一种贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂及其制备方法和在茄科植物和/或葫芦科植物生长中的应用，贝莱斯芽孢杆菌BV03已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.18936，保藏日期为2019年11月11日，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis；制备方法包括获得种子液、种子液发酵、得到发酵液预制剂、制得菌剂；本菌剂在工厂化育苗中的促生效果达到30％，壮苗指数上升均超过45％，在移栽时使用其增产效果分别为48％和34％，结实率均超过85％。

【技术实现步骤摘要】
一种贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂及其制备方法和应用
本专利技术涉及微生物应用
，具体涉及一种贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂及其制备方法和应用。
技术介绍
21世纪以来，随着经济快速增长﹑人口数量的增长和对食品健康的日益关注，农业的生产面积不断扩大，产量也与日俱增，取得不小成果。但在发展过程中，各种问题也日益凸显出来。农民们为保障农产品、尤其是蔬菜水果产量的增长，追求经济效益、提高亩产，不规范使用化学肥料或超过使用标准施用肥料的现象屡见不鲜。这些行为危害农产品导致农业生产成本增加，降低农产品效益价值；另外，过量施用化学肥料的残留对农业环境的污染问题日渐突出，其直接导致了土壤结构被破坏、害虫产生耐药性，某些有害物质，如有毒化合物或重金属甚至可能随食物链进入人体，进而对人类健康产生威胁。这些现象的出现成为了农林业生产发展路上的一个阻碍。大量的矿物元素累积在土壤中，会导致土壤结构遭到破坏，影响植物的生长发育，微生物可以通过一定的生理作用将矿物元素的状态进行转换，转化为可供植物直接吸收利用的状态。因此为解决该问题，探寻新的功能微生物替代或部分替代化学肥料用于农产品种植的研究备受关注。比如，某些微生物可以将难溶性的磷转化为可溶性磷，供植物直接吸收利用，这种促生菌就具有溶磷功能；另外，有的微生物既能溶解有机磷又能溶解无机磷，更大程度地利用土壤中的磷素，避免其在土壤中沉积。贝莱斯芽孢杆菌是一种来源于植物根际﹑土壤等各种生态环境的芽孢杆菌。从植物根际分离的大部分贝莱斯芽孢杆菌可以在植物根部定殖，通过产生嗜铁素、IAA(吲哚乙酸)和NH3等促生物质，对促进植物生长起着重要作用。在促进植物生长方面，目前多采用不同菌株的复配使用，以期望能够实现菌株间的优势互补将各个菌株的不同功能充分发挥。但由于不同菌株在环境中的适应性﹑培养和/或保存条件存在差异，复配菌剂中各菌株的功能往往受到限制，施用后造成功效减弱。本专利技术为提高茄科植物和/或葫芦科植物产量和保证其产品质量，提供一种贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂及其制备方法和在茄科植物和/或葫芦科植物生长中的应用。
技术实现思路
针对不同菌株在环境中的适应性﹑培养和/或保存条件存在差异，复配菌剂中各菌株的功能往往受到限制，施用后造成功效减弱的技术问题，本专利技术提供一种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)BV03菌剂及其制备方法和应用，本菌剂对茄科植物和/或葫芦科植物具有促生作用，为微生物源肥料的研发开拓新的途径。第一方面，本专利技术提供一种贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：(1)将保存的贝莱斯芽孢杆菌BV03菌株接种于液体LB培养基，30℃±1℃条件下培养16h或至对数生长期，获得供接种用使用的种子液，作为种子液浓度不低于1.0×108cfu/mL；其中，贝莱斯芽孢杆菌BV03已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO.18936，保藏日期为2019年11月11日，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis；(2)将种子液以10～12％(体积百分比)的接种量接种到发酵培养基，使发酵培养体系中菌体初始浓度不低于1.0×107cfu/mL；(3)按照质量体积比1:4～1:5的比例向发酵体系中添加硅藻土，充分混匀，进行喷雾干燥，得到贝莱斯芽孢杆菌BV03的发酵液预制剂；(4)取发酵液预制剂、有机硅BD-3077、羧甲基纤维素钠、壳聚糖、木质素磺酸钠和辅酶A充分混合，通过气流粉碎机粉碎，制得贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂，菌剂中活菌数量不低于2.0×1011cfu/g。进一步的，所述步骤(2)的发酵培养基的配方为：玉米粉2％，豆粕粉1％，酵母粉0.3％，CaCl20.2％，MgSO4·7H2O0.1％，K2HPO4·3H2O0.15％，KH2PO40.2％，FeSO4·7H2O0.001％(皆为质量体积比)，余量为水，pH7.0～7.5，0.1MPa，连同发酵罐一起115℃灭菌60min，自然冷却到常温条件下使用；所述步骤(2)的培养条件为：在30℃±1℃条件下，通气保压0.05MPa，溶氧量20％～22％，转速180～220r/min，发酵过程中保持发酵液pH7.0～7.5，培养36h后测量活菌总量，活菌总量达到2.0×109cfu/mL，发酵结束。进一步的，所述步骤(4)为：取92～95份发酵液预制剂、1～1.5份有机硅BD-3077、1～1.5份羧甲基纤维素钠、1～1.5份壳聚糖、1～2份木质素磺酸钠和1～1.5份辅酶A充分混合，通过气流粉碎机，混合物粉碎至Φ＝45μm以下，制得贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂，菌剂中活菌数量不低于2.0×1011cfu/g，室温条件下半年后菌剂中活菌数目不低于1.0×1011cfu/g。第二方面，本专利技术提供一种采用上述制备方法制得的贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂。进一步的，所述贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂的剂型为可湿性粉剂。第三方面，本专利技术提供一种采用上述制备方法制得的贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂在茄科植物和/或葫芦科植物生长中的应用。进一步的，所述应用为工厂化育苗时，将2.0×1011cfu/g的贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂按10.0g/L﹑5.0g/L﹑2.0g/L用量进行施用，将2.0×1011cfu/g的贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂可湿性粉剂按2.0g/L用量进行施用效果最优。进一步的，所述应用为茄科植物和/或葫芦科植物移栽后，将2.0×1011cfu/g的贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂按5.0kg/亩﹑2.0kg/亩﹑1.0kg/亩用量进行施用，将2.0×1011cfu/g的贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂可湿性粉剂按2.0kg/亩用量进行施用效果最优。本专利技术的有益效果在于，本专利技术提供的贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂与市场化学肥料相比，促进植物生长效果良好，对工厂化育苗中的茄科植物和/或葫芦科植物的促生效果皆达到30％左右，壮苗指数上升均超过45％；对移栽后的茄科植物和/或葫芦科植物追加施用，其促生效果分别为48％和34％，且结实率均超过85％；本专利技术提供的贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂制备方法简单，易操作，对经济植物的栽培具有重大应用价值。具体实施方式为了使本
的人员更好地理解本专利技术中的技术方案，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。实施例1一种贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂一种贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂，菌剂为包含贝莱斯芽孢杆菌BV03的可湿性粉剂，贝莱斯芽孢杆菌BV03已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏地址为北京市本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：/n(1)将保存的贝莱斯芽孢杆菌BV03菌株接种于液体LB培养基，30℃±1℃条件下培养16h或至对数生长期，获得供接种用使用的种子液，作为种子液浓度不低于1.0×10

