高密度发酵枯草芽孢杆菌菌种的方法及应用技术

本发明专利技术属于微生物菌种发酵技术领域，具体涉及一种高密度发酵枯草芽孢杆菌菌种的方法，还涉及上述菌种在饲料添加剂和农业种植上的应用。本发明专利技术所提供的高密度发酵枯草芽孢杆菌菌种的方法，包括以下的步骤：（1）活化枯草芽孢杆菌的菌种；（2）制备枯草芽孢杆菌种子液；（3）上罐发酵。本发明专利技术的有益效果在于：（1）一种枯草芽孢杆菌的高密度液体发酵方法，最终发酵水平在400亿/ml以上；（2）本发明专利技术发酵时间短，在18～24h左右，降低生产成本、提高效率，发酵水平高、芽孢形成率高。

【技术实现步骤摘要】
高密度发酵枯草芽孢杆菌菌种的方法及应用
本专利技术属于微生物菌种发酵
，具体涉及一种高密度发酵枯草芽孢杆菌菌种的方法，还涉及上述菌种的应用。
技术介绍
枯草芽孢杆菌广泛分布于土壤及腐败的有机物中，目前已有一些对枯草芽孢杆菌益生菌高密度培养的研究报道，例如以下的专利文献披露了枯草芽孢杆菌的高密度发酵方法：CN108277179A披露了一种枯草芽孢杆菌的高密度发酵及喷雾干燥方法，其特征在于，包括如下步骤：(a)、菌种活化：将在4℃温度下斜面保存的枯草芽孢杆菌划线于NA培养基上，于30～37℃培养20～30h；(b)、种子液制备：挑取活化的菌落，接种到灭菌后的肉汤培养基中，于30～37℃、150～220rpm恒温振荡摇床培养20～30h，制成种子液；(c)、发酵罐培养：将制备好的枯草芽孢杆菌种子液以1～10％的接种比例移入装有发酵培养基的发酵罐中；发酵过程中采用补料分批发酵控制方法：在发酵第6h前流加葡萄糖液维持5～10g/L残糖浓度；同时补加酸性pH调节剂或碱性pH调节剂使发酵液pH维持在6.5～8.0范围；其它发酵条件为：通气量1～本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.高密度发酵枯草芽孢杆菌菌种的方法，包括以下的步骤：（1）活化枯草芽孢杆菌的菌种；（2）制备枯草芽孢杆菌种子液；（3）上罐发酵。/n

【技术特征摘要】
1.高密度发酵枯草芽孢杆菌菌种的方法，包括以下的步骤：（1）活化枯草芽孢杆菌的菌种；（2）制备枯草芽孢杆菌种子液；（3）上罐发酵。


2.如权利要求1所述的高密度发酵枯草芽孢杆菌菌种的方法，其特征在于，（1）枯草芽孢杆菌的菌种活化：将甘油管保存的枯草芽孢杆菌菌种在平板上划线，于35～39℃下在培养箱中倒置培养22～26h，培养出单菌落。


3.如权利要求1所述的高密度发酵枯草芽孢杆菌菌种的方法，其特征在于，（1）枯草芽孢杆菌的菌种活化：将甘油管保存的枯草芽孢杆菌菌种在平板上划线，于37℃下在培养箱中倒置培养24h，培养出单菌落。


4.如权利要求2所述的高密度发酵枯草芽孢杆菌菌种的方法，其特征在于，（1）中，平板培养基为：牛肉膏0.2～0.4%，蛋白胨0.4～0.6%，氯化钠0.4～0.6%，葡萄糖0.5～2%，琼脂粉0.2～1%，余量为水，补足100%，pH6.8～7.2；从平板上使用接种环挑取长势旺盛的菌落较大的单菌落，传到斜面上，培养2～3天，待90%以上的菌体产生芽孢；
斜面培养基为：酵母浸粉0.3～0.8%，胰蛋白胨0.5～2%，氯化钠0.5～2%，葡萄糖0.5～2%，余量为水，补足100%，pH6.8～7.2。


5.如权利要求2所述的高密度发酵枯草芽孢杆菌菌种的方法，其特征在于，（1）中，平板培养基为：牛肉膏0.3%，蛋白胨0.5%，氯化钠0.5%，葡萄糖1%，琼脂粉0.5%，余量为水，补足100%，pH6.8～7.2；从平板上使用接种环挑取长势旺盛的菌落较大的单菌落，传到斜面上，培养2～3天，待90%以上的菌体产生芽孢；
斜面培养基为：酵母浸粉0.5%，胰蛋白胨1%，氯化钠1%，葡萄糖1%，余量为水，补足100%，pH7.0。


6.如权利要求1所述的高密度发酵枯草芽孢杆菌菌种的方法，其特征在于，（2）枯草芽孢杆菌种子液的制备：用接种环挑取试管斜面上的菌苔一环，接种到摇瓶中，接种量为:0.5～2cm2/200ml，培养5～7h，培养温度为35～39℃，摇床转速为200～240r/min，得种子液；
种子液培养基：豆粕粉3～7%，玉米淀粉2～6%，氯化钠0.1～0.5%，轻质碳酸钙0.1～0.5%，余量为水，补足100%，pH6.8～7.2；
优选的，（2）枯草芽孢杆菌种子液的制备：用接种环挑取试管斜面上的菌苔一环，接种到摇瓶中，接种量为:1cm2/200ml，培养6h，培养温度为37℃，摇床转速为220r/min，得种子液；
种子液培养基：豆粕粉3～7%，玉米淀粉2～6%，氯化钠0.1～0.5%，轻质碳酸钙0.1～0.5%，余量为水，补足100%，pH6.8～7.2。


7.如权利要求1所述的高密度发酵枯草芽孢杆菌菌种的方法，其特征在于，（3）上罐发酵：将培养基加入到发酵罐中，装液量为60%，于121℃下灭菌30min，降温到38～42℃时，将种子液接种到发酵罐中，接种量为10%，于37℃下培养18～24h，初始转速为200，初始通气量为1:0.6，根据溶氧对转速和通气量进行调节，保持溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭芳坤，刘鹏，曹洪亮，高健，丁仁涛，曹新春，
申请(专利权)人：山东天润和生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37