衣壳修饰的RAAV3载体组合物以及在人肝癌基因治疗中的用途制造技术

本发明专利技术涉及衣壳修饰的RAAV3载体组合物以及在人肝癌基因治疗中的用途.本发明专利技术公开了下一代多重突变衣壳蛋白修饰的rAAV表达载体，以及包含所述表达载体的感染性病毒体、组合物和药物制剂.还公开了这些高转导效率载体构建体的制备方法和在多种治疗应用中的使用方法，尤其包括作为用于使用体内和/或离体基于病毒载体的基因治疗方案来治疗或改善受影响哺乳动物中的一种或更多种疾病或异常状况的递送物质.还公开了多重突变衣壳修饰的rAAV表达载体、病毒颗粒和感染性病毒体的大规模生产方法，以及所公开的组合物在制备用于多种体外和/或体内治疗方法之药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】
衣壳修饰的RAAV3载体组合物以及在人肝癌基因治疗中的用途本申请是申请号为201480041247.6的中国专利申请的分案申请，原申请是2014年5月21日提交的PCT国际申请PCT/US2014/039015于2016年1月20日进入中国国家阶段的申请。相关申请的交叉引用本国际专利申请要求2013年5月21日提交的美国专利申请No.13/899,481(未决；代理人案卷号36689.331)的优先权，其是2009年12月31日提交的美国专利申请No.12/595,196(现在的美国专利No.8,445,267；代理人案卷号36689.305)的部分继续申请，申请No.12/595,196是2008年4月8日提交的PCT国际专利申请No.PCT/US2008/059647(国家化；代理人案卷号36689.272)的美国国家阶段文件，国际专利申请No.PCT/US2008/059647要求2007年4月9日提交的美国临时专利申请No.60/910,798(期满的，代理人案卷号36689.266)的优先权。每一个前述申请的内容均通过明确提及以其整体并入本文。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.rAAV 3载体，其包含经修饰衣壳蛋白，所述经修饰衣壳蛋白包含：/n(a)在对应于SEQ ID NO：3示出的野生型AAV3衣壳蛋白的Y252、Y272、Y444、Y701、Y705和Y731的一个或更多个位置处的非酪氨酸残基；/n(b)在对应于SEQ ID NO：3示出的野生型AAV3衣壳蛋白的S459或S663的一个或更多个位置的每个位置处的非丝氨酸残基；/n(c)在对应于SEQ ID NO：3示出的野生型AAV3衣壳蛋白的T251或T492的一个或更多个位置的每个位置处的非苏氨酸残基；/n(d)在对应于SEQ ID NO：3示出的野生型AAV3衣壳蛋白的K528、K533或K545的...

【技术特征摘要】
20130521 US 13/899,4811.rAAV3载体，其包含经修饰衣壳蛋白，所述经修饰衣壳蛋白包含：
(a)在对应于SEQIDNO：3示出的野生型AAV3衣壳蛋白的Y252、Y272、Y444、Y701、Y705和Y731的一个或更多个位置处的非酪氨酸残基；
(b)在对应于SEQIDNO：3示出的野生型AAV3衣壳蛋白的S459或S663的一个或更多个位置的每个位置处的非丝氨酸残基；
(c)在对应于SEQIDNO：3示出的野生型AAV3衣壳蛋白的T251或T492的一个或更多个位置的每个位置处的非苏氨酸残基；
(d)在对应于SEQIDNO：3示出的野生型AAV3衣壳蛋白的K528、K533或K545的一个或更多个位置的每个位置处的非赖氨酸残基；
(e)在SEQIDNO：3示出的野生型AAV3衣壳蛋白的(i)Y701或Y705位处的非酪氨酸残基；和(ii)Y705或Y731位处的非酪氨酸残基，或S663位处的非丝氨酸残基；
(f)(a)、(b)、(c)和(d)中所列的三个或更多个氨基酸替换的组合；其各自被非天然氨基酸替换；
(g)(a)、(b)、(c)和(d)中所列的四个或更多个氨基酸替换的组合；其各自被非天然氨基酸替换；或者
(h)(a)、(b)、(c)和(d)中所列的五个或更多个氨基酸替换的组合；其各自被非天然氨基酸替换；或者，其中每个氨基酸替换位于任意一种其他野生型载体血清型中对应的等同氨基酸位置处，所述其他野生型载体血清型选自：AAV1、AAV2、AAV4、AAV5、AAV7、AAV8、AAV9和AAV10，其分别在SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：4、SEQIDNO：5、SEQIDNO：7、SEQIDNO：8、SEQIDNO：9和SEQIDNO：10中示出。


