溶胶振荡、摇匀后滴加在硅片上，待混合液风干后再滴加0.05mL的树莓状金溶胶；用激发光源为785nm的激光拉曼光谱仪扫描呋喃西林、呋喃妥因标准溶液，扫描时间为5-20s，得到呋喃西林、呋喃妥因标准溶液的SERS光谱图；确定呋喃西林的特征峰为1551cm-1，1473cm-1，1343cm-1，1234cm-1，1174cm-1，1015cm-1，962cm-1；确定呋喃妥因的特征峰为1600cm-1，1488cm-1，1339cm-1，1256cm-1，1182cm-1，1019cm-1，968cm-1。作为本专利技术检测方法的优选技术方案，步骤4)模拟液的SERS检测步骤如下：用分析天平称取10mg呋喃西林，取100mL容量瓶加入鸭肉提取液定容至100mg/L，用丙酮溶液将呋喃西林鸭肉提取液依次稀释到10mg/L，5mg/L，1mg/L，0.1mg/L，0.05mg/L；用分析天平称取10mg呋喃妥因，取100mL容量瓶加入鸭肉提取液定容至100mg/L，用丙酮溶液将呋喃妥因鸭肉提取液依次稀释到10mg/L，5mg/L，1mg/L，0.1mg/L，0.05mg/L；分别取0.05mL呋喃西林鸭肉提取液、呋喃妥因鸭肉提取液于5mL试管中，向其中滴加0.05mL树莓状金溶胶振荡、摇匀后滴加在硅片上，待混合液风干后再滴加0.05mL的树莓状金溶胶；用激发光源为785nm的激光拉曼光谱仪进行扫描，扫描时间为5-20s；扫描呋喃西林鸭肉提取液，得到浓度范围在0.05～10mg/L呋喃西林鸭肉提取液的SERS光谱图，比对呋喃西林鸭肉提取液的SERS光谱图与呋喃西林标准溶液的SERS光谱图的主要特征峰匹配，且在1343cm-1处峰的SERS信号强度与鸭肉中呋喃西林的浓度存在良好的线性关系，检测限为0.05mg/L；扫描呋喃妥因鸭肉提取液，得到浓度范围在0.05～10mg/L呋喃妥因鸭肉提取液的SERS光谱图，比对呋喃妥因鸭肉提取液的SERS光谱图与呋喃妥因标准溶液的SERS光谱图的主要特征峰匹配，且在1600cm-1处峰的SERS信号强度与鸭肉中呋喃妥因的浓度存在良好的线性关系，检测限为0.05mg/L。相对于现有技术，本专利技术的有益效果表现如下：1)、制备的树莓状金溶胶，形貌为表面粗糙、部分空心结构，其表面等离子共振吸收峰(SPR)可随其粒子尺寸的增大而红移，与785nm激发光更匹配，同时其粗糙表面和部分空心结构可形成强的SERS热点，故SERS检测灵敏度高。同时，其独特的粗糙表面和部本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用基于树莓状金基底的拉曼仪检测鸭肉中残留抗生素的方法，其特征在于，步骤如下：/n1)、制备树莓状金溶胶：采用柠檬酸钠还原硝酸银得到银纳米溶胶作为种子溶液备用；以十六烷基三甲基溴化铵溶液、氯金酸、超纯水，混匀后加入L-抗坏血酸溶液，摇匀，混合溶液由淡黄色变为无色作为生长液；将银种子溶液加入生长液中反应，得到表面粗糙、部分空心的树莓状金溶胶；/n2)、鸭肉预处理：剔膜鸭肉与乙酸乙酯混合涡旋、超声、离心后取上清液，残留物重复提取一次，将两次提取得到的上清液合并，加入正己烷和二氯甲烷涡旋、离心，加热至干，再用丙酮定容，最后用有机滤膜过滤得到鸭肉提取液；/n3)、标准溶液的SERS检测：将配制的待测呋喃西林、呋喃妥因标准液分别与树莓状金基底混合并滴加在硅片上，用激发光源为785nm的激光拉曼光谱仪进行扫描，分别得到呋喃西林和呋喃妥因标准溶液的SERS光谱图；/n4)、模拟液的SERS检测：取呋喃西林、呋喃妥因分别加入至鸭肉提取液中，配制多组梯度浓度系列的呋喃西林鸭肉提取液、呋喃妥因鸭肉提取液作为模拟液，将模拟液与树莓状金溶胶基底混合并滴加在硅片上，用激发光源为785nm的激光拉曼光谱仪进行扫描，得到该系列浓度范围的SERS光谱图；然后分别与呋喃西林标准溶液、呋喃妥因标准溶液的SERS谱图的主要特征峰进行对比指认，同时计算模拟液的SERS峰积分强度与呋喃西林、呋喃妥因浓度之间的线性关系，判断检测范围和下限。/n...

