用于选择性扩增表达具有鼠恒定区的TCR的细胞的方法技术

本申请公开了选择性扩增许多T细胞的方法。该方法可包括：修饰人T细胞以表达TCR，其中TCR包括鼠恒定区；产生细胞群，其包括表达TCR的许多人T细胞和不表达TCR的许多人T细胞；以及在(i)经辐照的饲养细胞，(ii)一种或多种细胞因子，和(iii)抗体或其抗原结合部分的存在下培养所述细胞群，其中抗体对TCR的鼠恒定区具有抗原特异性，以便选择性扩增表达TCR的T细胞数目超过未表达TCR的T细胞数目。本申请还公开了相关细胞群、药物组合物以及治疗或预防癌症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于选择性扩增表达具有鼠恒定区的TCR的细胞的方法相关申请的交叉引用本专利申请要求2017年10月5日提交的第62/568,339号美国临时专利申请的权益，其通过引用整体并入本文。关于联邦政府资助的研究或开发的声明本专利技术是由美国国立卫生研究院国家癌症研究所(NationalInstitutesofHealth,NationalCancerInstitute)在政府支持下完成的，项目号为Z1ABC010985。政府拥有本专利技术的某些权利。通过引用并入以电子方式提交的材料通过引用整体并入本文的是与此同时提交并且标识如下的计算机可读核苷酸/氨基酸序列表：日期为2018年9月24日的一个名为“740358_ST25.txt”的8,876字节ASCII(文本)文件。专利技术背景通过施用经修饰以表达外源性T细胞受体(TCR)的细胞来治疗癌症在一些患者中产生了阳性临床结果。然而，仍然存在此类疗法更广泛成功的障碍。例如，编码外源性TCR的基因的低递送效率可能导致表达外源性TCR的细胞数目较低。因此，对产生表达外源性TCR的细胞的改进方法的需求尚未得到满足。专利技术简述本专利技术的实施方案提供了选择性扩增多个T细胞的方法，所述方法包括：修饰人T细胞以表达TCR，其中TCR包含鼠恒定区；产生细胞群，其包含多个表达TCR的人T细胞和多个不表达TCR的人T细胞；以及在(i)辐照的饲养细胞、(ii)一种或多种细胞因子和(iii)抗体或其抗原结合部分的存在下培养细胞群，其中抗体对TCR的鼠恒定区具有抗原特异性，以便选择性扩增表达TCR的T细胞的数目超过未表达TCR的T细胞的数目。本专利技术的另外实施方案提供了包含根据本专利技术的方法制备的选择性扩增的多个T细胞的相关细胞群，以及包含所述细胞群的药物组合物。本专利技术的又一个实施方案提供了治疗或预防哺乳动物中的癌症的方法的方法，该方法包括根据本专利技术的方法选择性扩增多个T细胞，并以有效治疗或预防哺乳动物中的癌症的量向哺乳动物施用选择性扩增的多个T细胞。若干附图视图的简述图1A是说明编码人TCRα链可变区(hVα)、鼠TCRα链恒定区(mCα)、合成接头序列(L)、人TCRβ链可变区(hVβ)和鼠TCRβ链恒定区(mCβ)的核苷酸构建体的示意图。图1B是说明根据本专利技术的实施方案选择性扩增表达mTCR的多个T细胞的方法的示意图。图2显示了实验数据(点状图)，说明了在经历使用OKT3Ab的标准快速扩增方案(REP)或使用H57Ab的选择性扩增的抗-突变的ERBB2mTCR或抗-突变的ERBB2IPmTCR-电穿孔的细胞(ERBB2mutTCR或ERBB2IPmutTCR)中通过FACS检测到的(i)CD3、CD4或CD8表达和(ii)mTCRβ表达。仅用电穿孔缓冲液电穿孔的T细胞(模拟物；无DNA/TCR)用作阴性对照。点状图中的数目是检测到的mTCR+细胞的百分比。图3A和3B是显示抗-突变的ERBB2IPmTCRβ+(ERBB2IPmutTCR)(A)或抗-突变的ERBB2(ERBB2mutTCR)mTCRβ+(B)细胞在用各种浓度(ng/mL)的H57Ab选择性扩增之后检测到还表达CD3、CD4或CD8的百分比(％)的图。仅用电穿孔缓冲液电穿孔的T细胞(模拟物；无DNA/TCR)用作阴性对照。用OKT3Ab进行标准REP而不是用H57Ab进行选择性扩增的电穿孔的细胞用作非特异性T细胞生长的阳性对照。图4A是说明根据本专利技术的实施方案选择性扩增表达包含鼠恒定区(mTCR)的TCR的多个T细胞的方法的示意图。图4B是说明H57Ab与TCR的鼠TCRβ链恒定区(mCβ)的结合的示意图。TCR的其他组分包括人TCRα链可变区(hVα)、鼠TCRα链恒定区(mCα)、合成接头序列(L)和人TCRβ链可变区(hVβ)。图5A-5D显示了在未转染的未染色的细胞(A)、未转染的染色细胞(B)、仅用电穿孔缓冲液(模拟物)电穿孔的细胞(无TCR/转座子(Tn))(C)和用编码mTCR(4149-TCRa2b2/pSBSO)的SBTS质粒和编码实施例3中所述的转座酶的SBTS质粒电穿孔的细胞(pKan-CMV-SB11)(D)中通过FACS检测的说明CD3表达和鼠TCRβ链(mTCRβ)表达的实验数据(点状图)。点状图中的数字是CD3+/mTCRβ+(右上象限)、CD3+/mTCRβ-(右下象限)、CD3-/mTCRβ-(左下象限)和CD3-/mTCRβ+细胞(左上象限)的百分比。图6显示了实验数据(点状图)，说明了在指定起始数目的电穿孔的细胞下经历用指定浓度的H57Ab(ng/mL)进行选择性扩增的mTCR-电穿孔的细胞(REP中的mTCR+细胞)中通过FACS检测到的CD3表达和mTCRβ表达。