一种培养CD90posi细胞的培养基及其培养方法技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域，具体涉及一种培养CD90posi细胞的培养基及其培养方法。本发明专利技术提供的CD90posi细胞的培养基，在基础培养基DMEM/F‑12中加入由PD‑1抑制剂与苦参碱按7：3重量比组成的细胞生长抑制剂，由松茸提取物和刺五加提取物按3：2重量比组成的突变抑制剂；采用三维培养的方法培养CD90posi细胞。采用本发明专利技术提供的培养基培养CD90posi细胞具有以下优点：细胞不易聚集成团，培养速度易于控制，同时，还能保证培养过程中细胞的活性，且不会出现在培养过程中细胞继续发生突变的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种培养CD90posi细胞的培养基及其培养方法
本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种培养CD90posi细胞的培养基及其培养方法。
技术介绍
原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率高、死亡率高，病死率位居国内肿瘤第二位，严重威胁人民群众的生命健康。肝癌起病隐匿，临床表现缺乏特别性，就医时往往处于肝癌中晚期，肝癌早期患者难以发现，严重影响肝癌的治疗效果。目前肝癌的临床检测手段主要通过检测患者血清甲胎蛋白(AFP)并结合影像学检查进行确诊，可分为以下几类：B超检查受肠气及周围脏器的影响，分辨率低，B超引导下进行肝脏病灶穿刺活检存在一定假阴性率；同时肝脏穿刺存在创面出血、针道转移等严重并发症。CT或MR仅能分辨直径1.0cm以上的病灶，且有一定的假阳性率与假阴性率。DSA技术虽可提高肝癌检测的准确率，但为侵入性检查，多用于肝癌治疗。由于血清AFP显著升高一般出现在肿瘤进展期，且阳性率仅为60-70％，在准确率、检测效率、诊断扰动后对病人治疗风险性和诊断时间的滞后等方面都有明显的局限性，开发新的检测手段有其重要性与迫切性。...

【技术保护点】
1.一种培养CD90posi细胞的培养基，其特征在于，包含如下组分及其重量百分数：DMEM/F-12基础培养基94～97.5％，细胞生长抑制剂0.5～3％，突变抑制剂2～3％。/n

【技术特征摘要】
1.一种培养CD90posi细胞的培养基，其特征在于，包含如下组分及其重量百分数：DMEM/F-12基础培养基94～97.5％，细胞生长抑制剂0.5～3％，突变抑制剂2～3％。


2.如权利要求1所述的培养CD90posi细胞的培养基，其特征在于，由如下组分及其重量百分数组成：DMEM/F-12基础培养基96％，细胞生长抑制剂1.5％，突变抑制剂2.5％。


3.如权利要求1或2所述的培养CD90posi细胞的培养基，其特征在于，所述细胞生长抑制剂由PD-1抑制剂与苦参碱按重量比6～8：2～4组成；所述突变抑制剂由松茸提取物和刺五加提取物按重量比2～4：1～3组成。


4.如权利要求3所述的培养CD90posi细胞的培养基，其特征在于，所述细胞生长抑制剂由PD-1抑制剂与苦参碱按重量比7：3组成；所述突变抑制剂由松茸提取物和刺五加提取物按重量比3：2组成。


5.一种利用权利要求1-4任一项所述培养基培养CD90posi细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、于无菌条件下，切取新鲜的肝癌组织，培养两代后，利用免疫磁珠间接标记分离法分离CD90posi细胞，得CD90posi细胞；
S2、用matrigel母液消化步骤S1所得CD90posi细胞，然后重悬于权利要求1-4任一项所述的培养基中，全程置于冰上处理，收集所述细胞悬液，得经matrigel母液消化后预冷的细胞悬液；
S3、将步骤S2所得经matrigel母液消化后预冷的细胞悬液与matrigel溶液按体积比1～2：3～5混合均匀，置于34～37℃，放置35～45min，使其成胶；得胶状混合培养物；
S4、向步骤S3所得胶状混合培养物中加入权利要求1-4任一项所述的培养基，置于36℃，3％的CO2培养箱中孵育，24h换液一次，培养，即得。


6.如权利要求5所述培养CD90posi细胞的方法，其特征在于，步骤S1所述免疫磁珠间接标记分离法分离CD90posi细胞的具体过程为：
(1)将冻存的肝癌组织从-80℃冰箱中取出，置于37℃的温度下复温，然后用PBS冲洗，于1600r...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘建平，苏正，张克幍，
申请(专利权)人：中山大学孙逸仙纪念医院，
类型：发明
国别省市：广东;44