【技术特征摘要】
1.一种利用基于树莓状金基底的拉曼仪检测鸭肉中残留抗生素的方法，其特征在于，步骤如下：
1)、制备树莓状金溶胶：采用柠檬酸钠还原硝酸银得到银纳米溶胶作为种子溶液备用；以十六烷基三甲基溴化铵溶液、氯金酸、超纯水，混匀后加入L-抗坏血酸溶液，摇匀，混合溶液由淡黄色变为无色作为生长液；将银种子溶液加入生长液中反应，得到表面粗糙、部分空心的树莓状金溶胶；
2)、鸭肉预处理：剔膜鸭肉与乙酸乙酯混合涡旋、超声、离心后取上清液，残留物重复提取一次，将两次提取得到的上清液合并，加入正己烷和二氯甲烷涡旋、离心，加热至干，再用丙酮定容，最后用有机滤膜过滤得到鸭肉提取液；
3)、标准溶液的SERS检测：将配制的待测呋喃西林、呋喃妥因标准液分别与树莓状金基底混合并滴加在硅片上，用激发光源为785nm的激光拉曼光谱仪进行扫描，分别得到呋喃西林和呋喃妥因标准溶液的SERS光谱图；
4)、模拟液的SERS检测：取呋喃西林、呋喃妥因分别加入至鸭肉提取液中，配制多组梯度浓度系列的呋喃西林鸭肉提取液、呋喃妥因鸭肉提取液作为模拟液，将模拟液与树莓状金溶胶基底混合并滴加在硅片上，用激发光源为785nm的激光拉曼光谱仪进行扫描，得到该系列浓度范围的SERS光谱图；然后分别与呋喃西林标准溶液、呋喃妥因标准溶液的SERS谱图的主要特征峰进行对比指认，同时计算模拟液的SERS峰积分强度与呋喃西林、呋喃妥因浓度之间的线性关系，判断检测范围和下限。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)鸭肉预处理步骤如下：
用分析天平称取5g搅碎的剔膜鸭肉放入50mL离心管中，加入20mL乙酸乙酯涡旋1min，超声振荡10min，再用离心机4000r/min离心10min后取上清液，离心管中的残留物按上述步骤再重复提取一次，将两次提取得到的上清液合并；
取10mL提取液，加入15mL正己烷和15mL二氯甲烷涡旋2min，用离心机4000r/min离心10min，60℃水浴加热至干，再用10mL丙酮定容，最后用0.45μm有机滤膜过滤得到鸭肉提取液。


3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)标准溶液的SERS检测步骤如下：
用分析天平称取10mg呋喃西林置于50mL烧杯中，加入丙酮用玻璃棒搅拌，取100mL容量瓶定容至100mg/L；用分析天平称取10mg呋喃妥因置于50mL烧杯中，加入丙...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴义平，刘艺，程正忠，唐学飞，刘洪林，
申请(专利权)人：合肥学院，
类型：发明
国别省市：安徽;34