仅用电穿孔缓冲液(模拟物)(无TCR)电穿孔的细胞用作阴性对照。点状图中的数字是CD3+/mTCRβ+(右上象限)、CD3+/mTCRβ-(右下象限)、CD3-/mTCRβ-(左下象限)和CD3-/mTCRβ+细胞(左上象限)的百分比。图7显示了实验数据(点状图)，说明了在经历用H57Ab或OKT3Ab进行的第二次扩增并染色或未染色的mTCR-电穿孔的细胞中通过FACS检测到的CD3表达和mTCRβ表达。还显示了实验数据(点状图)，说明了在经历用OKT3Ab进行的第二次扩增的mTCR-电穿孔的细胞中通过FACS检测到的CD4和CD8表达。图8A和8B显示了实验数据(点状图)，说明了在扩增前(快速扩增方案(REP)前)通过FACS检测到的未转导(UT)(图8B)和转导的(图8A)细胞的CD8表达和抗-MART-1TCR表达。图8C显示了实验数据(点状图)，说明了通过FACS检测到的扩增前(前-REP)和稀释至约5％mTCRb+细胞之后图8A的转导细胞的CD8表达和抗-MART-1TCR表达。图9显示了实验数据(点状图)，说明了用(i)50CU或500CU的IL-2和(ii)OKT3Ab或H57Ab(“mTCRb”)扩增后，通过FACS检测到的UT细胞或图8C的经稀释的转导细胞的CD8表达和抗-MART-1TCR表达。图10A是显示了用(i)50CU或500CU的IL-2和(ii)OKT3Ab或H57Ab(“mTCRb”)扩增后，检测到的UT细胞或图8C的稀释的转导细胞的转导细胞百分比的图。图10B是显示了用(i)50CU或500CUIL-2和(ii)OKT3Ab或H57Ab(“mTCRb”)扩增后，UT细胞或图8C的稀释的转导细胞实现的倍数扩增的图。图11A-11C显示了实验数据(点状图)，说明了在UT细胞(图11A)或在四倍稀释之前(图11B)和之后(图11C)用抗-MART-1TCR转导的细胞扩增之前通过FACS检测到的CD8表达和mTCRb表达。图12A-12E显示了实验数据(点状图)，说明了在用OKT3和500CUIL-2(图12A)、H57(mTCRb)和500CUIL-2(图1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.选择性扩增多个T细胞的方法，所述方法包括：/n修饰人T细胞以表达TCR，其中所述TCR包含鼠恒定区；/n产生包含多个表达所述TCR的人T细胞和多个不表达所述TCR的人T细胞的细胞群；和/n在(i)经辐照的饲养细胞、(ii)一种或多种细胞因子以及(iii)抗体或其抗原结合部分的存在下，培养所述细胞群，其中所述抗体能特异性结合所述TCR的鼠恒定区，以便选择性扩增表达所述TCR的T细胞数目超过不表达所述TCR的T细胞数目。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171005 US 62/568,3391.选择性扩增多个T细胞的方法，所述方法包括：
修饰人T细胞以表达TCR，其中所述TCR包含鼠恒定区；
产生包含多个表达所述TCR的人T细胞和多个不表达所述TCR的人T细胞的细胞群；和
在(i)经辐照的饲养细胞、(ii)一种或多种细胞因子以及(iii)抗体或其抗原结合部分的存在下，培养所述细胞群，其中所述抗体能特异性结合所述TCR的鼠恒定区，以便选择性扩增表达所述TCR的T细胞数目超过不表达所述TCR的T细胞数目。


2.根据权利要求1所述的方法，其还包括使用所述抗体或其抗原结合部分将表达所述TCR的T细胞与不表达所述TCR的T细胞分离。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述TCR对癌抗原具有抗原特异性。


4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述TCR对病毒抗原具有抗原特异性。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述一种或多种细胞因子包括IL-2、IL7、IL-12、IL-15和IL-21中的一种或多种。


6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其还包括在(i)经辐照的同种异体饲养细胞和经辐照的自体饲养细胞中的一种或两种、(ii)一种或多种细胞因子和(iii)能特异性结合人CD3复合物的抗体或其抗原结合部分的存在下培养所述人T细胞。


7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述抗体能特异性结合所述TCR的β链的鼠恒定区。


8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中修饰人T细胞以表达TCR包括使用兆核酸酶、锌指核酸酶、转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)或成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)-...

【专利技术属性】
技术研发人员：德鲁·C·丹尼格尔，史蒂文·A·费尔德曼，史蒂文·A·罗森伯格，
申请(专利权)人：美国卫生和人力服务部，
类型：发明
国别省市：美国;US