microRNA生物标志物及其在制备自身免疫疾病检测试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一组可用于检测自身免疫疾病的microRNA生物标志物，其核苷酸序列如SEQ ID No.1～8任一所示。还提供了上述microRNA生物标志物在在制备自身免疫疾病检测试剂盒中的应用和一种自身免疫疾病检测试剂盒，包括反转录系统、扩增系统和引物系统，引物系统包括上述SEQ ID No.1～8任一所示核苷酸序列的茎环引物和扩增引物。本发明专利技术的microRNA生物标志物与自身免疫疾病的病例指标具有密切相关性，可作为生物标志物对具有自身免疫疾病的病人进行检测。本发明专利技术的microRNA生物标志物可与其他分子指标相结合，为自身免疫疾病的筛查、诊断、治疗与预后提供新的综合性试剂盒，方便临床应用。

【技术实现步骤摘要】
microRNA生物标志物及其在制备自身免疫疾病检测试剂盒中的应用
本专利技术涉及生物医药，具体涉及microRNA生物标志物及其在制备自身免疫疾病检测试剂盒中的应用。
技术介绍
microRNAs(miRNAs)是一类非编码的长度为17～25nt的小RNA分子。它具有高度保守性、时序性和组织特异性，在细胞生长和发育的调节过程中起多种作用。约50％的已知人类miRNA基因定位于和免疫相关的染色体区域，而不断累积的研究成果也已充分证实miRNA的异常表达与免疫系统疾病的发生、发展密切相关。外泌体是细胞经过“内吞-融合-外排”等一系列调控过程而形成的细胞外纳米级小囊泡。外泌体可以携带蛋白，运送RNA，在细胞间物质和信息转导中起重要作用。人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体，包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时，外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式：一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合，进而激活靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中，外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合，从而激活细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合，非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。体液、培养液和灌洗液是医学诊断中最常用的样本来源。当前对于血液的临床分析集中在一些蛋白因子中，因核酸获得困难且含量少、质量不高而很少涉及核酸。近年来有研究发现，体液、培养液和灌洗液中的外源RNA与细胞内RNA相比，很少存在核糖体RNA，多数为＜30nt、独立于细胞之外的miRNA分子，它在人体中普遍存在。人体组织、血液及各种体液，包括汗液、尿液、泪液、羊水等都存在小RNA。通常，体液、培养液和灌洗液中的miRNA以外泌体包涵物等形成颗粒存在，因而具有良好的抗RNase降解能力，有较高的稳定性，因此可作为新的分子生物学标志。作为生物检测样本，血清具有取材方便，无创伤性，并可连续体外检测的优点，由于外泌体中miRNA特殊的稳定性，因此使基于miRNA定性和定量检测技术寻找癌症特异性的血清miRNA作为分子标记物的方法比传统的蛋白分子标记方法将更加有效，进而可以克服分子标记在抗体制备和定量分析上发展所遇到的瓶颈。因此，开发一种可辅助自身免疫疾病筛查和诊断的外泌体miRNA作为生物标记物，具有广泛的科研价值和临床应用前景。
技术实现思路
作为本专利技术的第一个方面，提供了一组可用于检测自身免疫疾病的microRNA生物标志物，其核苷酸序列如SEQIDNo.1～8任一所示。作为本专利技术的第二个方面，提供了上述microRNA生物标志物在在制备自身免疫疾病检测试剂盒中的应用。作为本专利技术的第三个方面，还提供了一种自身免疫疾病检测试剂盒，包括反转录系统、扩增系统和引物系统，引物系统包括上述SEQIDNo.1～8所示核苷酸序列中的至少一种的茎环引物和扩增引物。进一步的，所述反转录系统包括M-MLV反转录酶、反转录体系5×M-MLV缓冲液和RNase抑制剂；所述扩增系统包括含Taq酶的miRNA表达定量检测混合液；所述SEQIDNo.1～8核苷酸序列的茎环引物和扩增引物具体包括：SEQIDNo.1所示核苷酸序列茎环引物：5’GGACTGATGCAAAGATGCATCCCTGGTACTCAAGCGCTCGCTGCAATGCATCAGTCCTCATACSEQIDNo.2所示核苷酸序列茎环引物：5’GGACTGATGCAAAGATGCATCCCTGGTACTCAAGCGCTCGCTGCAATGCATCAGTCCCTACCSEQIDNo.3所示核苷酸序列茎环引物：5’GGACTGATGCAAAGATGCATCCCTGGTACTCAAGCGCTCGCTGCAATGCATCAGTCCTCAACSEQIDNo.4所示核苷酸序列茎环引物：5’GGACTGATGCAAAGATGCATCCCTGGTACTCAAGCGCTCGCTGCAATGCATCAGTCCTCTAAACSEQIDNo.5所示核苷酸序列茎环引物：5’GGACTGATGCAAAGATGCATCCCTGGTACTCAAGCGCTCGCTGCAATGCATCAGTCCCGCGTACSEQIDNo.6所示核苷酸序列茎环引物：5’GGACTGATGCAAAGATGCATCCCTGGTACTCAAGCGCTCGCTGCAATGCATCAGTCCTTCCCSEQIDNo.7所示核苷酸序列茎环引物：5’GGACTGATGCAAAGATGCATCCCTGGTACTCAAGCGCTCGCTGCAATGCATCAGTCCCACTGGSEQIDNo.8所示核苷酸序列茎环引物：5’GGACTGATGCAAAGATGCATCCCTGGTACTCAAGCGCTCGCTGCAATGCATCAGTCCACCCCSEQIDNo.1所示核苷酸序列PCR正向引物：5’-GCTCTTTGGTTATC-3’SEQIDNo.1所示核苷酸序列PCR反向引物：5’-GTGATGCATCCCTGGT-3’SEQIDNo.2所示核苷酸序列PCR正向引物：5’-GCCAAAGTGCTTAC-3’SEQIDNo.2所示核苷酸序列PCR反向引物：5’-GTGATGCATCCCTGGT-3’SEQIDNo.3所示核苷酸序列PCR正向引物：5’-GCTAGCTTATCAG-3’SEQIDNo.3所示核苷酸序列PCR反向引物：5’-GTGATGCATCCCTGGT-3’SEQIDNo.4所示核苷酸序列PCR正向引物：5’-GCGCTGGTTTCA-3’SEQIDNo.4所示核苷酸序列PCR反向引物：5’-GTGATGCATCCCTGGT-3’SEQIDNo.5所示核苷酸序列PCR正向引物：5’-GCCATTATTACT-3’SEQIDNo.5所示核苷酸序列PCR反向引物：5’-GTGATGCATCCCTGGT-3’SEQIDNo.6所示核苷酸序列PCR正向引物：5’-GCTGAGAACTGAA-3’SEQIDNo.6所示核苷酸序列PCR反向引物：5’-GTGATGCATCCCTGGT-3’SEQIDNo.7所示核苷酸序列PCR正向引物：5’-GCTCTCCCAACC-3’SEQIDNo.7所示核苷酸序列PCR反向引物：5’-GTGATGCATCCCTGGT-3’SEQIDNo.8所示核苷酸序列PCR正向引物：5’-GCTTAATGCTAATC-3’SEQIDNo.8所示核苷酸序列PCR反向引物：5’-GTGATGCATCCCTGGT-3’18SrRNAPCR正向引物：5’-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.microRNA生物标志物，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.1～8任一所示。/n

