人类中AAV基因疗法的手段和方法技术

本发明专利技术涉及用于人类中基于AAV的基因疗法的手段和方法。特别地，本发明专利技术涉及人类患者的治疗，所述人类患者可能被怀疑具有针对打算用于所述治疗的AAV的抗体。

The means and methods of AAV gene therapy in human

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人类中AAV基因疗法的手段和方法专利
本专利技术涉及用于人类中基于AAV的基因疗法的手段和方法。特别地，本专利技术涉及人类患者的治疗，所述人类患者可能被怀疑具有针对打算用于所述治疗的AAV的抗体。专利技术背景腺相关病毒(AAV)被认为是用于人类基因疗法最有希望的病毒载体之一。AAV具有有效感染分裂人类细胞以及非分裂人类细胞的能力。野生型AAV病毒基因组整合到宿主细胞基因组中的单个染色体位点中，并且最重要的是，即使AAV存在于许多人类中，其也并未与任何疾病相关。鉴于这些优点，重组腺相关病毒(rAAV)正在B型血友病、恶性黑素瘤、囊性纤维化和其他疾病的基因疗法临床试验中进行评估。大量的临床试验和欧洲的基因疗法药物如Alipogenetiparvovec(，uniQure)的批准，有望使AAV成为临床实践的主体。成功施用AAV载体的一个主要挑战是克服在暴露于基于野生型AAV或AAV的载体后发展的中和抗体(免疫球蛋白)(NAb)的存在。在这两种情况下，针对病毒衣壳蛋白的中和血清型特异性抗体可降低用相同血清型AAV的基因转移效率。与其他血清型相比，观察到人类中针对AAV5血清型的特有的(endemic)NAB滴度相对较低(Boutinetal.，HumGeneTher2010，21：704-712)。在用AAV治疗人类中，已经报道了如此低的特有的NAB滴度影响转导并导致转基因表达严重降低(Mannoetal.，NatureMedicine，2006，12(3)，342-347)。因此，该领域的普遍共识是避免治疗具有完全NAB滴度的患者。因此，目前临床上关于预先存在的免疫力的实践涉及对人类患者进行筛选以排除应该具有针对AAV衣壳的中和抗体的患者(Brimbleetal.ExpertOpinBiolTher2016，16(1)：79-92和Boutinetal.HumGeneTher2010，21：704-712)。为了减少第一次施用时NAb的形成以允许第二次施用，已经尝试了免疫抑制方案(Cortietal.，MolTher-MethClinDev(2014)1，14033；Mingozzietal.MolThervol.20no.7，1410-1416；McIntoshetal.GeneTher2012，19，78-85))。此外，已经提出了克服预先存在的抗体的策略，其包括血浆置换和免疫抑制方案的使用(例如Chicoineetal.，MolTher2014，vol.22no.2338-347；Hurlbutetal.MolTher2010，vol.18no.111983-1984andMingozzietal.MolThervol.20no.7，1410-1416)。这些策略已在动物模型中测试，其得到了有限的成功。因此，本领域需要使得能够在具有或可能怀疑具有AAV中和抗体的人类患者中施用rAAV基因疗法载体。专利技术简述现在，本专利技术人已经出乎意料地发现，特别是对于AAV5基因疗法载体，并且与现有技术的建议相反，具有特有的预先存在的抗AAV5抗体(即由特有的暴露所致的预先存在的抗AAV5抗体)的人类患者可被视为适合于进行治疗。这与现有技术中应将中和抗体的存在视作排除标准(例如对于参加临床试验的患者)的看法相反。换句话说，现有技术的看法是，具有针对AAV5的抗体，更特别是针对AAV5的特有的预先存在的抗体的患者不被认为适合于进行用AAV5基因疗法载体的治疗。本文公开的令人惊讶的发现是，具有特有的预先存在的抗AAV5抗体的人类患者可以被认为适合于进行治疗，该发现不仅涉及例如发现具有非常低水平的预先存在的抗AAV5抗体的人类患者的亚群，更确切的说，该发现基本上涉及大多数(如果不是全部)人类群体中针对预先存在的抗AAV5抗体评分为阳性并且先前未进行过任何AAV5基因疗法的患者。因此，一方面，本专利技术提供了用于人类患者的医学治疗用途的AAV5基因疗法载体，其中所述人类患者没有用确定抗AAV5抗体的测定来进行预筛选，并且其中在所述医学治疗之前，所述人类未进行过AAV5基因疗法载体的医学治疗。换句话说，提供了用于人类的医学治疗用途的AAV5基因疗法载体，其中抗AAV5抗体的状态未知，并且其中所述人类在进行所述医学治疗之前未进行AAV5基因疗法载体的医学治疗。根据一个方面，本专利技术使以下成为可能：治疗以前没有用AAV5基因疗法载体治疗过的患者或将以前没有用AAV5基因疗法载体治疗过的患者包括在临床试验中，而不用在医学治疗之前筛选抗AAV5抗体的存在。