进行聚合酶链式反应的方法及其相关应用技术

本发明专利技术公开了进行聚合酶链式反应(PCR)和熔解分析以确定拷贝数变异和/或基因表达的方法和试剂盒。本发明专利技术还公开了这些方法和分析的相关应用。

Methods of polymerase chain reaction and its application

【技术实现步骤摘要】
进行聚合酶链式反应的方法及其相关应用本申请是申请号为201480036694.2、申请日为2014年06月25日、专利技术名称为“进行聚合酶链式反应的方法及其相关应用”的中国专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术通常地涉及聚合酶链式反应(PCR)。更具体地，本专利技术涉及限制PCR的方法和进行熔解分析，以及其这种方法和分析的应用。
技术介绍
脱氧核糖核酸(DNA)拷贝数变异(CNV)与某些遗传性疾病、染色体重排和癌症相关。临床实验室通常用于检测CNV的标准方法是荧光原位杂交(FISH)[13,14]。FISH的分辨率是约100千碱基对(kb)，但是包含较短片段的CNVs很难用这种方法检测。在人类基因组序列完成后的近十年中[15]，一些能够解决更短CNVs的分子检测技术已经显示了存在于正常个体中的结构变异的显著水平。在上个十年中发展的最流行的技术有阵列比较基因组杂交(CGH)、阵列单核苷酸多态性(SNP)、实时定量PCR(qPCR)和多重连接探针扩增(MLPA)以及大规模平行测序。基于阵列的技术(阵列CGH和阵列SNP)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过在多个样品核酸靶上进行等位基因特异性扩增以确定等位基因部分的方法，其特征在于，所述多个样品包括核酸靶和参考核酸，该方法包括：/n扩增每个样品中的等位基因和参考核酸，其中每个样品进一步包括：/n用于扩增等位基因的一对引物，其中该对引物中的一个被构造成用于仅扩增等位基因，并且该对引物被构造成用于产生等位基因的扩增子，扩增子具有Tm，/n第二套引物，其被构造成用于生产参考核酸扩增子，其中参考核酸扩增子的Tm与等位基因扩增子的Tm不同，/n聚合酶，和/ndNTPs，其中在扩增开始之前将一种或多种dNTPs限制到标准PCR体系浓度的50％或者更低，/n确定在扩增步骤中产生的每一扩增子的熔解曲...

【技术特征摘要】
20130625 US 61/839,2691.一种通过在多个样品核酸靶上进行等位基因特异性扩增以确定等位基因部分的方法，其特征在于，所述多个样品包括核酸靶和参考核酸，该方法包括：
扩增每个样品中的等位基因和参考核酸，其中每个样品进一步包括：
用于扩增等位基因的一对引物，其中该对引物中的一个被构造成用于仅扩增等位基因，并且该对引物被构造成用于产生等位基因的扩增子，扩增子具有Tm，
第二套引物，其被构造成用于生产参考核酸扩增子，其中参考核酸扩增子的Tm与等位基因扩增子的Tm不同，
聚合酶，和
dNTPs，其中在扩增开始之前将一种或多种dNTPs限制到标准PCR体系浓度的50％或者更低，
确定在扩增步骤中产生的每一扩增子的熔解曲线；
对所述多个样品的每一参考扩增子的熔解曲线进行标准化；和
将每个样品的靶扩增子的熔解曲线进行比较以确定每个样品中等位基因部分。


2.一种进行扩增和确定样品中靶核酸位点的CNV的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
聚合酶，
dNTPs，其的一种或几种以3.125-25μM的浓度提供，
被构造用于扩增靶核酸位点的引物，和
SMN1和SMN2的通用引物。


3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，进一步包括被构造用于扩增参考核酸的引物。


4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，被构造用于扩增参考核酸的引物与被构造用于扩增靶核酸位点的引物在相同的反应混合物中提供。


5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，进一步提供用于进行扩增和确定靶核酸位点CNV的方法。


6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述dNTPs的一种以3.125-25μM的浓度提供。


7.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述dNTPs的两种以3.125-25μM的浓度提供。


8.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：C威特沃，周路明，R帕莱斯，
申请(专利权)人：C威特沃，周路明，R帕莱斯，
类型：发明
国别省市：美国;US