新型高稳定性碱性蛋白酶突变体的筛选制造技术

本发明专利技术属于酶的基因工程技术领域，涉及新型的高稳定性碱性蛋白酶突变体的筛选。本发明专利技术通过易错PCR技术筛选获得了克劳氏芽孢杆菌来源碱性蛋白酶的高稳定性突变体。这些突变体基因经测序发现分别在第747‑749位为GAT，第859‑861位为GTT，第955‑957位为CTG，相应的氨基酸序列突变分别是在第165位突变为Asp，第203位为Val和第235位为Leu。发酵48h后，突变体发酵液的酶活力分别为30U/mL、41U/mL和35U/mL，比野生型碱性蛋白酶aprE重组菌株表达的发酵液的酶活力分别提高了11％、51％和30％。将得到的发酵液进行超滤纯化后在40℃恒温孵育48h后，碱性蛋白酶突变体的酶活保留率比野生型碱性蛋白酶的酶活提高了30％、88％、42％。这些高稳定性碱性蛋白酶突变体的筛选，有助于改善碱性蛋白酶的储存和应用效果。

Screening of novel high stability alkaline protease mutants

【技术实现步骤摘要】
新型高稳定性碱性蛋白酶突变体的筛选
本专利技术属于酶的基因工程
，具体涉及新型的高稳定性碱性蛋白酶突变体的筛选。
技术介绍
碱性蛋白酶(alkalineprotease)，是指在pH值偏碱性范围内水解蛋白质肽键的一类酶，其最适pH一般为9～11，属内肽酶中的丝氨酸蛋白水解酶类。与动、植物源蛋白酶制剂相比，微生物来源的蛋白酶制剂为胞外酶，适合工业化高效生产，成本更低廉，而且易于实施酶分子进化和菌种改造。克劳氏芽孢杆菌(Bacillusclausii)或者迟缓芽孢杆菌(Bacilluslentus)来源的枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin)，水解活力强，最适pH值高(pH＞10)，是目前产量最大的蛋白酶种类，广泛应用于加酶洗涤剂、纺织和食品等行业。该蛋白酶原始序列，见Uniprot蛋白质数据库，蛋白质编号为P29600或者P41362，两者蛋白质序列相同。该碱性蛋白酶虽然酶解活力强，但是储存过程中稳定性相对较差，并且使用过程中由于自我降解导致酶活力损失速度较快，影响了该酶的稳定储存和高效使用，因此需要进一步通过定向进化筛选获得储存和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.新型高稳定性碱性蛋白酶突变体的筛选，其特征在于：通过易错PCR技术筛选获得了克劳氏芽孢杆菌来源碱性蛋白酶的高稳定性突变体。/n

【技术特征摘要】
1.新型高稳定性碱性蛋白酶突变体的筛选，其特征在于：通过易错PCR技术筛选获得了克劳氏芽孢杆菌来源碱性蛋白酶的高稳定性突变体。


2.如权利要求1所述的新型高稳定性碱性蛋白酶突变体，其特征在于具有以下突变中的一种或者几种：基因序列的第747-749位为GAT，第859-861位为GTT，第955-957位为CT...

【专利技术属性】
技术研发人员：路福平，王洪彬，邱悦悦，王玉迎，李雪，刘逸寒，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津;12