在另一方面，提供了用于人类的医学治疗用途的AAV5基因疗法载体，其中所述人类用确定抗AAV5抗体的测定进行预筛选，并且其中在所述医学治疗之前，所述人类未进行过AAV5基因疗法载体的医学治疗，如在人类中所观察到的，所述人类具有对应于至多第100个百分点的抗AAV5抗体水平，优选至多第95个百分点的抗AAV5抗体水平。优选地，所述人类患者对于抗AAV5抗体的测试为阳性。附图说明图1：预处理样品的NAb测定结果。A：十个预给药样品的中和结果。百分之五十的标记显示为虚线。B：三个阳性样品3、4、5的曲线拟合结果。通过非线性回归拟合四参数曲线。滴度计算为拟合的曲线通过50％标记(在水平轴上方显示)时的理论稀释度。图2A：AAV5中和抗体与总抗AAV5抗体的比较。群体筛选研究中报告的中和(NAb)滴度与总(TAb)ELISA结果的比较。每个空心符号代表一个健康个体的成对的NAb和TAb结果。所治疗患者的NAb和TAb结果重叠显示(▲，指定的研究对象3、4和5)。图2B：AAV5NAb滴度与FIX水平的比较。将第1组给药后FIX活性的百分比针对给药前NAb滴度作图。图3：AAVNAb滴度标度。描绘了针对AAV5的NAb滴度的人类群体百分比(50个对象)。注意到在人类群体中观察到的NAb滴度完全不落入在AAV5治疗的人类患者中观察到的NAb滴度。图4.描绘的是野生型AAV5的VP1氨基酸序列。在VP2的氨基酸起始位置(T，由于ACG起始位点)和VP3的氨基酸起始位置(M)下划线。图5.描绘的是杂合的VP1序列的VP1氨基酸序列，其由与AAV5衍生的VP2和VP3编码序列连接的N端AAV2衍生的VP1序列(带下划线)组成。VP1蛋白因此是杂合AAV2/AAV5衣壳蛋白。用于编码所述杂合VP1的AAV衣壳的表达构建体也可编码VP2和VP3序列，其将不是杂合VP2和VP3衣壳蛋白，而是野生型序列AAV5VP2和VP3蛋白。图6.显示的是野生型AAV5的VP1氨基酸序列，在野生型AAV5序列的第1位和第2位之间具有Ala插入。因此，VP1衣壳由具有插入的氨基酸的AAV5野生型序列组成，并且编码的VP2和VP3蛋白是未经修饰的野生型AAV5VP2和VP3蛋白。定义“AAV载体”是指通过使用分子方法衍生自野生型AAV的重组腺相关病毒(AAV)载体。AAV载体与野生型(wt)AAV载体有所区别，因为病毒基因组的至少一部分已被转基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于人类的医学治疗用途的AAV5基因疗法载体，其中所述人类没有用确定抗AAV5抗体的测定进行预筛选，并且其中在所述医学治疗之前，所述人类未进行过用AAV5基因疗法载体的医学治疗。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170710 EP 17180601.11.一种用于人类的医学治疗用途的AAV5基因疗法载体，其中所述人类没有用确定抗AAV5抗体的测定进行预筛选，并且其中在所述医学治疗之前，所述人类未进行过用AAV5基因疗法载体的医学治疗。


2.一种用于人类的医学治疗用途的AAV5基因疗法载体，其中所述人类用确定抗AAV5抗体的测定进行预筛选，并且其中在所述医学治疗之前，所述人类未进行过用AAV5基因疗法载体的医学治疗，所述人类所具有的抗AAV5抗体水平对应于在人类群体中所观察到的抗AAV5抗体水平的至多第95个百分点。


3.根据权利要求3所述的用于人类的医学治疗用途的AAV5基因疗法载体，其中所述人类针对抗AAV5抗体测试呈阳性。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的用于人类的医学治疗用途的AAV5基因疗法载体，其中所述AAV5基因疗法载体以对应于至少1012衣壳/kg的剂量施用。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的用于人类的医学治疗用途的AAV5基因疗法载体，其中所述AAV5基因疗法载体以对应于至少1012gc/kg体重的剂量使用。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的用于人类的医学治疗用途的AAV5基因疗法载体，其中所述AAV5基因疗法载体用于治疗选自由A型血友病或B型血友病组成的组的疾病。


7.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·A·奈梅杰，V·费雷拉，
申请(专利权)人：优尼科IP有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL