用于癌症早期检测的试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术提供了用于癌症早期检测的试剂盒及检测方法，该试剂盒包括：检测PRKY、HOXD3b、HOXA7或者GSTP1基因位点的DNA甲基化水平的引物探针组合物，DNA聚合酶及反应体系。通过发明专利技术，能够通过对PRKY、HOXD3b、HOXA7或者GSTP1基因目标位点的DNA甲基化水平予以快速、高特异性检测，具有灵敏度高，特异性强，操作简便快捷等优点，可为临床医生对前列腺癌、肾癌或者膀胱癌早期诊断及鉴别诊断提供重要参考。

【技术实现步骤摘要】
用于癌症早期检测的试剂盒及检测方法
本专利技术涉及分子检测领域，尤其涉及用于癌症早期检测的试剂盒及检测方法。
技术介绍
前列腺癌是世界范围内高发和主要的致死癌症之一。肿瘤的早期诊断早期治疗非常重要，是治疗后生存率的关键决定因素。早期肿瘤由于肿瘤细胞负荷小，其特征性分子的改变往往不明显，难以与慢性疾病分辨。但一般来说分子改变早于临床影像学改变，分子检测依然是肿瘤早期诊断及鉴别诊断的最重要最有希望的手段。申请人经过检索后发现，公开号为CN109182518A的中国专利技术专利公开了一种基于焦磷酸测序技术的GSTP1基因启动子甲基化测序方法。本专利技术的目标基因甲基化位点与CN109182518A不同，权利要求覆盖也几乎没有相同点。临床检测对检测性能参数是有相当要求的，一个科研可以用的检测方法往往不一定能应用到临床检测，需要进行大量的优化及临床样品验证。本专利技术的重点是该组合基因或单个基因特异性的甲基化位点甲基化水平的检测在临床上的应用价值而不是焦磷酸测序方法学本身。
技术实现思路
本专利技术的目的在于揭示用于癌症早期检测的试剂盒及检测方法，实现对前列腺癌、肾癌或者膀胱癌的早期筛查与诊断。为实现上述第一个专利技术目的，本专利技术提供了一种用于癌症早期检测的试剂盒，包括：检测PRKY、HOXD3b、HOXA7或者GSTP1基因位点的DNA甲基化水平的引物探针组合物，DNA聚合酶及反应体系。作为本专利技术的进一步改进，所述引物探针组合物包括：用于检测PRKY基因位点的DNA甲基化水平且核苷酸序列为SEQNO.1至SEQNO.3的引物探针组合物；用于检测HOXD3b基因位点的DNA甲基化水平且核苷酸序列为SEQNO.4至SEQNO.6的引物探针组合物；用于检测HOXA7基因位点的DNA甲基化水平且核苷酸序列为SEQNO.7至SEQNO.9的引物探针组合物；用于检测GSTP1基因位点的DNA甲基化水平且核苷酸序列为SEQNO.10至SEQNO.12的引物探针组合物；用于检测内参基因beta-actin且核苷酸序列为SEQNO.13至SEQNO.15的引物探针组合物。作为本专利技术的进一步改进，甲基化目标检测基因可以按不同组合使用。作为本专利技术的进一步改进，甲基化目标检测基因可以单独使用。作为本专利技术的进一步改进，目标检测基因的甲基化区域保持不变，但扩增引物及/或探针序列部分或全部改变。作为本专利技术的进一步改进，试剂盒的检测结果对癌症的早期诊断及鉴别诊断提供参考。作为本专利技术的进一步改进，所述癌症为前列腺癌、肾癌或者膀胱癌。同时，本申请还揭示了基于上述任一专利技术创造所揭示的用于癌症早期检测的试剂盒的检测方法，使用检测系统对检测材料进行检测。作为本专利技术的进一步改进，所述检测材料是人外周血游离DNA或分离的循环肿瘤细胞。作为本专利技术的进一步改进，所述检测材料是人尿液或前列腺按摩后尿液或前列腺按摩液细胞沉渣或活检组织提取的DNA。作为本专利技术的进一步改进，目标检测基因的甲基化区域保持不变，但扩增引物及/或探针序列部分或全部改变。作为本专利技术的进一步改进，检测结果对癌症的早期诊断及鉴别诊断提供参考。作为本专利技术的进一步改进，所述癌症为前列腺癌、肾癌或者膀胱癌。作为本专利技术的进一步改进，所述检测系统包括：qPCR检测法，焦磷酸测序检测法，芯片检测法，质谱法检测法或者高通量测序检测法。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：通过专利技术，能够通过对PRKY、HOXD3b、HOXA7或者GSTP1中的一种或者几种基因位点的DNA甲基化水平予以快速、高特异性检测，具有灵敏度高，特异性强，操作简便快捷等优点，可为临床医生对前列腺癌、肾癌或者膀胱癌的早期诊断及鉴别诊断提供重要的医学参考。附图说明图1为通过本专利技术所揭示的基于癌症早期检测试剂盒的检测方法针对PRKY基因位点的DNA甲基化水平进行检测的扩增曲线；图2为通过本专利技术所揭示的基于癌症早期检测试剂盒的检测方法针对HOXD3b基因位点的DNA甲基化水平进行检测的扩增曲线；图3为通过本专利技术所揭示的基于癌症早期检测试剂盒的检测方法针对HOXA7基因位点的DNA甲基化水平进行检测的扩增曲线；图4为通过本专利技术所揭示的基于癌症早期检测试剂盒的检测方法针对GSTP1基因位点的DNA甲基化水平进行检测的扩增曲线。