2.根据权利要求1所述的rAAV3载体，其中所述非丝氨酸残基选自：苯丙氨酸(F)、缬氨酸(V)、组氨酸(H)、异亮氨酸(I)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、天冬氨酸(D)、天冬酰胺(N)、谷氨酸(E)、精氨酸(R)和异亮氨酸(I)；或者所述非酪氨酸、非赖氨酸或非苏氨酸残基选自：丝氨酸(S)、苯丙氨酸(F)、缬氨酸(V)、组氨酸(H)、异亮氨酸(I)、丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、天冬氨酸(D)、天冬酰胺(N)、谷氨酸(E)、精氨酸(R)和异亮氨酸(I)。


3.根据权利要求1或权利要求2所述的rAAV3载体，其中所述三个或更多个氨基酸替换的组合包括在一种或更多种以下氨基酸残基组合处的非天然氨基酸替换：在SEQIDNO：3中示出的野生型AAV3衣壳蛋白的以下位置：
(a)Y701F、Y705F和Y731F；
(b)Y705F、Y731F和S663V；
(c)Y705F、Y731F和T492V；
(d)Y705F、Y731F、K533R；
(e)S663V、T492V和K533R；
(f)Y705F、Y731F、S663V和T492V；或
(g)Y705F、Y731F、S663V、T492V和K533R，
或者在分别于SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：4、SEQIDNO：5、SEQIDNO：6、SEQIDNO：7、SEQIDNO：8、SEQIDNO：9或SEQIDNO：10中示出的任一种对应野生型AAV1、AAV2、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9或AAV10衣壳蛋白的任一种的等同表面暴露氨基酸残基处，或者其任意组合。


4.根据前述权利要求中任一项所述的rAAV3载体，其中包含所述载体的病毒体在选定的哺乳动物宿主细胞中的转导效率是包含对应未经修饰rAAV3载体之病毒体的转导效率的约2倍至约50倍。


5.根据前述权利要求中任一项所述的rAAV3载体，其中包含所述载体的病毒体在选定的哺乳动物宿主细胞中的转导效率是包含对应未经修饰rAAV3载体之病毒体转导效率的约6倍至约40倍。


6.根据前述权利要求中任一项所述的rAAV3载体，其中包含所述载体的病毒体在选定的哺乳动物宿主细胞中的转导效率是包含对应未经修饰rAAV3载体之病毒体的转导效率的约8倍至约30倍。


7.根据前述权利要求中任一项所述的rAAV3载体，其中与包含对应未经修饰rAAV3载体的病毒体相比，包含所述载体的病毒体在引入到哺乳动物细胞中时对泛素化更不易感。


8.根据前述权利要求中任一项所述的rAAV3载体，其中所述载体还包含编码诊断剂、治疗剂或化学治疗剂的核酸区段，所述核酸区段与能够在包含所述载体的合适宿主细胞中表达所述核酸区段的启动子有效连接。


9.根据权利要求8所述的rAAV3载体，其中所述核酸区段还包含与所述核酸区段有效连接的增强子、转录后调控序列、多腺苷酸化信号或其任意组合。


10.根据前述权利要求中任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿伦·斯里瓦斯塔瓦，钟理，谢尔盖·佐洛图欣，乔治·V·阿斯拉尼迪，马维斯·阿格班杰麦克纳，基姆·M·万弗利特，
申请(专利权)人：佛罗里达大学研究基金会有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US