【技术特征摘要】
1.microRNA生物标志物，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNo.1～8任一所示。


2.权利要求1中所述miRNA生物标志物在制备自身免疫疾病检测试剂盒中的应用。


3.一种自身免疫疾病检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括反转录系统、扩增系统和引物系统，所述引物系统为权利要求1中所述SEQIDNo.1～8所示核苷酸序列的至少一种的茎环引物和扩增引物。


4.根据权利要求3所述的一种自身免疫疾病检测试剂盒，其特征在于，所述反转录系统包括M-MLV反转录酶、反转录体系5×M-MLV缓冲液和RNase抑制剂；所述扩增系统包括含Taq酶的miRNA表达定量检测混合液；所述SEQIDNo.1～8所示核苷酸序列的茎环引物和扩增引物具体包括：
SEQIDNo.1所示核苷酸序列茎环引物：
5’GGACTGATGCAAAGATGCATCCCTGGTACTCAAGCGCTCGCTGCAATGCATCAGTCCTCATAC
SEQIDNo.2所示核苷酸序列茎环引物：
5’GGACTGATGCAAAGATGCATCCCTGGTACTCAAGCGCTCGCTGCAATGCATCAGTCCCTACC
SEQIDNo.3所示核苷酸序列茎环引物：
5’GGACTGATGCAAAGATGCATCCCTGGTACTCAAGCGCTCGCTGCAATGCATCAGTCCTCAAC
SEQIDNo.4所示核苷酸序列茎环引物：
5’GGACTGATGCAAAGATGCATCCCTGGTACTCAAGCGCTCGCTGCAATGCATCAGTCCTCTAAAC
SEQIDNo.5所示核苷酸序列茎环引物：
5’GGACTGATGCAAAGATGCATCCCTGGTACTCAAGCGCTCGCTGCAATGCATCAGTCCCGCGTAC
SEQIDNo.6所示核苷酸序列茎环引物：
5’GGACTGATGCAAAGATGCATCCCTGGTACTCAAGCGCTCGCTGCAATGCATCAGTCCTTCCC
SEQIDNo.7所示核苷酸序列茎环引物：
5’GGACTGATGCAAAGATGCATCCCTGGTACTCAAGCGCTCGCTGCAATGCATCAGTCCCACTGG
SEQIDNo.8所示核苷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：修朝阳，江海松，
申请(专利权)人：嘉兴程瑞医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33