具体实施方式下面结合附图所示的各实施方式对本专利技术进行详细说明，但应当说明的是，这些实施方式并非对本专利技术的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，均属于本专利技术的保护范围之内。在本申请中，术语“sec”是时间单位：秒；术语“min”是时间单位：分钟。术语“mM”是浓度单位：毫摩尔每升。实施例一：一种用于癌症早期检测的试剂盒(以下简称“试剂盒”)，包括：检测PRKY、HOXD3b，HOXA7或者GSTP1中的一种或者几种基因位点的DNA甲基化水平的引物探针组合物、DNA聚合酶及反应体系。该试剂盒用于对上述一种或者几种基因位点的DNA甲基化水平的特异性检测，且通过该试剂盒对前列腺癌、肾癌或者膀胱癌予以早期诊断。DNA聚合酶为Taq酶，反应体系由PCR缓冲液、dNTPs和MgCl2组成。内参基因beta-actin作为持家基因(Home-keepingGene，HKG)，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白。它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。从而为PRKY，HOXD3b，HOXA7，GSTP1基因位点的DNA甲基化水平进行检测，以对上述一种或者几种目标基因位点的DNA甲基化进行基因检测提供准确的参考依据。具体分析时对目标基因扩增Ct值与样本actin扩增Ct值得的比值进行比较分析。在本实施例中，特异性探针的3’端标均记有荧光淬灭基团，特异性探针的5’端均标记有荧光报告基团；其中，荧光淬灭基团选自DABCYL、MGB、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3或Phosphorothioate中的任意一种；所述荧光报告基团选自FAM、HEX、TET、JOE、NED、VIC、CY3、CY5、ROX或TAMRA中的任意一种。不同基因组合使用时使用不同的荧光基团。本专利技术所揭示的引物探针组合物的序列设计如下表1所示表1.引物及探针序列E:荧光基团，Q:淬灭基团。实施例二：结合图1至图4所示，本实施例揭示了一种基于癌症早期检测试剂盒的检测方法(以下简称“检测方法”)，包括以下步骤(1)至步骤(4)。该检测方法基于实施例一所揭示的试剂盒予以实现。步骤(1)提取生物检材样本。该生物检材样本选择人外周血或者人尿液细胞沉渣。具体的，使用STRECK管采集早期前列腺癌确诊病人(初诊，且前列腺癌未发生转移)外周血10ml，混匀后送检；同时，采本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于癌症早期检测的试剂盒，其特征在于，包括：/n检测PRKY、HOXD3b、HOXA7或者GSTP1基因位点的DNA甲基化水平的引物探针组合物，DNA聚合酶及反应体系。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于癌症早期检测的试剂盒，其特征在于，包括：
检测PRKY、HOXD3b、HOXA7或者GSTP1基因位点的DNA甲基化水平的引物探针组合物，DNA聚合酶及反应体系。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述引物探针组合物包括：
用于检测PRKY基因位点的DNA甲基化水平且核苷酸序列为SEQNO.1至SEQNO.3的引物探针组合物；
用于检测HOXD3b基因位点的DNA甲基化水平且核苷酸序列为SEQNO.4至SEQNO.6的引物探针组合物；
用于检测HOXA7基因位点的DNA甲基化水平且核苷酸序列为SEQNO.7至SEQNO.9的引物探针组合物；
用于检测GSTP1基因位点的DNA甲基化水平且核苷酸序列为SEQNO.10至SEQNO.12的引物探针组合物；
用于检测内参基因beta-actin且核苷酸序列为SEQNO.13至SEQNO.15的引物探针组合物。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，甲基化目标检测基因可以按不同组合使用。


4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，甲基化目标检测基因可以单独使用。


5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，目标检测基因的甲基化区域保持不变，但扩增引物及/或探针序列部分或全部改变。...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱桂春，于垚垚，姚鲁帅，盛青松，
申请(专利权)人：无锡市申瑞生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32