【技术特征摘要】
1.一种贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
(1)将保存的贝莱斯芽孢杆菌BV03菌株接种于液体LB培养基，30℃±1℃条件下培养16h或至对数生长期，获得供接种用使用的种子液，作为种子液浓度不低于1.0×108cfu/mL；
其中，贝莱斯芽孢杆菌BV03已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO.18936，保藏日期为2019年11月11日，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis；
(2)将种子液以10～12％的接种量接种到发酵培养基，使发酵培养体系中菌体初始浓度不低于1.0×107cfu/mL；
(3)按照质量体积比1:4～1:5的比例向发酵体系中添加硅藻土，充分混匀，进行喷雾干燥，得到贝莱斯芽孢杆菌BV03的发酵液预制剂；
(4)取发酵液预制剂、有机硅BD-3077、羧甲基纤维素钠、壳聚糖、木质素磺酸钠和辅酶A充分混合，通过气流粉碎机粉碎，制得贝莱斯芽孢杆菌BV03菌剂，菌剂中活菌数量不低于2.0×1011cfu/g。


2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)的发酵培养基的配方为：
玉米粉2％，豆粕粉1％，酵母粉0.3％，CaCl20.2％，MgSO4·7H2O0.1％，K2HPO4·3H2O0.15％，KH2PO40.2％，FeSO4·7H2O0.001％，余量为水，pH7.0～7.5，0.1MPa，连同发酵罐一起115℃灭菌60min，自然冷却到常温条件下使用；
所述步骤(2)的培养条件为：
在30℃±1℃条件下，通气保压0.05MPa，溶氧量20％～22％，转速180～220r/min，发酵过程中保持发酵液pH7.0～7.5，培养36h后测量活菌总量，活...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢雪迎，张新建，周方园，周红姿，张广志，赵晓燕，吴晓青，范素素，王加宁，
申请(专利权)人：山东省科学院生态研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37