一种提高双特异性抗体纯度的分离纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种提高双特异性抗体纯度的分离纯化方法，包括以下步骤：分别配置澄清过滤平衡缓冲液、EDTA‑2Na母液；串联压力表，采用硅胶管将MD0HC过滤器、MX0HC过滤器以及0.22μm除菌过滤器依次连接；分别采用注射用水和澄清过滤缓冲液依次清洗MD0HC过滤器、冲洗MX0HC过滤器；将转染表达的双特异性抗体在生物反应器中进行培养，培养结束后将生物反应器的温度调整为20±5℃，向培养上清液加入EDTA‑2Na母液；将上述培养上清液过滤，滤液收集至收集容器；过滤时同时向培养上清液、滤液中通入氧气；最后对滤液进行蛋白纯度进行检测。该方法操作简单，在过滤收集过程中双特异性抗体稳定性好，可有效减少轻链与重链结合的二硫键被破坏，从而获得纯度更高的双特异性抗体。

【技术实现步骤摘要】
一种提高双特异性抗体纯度的分离纯化方法
：本专利技术涉及生物
，具体涉及一种提高双特异性抗体纯度的分离纯化方法。
技术介绍
：双特异性抗体是含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子之间架起桥梁应，激发具有导向性的免疫反应，是基因工程抗体的一种，现已成为抗体工程领域的热点，在肿瘤的免疫治疗中具有广阔的应用前景。双特异性抗体目前多采用中华仓鼠卵巢细胞进行表达和大规模培养制备，采取的收获方法基本是培养结束时，使用澄清过滤膜包进行澄清收获，并将澄清收集液储存在密闭容器中。常规过滤收获方法在操作时，由于双特异性抗体处于暂停通气状态，游离在反应器以及过滤液中的酶容易发挥还原作用。而且由于双特异性抗体分子结构不稳定，容易被还原而产生碎片，因此，该方法会导致双特异性抗体中的二硫键被还原，抗体上的轻链掉落，从而产生抗体碎片，导致目标产品纯度降低。
技术实现思路
：本专利技术要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种提高双特异性抗体纯度的分离纯化方法，该方法操作简单，在过滤收集过程中双特异性抗体稳定性好，可有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高双特异性抗体纯度的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)分别配置澄清过滤平衡缓冲液、EDTA-2Na母液；/n(2)串联压力表，采用硅胶管将MD0HC过滤器、MX0HC过滤器以及0.22μm除菌过滤器依次连接；调整蠕动泵，首次采用注射用水清洗MD0HC过滤器，冲洗量≥100L/m

【技术特征摘要】
1.一种提高双特异性抗体纯度的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)分别配置澄清过滤平衡缓冲液、EDTA-2Na母液；
(2)串联压力表，采用硅胶管将MD0HC过滤器、MX0HC过滤器以及0.22μm除菌过滤器依次连接；调整蠕动泵，首次采用注射用水清洗MD0HC过滤器，冲洗量≥100L/m2，采用注射用水冲洗MX0HC过滤器，冲洗量≥100L/m2；调整蠕动泵，用澄清过滤缓冲液分别对MD0HC过滤器、MX0HC过滤器进行冲洗，澄清过滤缓冲液的用量为过滤器体积的1～2倍；
(3)将转染表达的双特异性抗体在生物反应器中进行培养，培养结束后将生物反应器的温度调整为20±5℃，保持生物反应器的通气和搅拌参数设置不变，向生物反应器中的培养上清液加入EDTA-2Na母液；
(4)调整蠕动泵，调整通量≤100L/m2·h，将上述培养上清液过滤，过滤压力≤1.5bar；滤液收集至收集容器；在过滤过程中保持向生物反应器的培养上清液中通入氧气，也同时向收集容器中通入氧气；最后对滤液进行蛋白纯度进行检测。


2.根据权利要求1所述的一种提高双特异性抗体纯度的分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述澄清过滤平衡缓冲液包括20mmol/LTris、150mmol/L氯化钠，其pH为7.2。


3.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：李智，诸葛鑫，
申请(专利权)人：苏州智享众创孵化管理有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32