一种双特异性抗体细胞株的构建和筛选方法技术

本发明专利技术公开了一种双特异性抗体细胞株的构建和筛选方法，包括以下步骤：以SNT70为表达载体，分别构建抗CD20抗体的表达质粒、抗CD3抗体的表达质粒；将抗CD20抗体的表达质粒、抗CD3抗体的表达质粒转染至宿主细胞中，得到目的细胞株；培养步骤(1)所述的目的细胞株并进行纯化，得到抗CD20×CD3双特异性抗体。本发明专利技术公开的方法操作简单，制得的双特异性抗体纯度高。

【技术实现步骤摘要】
一种双特异性抗体细胞株的构建和筛选方法
：本专利技术涉及生物
，具体涉及一种双特异性抗体细胞株的构建和筛选方法。
技术介绍
：双特异性抗体(bispecificantibody，BiAb)是含有两种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁，产生导向性的效应功能。BiAb在生物医学中，特别是在肿瘤的免疫治疗中具有广阔的应用前景。通过BiAb介导细胞毒作用杀死肿瘤细胞是当前免疫治疗应用研究的热点，其主要特点是BiAb能同时结合肿瘤相关抗原和免疫效应细胞上的靶分子，直接触发免疫效应细胞对肿瘤细胞的特异性杀伤。目前，中国仓鼠卵巢细胞(CHO,Chinesehamsterovarycell)广泛用于生产抗体，通常高产的细胞株一方面是通过甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)或者蛋氨酸砜亚氨(methioninesulfoximine，MSX)进行加压扩增来得到，另一方面也有很多报道通过基因工程来得到高产细胞株。许多公司通过构建高转染效率的质粒，例如转座载体(Transposon)可以大幅度的提高外源基因的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种双特异性抗体细胞株的构建和筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)以SNT70为表达载体，分别构建抗CD20抗体的表达质粒、抗CD3抗体的表达质粒；将抗CD20抗体的表达质粒、抗CD3抗体的表达质粒转染至宿主细胞中，得到目的细胞株；/n(2)培养步骤(1)所述的目的细胞株并进行纯化，得到抗CD20×CD3双特异性抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种双特异性抗体细胞株的构建和筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以SNT70为表达载体，分别构建抗CD20抗体的表达质粒、抗CD3抗体的表达质粒；将抗CD20抗体的表达质粒、抗CD3抗体的表达质粒转染至宿主细胞中，得到目的细胞株；
(2)培养步骤(1)所述的目的细胞株并进行纯化，得到抗CD20×CD3双特异性抗体。


2.如权利要求1所述的一种双特异性抗体细胞株的构建和筛选方法，其特征在于，目的细胞株的具体制备方法为：以SNT70为表达载体，分别将抗CD20抗体的基因和抗CD3抗体的基因连接到SNT70载体上，并同时分别转染至宿主细胞中，经过克隆挑选后得到目的细胞株。


3.如权利要求2所述的一种双特异性抗体细胞株的构建和筛选方法，其特征在于，将制得的目的细胞株进行培养，分别得到抗CD20抗体、抗CD3抗体，然后将抗CD20抗体、抗CD3抗体以摩尔比为1:1的比例混合，并添加精氨酸和还原性谷胱甘肽至抗CD20抗体、抗CD3抗体的终浓度分别为10～200mM和60～140mM，用Tris调节pH至7.5～8.5，37℃下孵育3～5小时，然后进行纯化，制得双特异性抗体。


4.如权利要求1所述的一种双特异性抗体细胞株的构建和筛选方法，其特征在于，目的细胞株的具体制备方法为：以SNT70为表达载体，分别将抗CD20抗体的基因和抗CD3抗体的基因连接到SNT70载体上，并同时一起转染至宿主细胞中，经过克隆挑选后得到目的细胞株。


5.如权利要求1所述的一种双特异性抗体细胞株的构建和筛选方法，其特征在于，步骤(2)中，培养目的细胞株的方法具体为：将细胞按(1.0±0.3)×106cells/ml的接种密度稀释至细胞培养反应器中，细胞培养反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：李智，
申请(专利权)人：苏州智享众创孵化管理有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32