一种可检测多种DNA糖基化酶活性的方法技术

本发明专利技术涉及一种用于检测DNA糖基化酶的检测体系，包括：(a)双链DNA探针，所述双链DNA探针包括T1和T2两条链，并且所述T1和T2两条链可形成双链DNA结构；其中，所述T1链包括：至少一个可被待测DNA糖基化酶识别的碱基、荧光基团和分离标签；并且所述荧光基团和分离标签分别位于所述至少一个可被DNA糖基化酶识别的碱基的两端；(b)可使核酸脱碱基位点的糖苷‑磷酸键断裂的组分；和(c)带有分离结合标签的固相载体。本发明专利技术的检测体系通量高、需要样品量低、信号窗口大、操作简便、成本低、且能够检测多种DNA糖基化酶。

【技术实现步骤摘要】
一种可检测多种DNA糖基化酶活性的方法
本专利技术属于生物分析
，具体涉及一种可检测多种DNA糖基化酶活性的方法及其应用。
技术介绍
BER(碱基切除修复)通路是修复由氧化、烷基化和脱氨基所引起的内源性DNA碱基损伤的主要途径。其中DNA糖基化酶是BER通路中的重要环节，包括：UDG(尿嘧啶DNA糖基化酶)、TDG(胸腺嘧啶DNA糖基化酶)和OOG1(8-羟基鸟嘌呤DNA糖基化酶)等。DNA糖基化酶可以特异性切除受损或错配核苷酸上的N-β-糖苷键，在DNA链上形成脱碱基位点(AP位点)。接着AP核酸内切酶会把受损核苷酸的糖苷-磷酸键切开，并移去包括AP位点核苷酸在内的小片段DNA，并由DNA聚合酶I合成新的片段，最终由DNA连接酶把两者连成新的被修复DNA链，完成DNA损伤修复。DNA糖基化酶的异常表达与人类疾病密切相关，因此对DNA糖基化酶活性的快速、准确、方便、高通量检测对于临床诊断和靶向抑制剂的研发具有重要意义。现有的传统方法如使用荧光标记底物的凝胶电泳法灵敏度偏低，需要样品量大，通量低，不适合定量分析；用放射同位素标记底物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测DNA糖基化酶的检测体系，其特征在于，所述检测体系包括：/n(a)双链DNA探针，所述双链DNA探针包括T1和T2两条链，并且所述T1和T2两条链可形成双链DNA结构；/n其中，所述T1链包括：至少一个可被待测DNA糖基化酶识别的碱基、荧光基团和分离标签；/n并且所述荧光基团和分离标签分别位于所述至少一个可被DNA糖基化酶识别的碱基的两端；/n(b)可使核酸脱碱基位点的糖苷-磷酸键断裂的组分；和/n(c)带有分离结合标签的固相载体。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测DNA糖基化酶的检测体系，其特征在于，所述检测体系包括：
(a)双链DNA探针，所述双链DNA探针包括T1和T2两条链，并且所述T1和T2两条链可形成双链DNA结构；
其中，所述T1链包括：至少一个可被待测DNA糖基化酶识别的碱基、荧光基团和分离标签；
并且所述荧光基团和分离标签分别位于所述至少一个可被DNA糖基化酶识别的碱基的两端；
(b)可使核酸脱碱基位点的糖苷-磷酸键断裂的组分；和
(c)带有分离结合标签的固相载体。


2.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述至少一个可被待测DNA糖基化酶识别的碱基为一个尿嘧啶碱基。


3.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述(b)为NaOH溶液。


4.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述检测体系还包括待测DNA糖基化酶。


5.如权利要求1或4所述的检测体系，其特征在于，所述待测DNA糖基化酶选自下组：UDG、TDG或SMUG1。


6.如权利要求1、4或5所述的检测体系，其特征在于，所述待测DNA糖基化酶的浓度范围为1至500nM，较佳地为1至5...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅新元，闫娟，毛卓，郭剑南，杨盛莲，
申请(专利权)人：上海仕谱生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31