小鼠肾透明细胞癌循环肿瘤细胞系和人源性肾透明细胞癌循环肿瘤细胞的分离与培养方法技术

本发明专利技术公开了一种小鼠肾透明细胞癌循环肿瘤细胞系和肾透明细胞癌循环肿瘤细胞的分离与培养方法，涉及肿瘤细胞的分离与培养技术领域；所述小鼠肾透明细胞癌循环肿瘤细胞系为原位肾癌NOD/SCID小鼠的循环肿瘤细胞；所述环肿瘤细胞的分离与培养方法主要包括以下步骤：首先用病毒感染人源性肾透明细胞癌细胞系786‑O，使其稳转绿色荧光蛋白和具有Puromycin抗性，并对该细胞系进行培养；再建立小鼠模型，采集小鼠外周血并进行培养、分离得到肾癌循环肿瘤细胞。本发明专利技术的分离与培养方法简单易操作，分离获得的循环肿瘤细胞可以进行正常的传单培养，可以广泛应用于临床研究。

Methods of isolation and culture of circulating tumor cells of mouse renal clear cell carcinoma and human renal clear cell carcinoma

【技术实现步骤摘要】
小鼠肾透明细胞癌循环肿瘤细胞系和人源性肾透明细胞癌循环肿瘤细胞的分离与培养方法
本专利技术涉及肿瘤细胞的分离与培养
，具体涉及一种小鼠肾透明细胞癌循环肿瘤细胞系和人源性肾透明细胞癌循环肿瘤细胞的分离和培养方法。
技术介绍
肾细胞癌（RCC）是肾脏中最常见的恶性肿瘤，20%-30%的病人在治疗后会复发，且有极高的可能因肿瘤而死。恶性肿瘤细胞在癌症早期便可由原发灶脱落进入血液循环中，利用循环系统到达远端器官进入休眠状态或形成转移灶。循环肿瘤细胞（CTC）是癌症患者外周血中播散性的肿瘤细胞，其从原发性肿瘤或转移部位脱落到外周血中，可作为液体活检，用于早期诊断，风险评估和治疗监测。已有大量研究表明，病人外周血中CTC的数量以及分型，与病人预后密切相关。CTC在癌症的转移及治疗中有重大意义，CTC的分离和体外培养是CTC基础研究的重中之重。目前为止，尚未见到肾癌循环肿瘤细胞分离培养方法的报道。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供一种小鼠肾透明细胞癌循环肿瘤细胞系和人源性肾透明细胞癌循环肿瘤细胞的分离和培养方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小鼠肾透明细胞癌循环肿瘤细胞系，其特征在于，所述肾透明细胞癌循环肿瘤细胞系为原位肾癌NOD/SCID鼠的循环肿瘤细胞。/n

【技术特征摘要】
1.一种小鼠肾透明细胞癌循环肿瘤细胞系，其特征在于，所述肾透明细胞癌循环肿瘤细胞系为原位肾癌NOD/SCID鼠的循环肿瘤细胞。


2.一种人源性肾透明细胞癌循环肿瘤细胞的分离与培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：用病毒感染人源性肾透明细胞癌细胞系786-O，使其稳转绿色荧光蛋白和具有Puromycin抗性，并对该人源性肾透明细胞癌细胞系786-O进行培养；
S2：将步骤S1中培养获得的人源性肾透明细胞癌细胞系786-O接种于小鼠腋下以获得肿瘤块；
S3：将步骤S2中的肿瘤块接种于另一只健康小鼠的肾下极并进行饲养；
S4：采集步骤S3中小鼠外周血并进行培养、分离得到循环肿瘤细胞。


3.根据权利要求1所述人源性肾透明细胞癌循环肿瘤细胞的分离与培养方法，其特征在于，所述使用慢性病毒感染人源性肾透明细胞癌细胞系786-O的具体过程为：将人源性肾透明细胞癌细胞系786-O培养至细胞汇合度为20-30%时加入9ul慢病毒EF1A-MCS-P2A-EGFR-SV40-firefly-Luc-IRES-Puromycin以及20ulPolybrene。


4.根据权利要求1所述人源性肾透明细胞癌循环肿瘤细胞的分离与培养方法，其特征在于，对所述被病毒感染后的人源性肾透明细胞癌细胞系786-O进行培养的培养基为：含3ug/mlPuromycin，10%FBS的培养基。


5.根据权利要求1所述人源性肾透明细胞癌循环肿瘤细胞的分离与培养方法，其特征在于，所述步骤S4中小鼠外周血的处理方法为：加入6倍于外周血体积的红...

【专利技术属性】
技术研发人员：王振龙，李刚，管栩冰，种铁，
申请(专利权)人：西安交通大学医学院第二附属医院，
类型：发明
国别省市：陕西;61