抗B细胞成熟抗原的纳米抗体及应用制造技术

本发明专利技术涉及免疫学领域，具体涉及一种抗B细胞成熟抗原的纳米抗体及应用。所述纳米抗体的可变区包括互补决定区CDR1、互补决定区CDR2和互补决定区CDR3。本发明专利技术的抗B细胞成熟抗原的纳米抗体，包含互补决定区CDR1、互补决定区CDR2和互补决定区CDR3，对B细胞成熟抗原具有特异的识别和结合能力。本发明专利技术还提供了编码该纳米抗体的基因序列以及能够表达该纳米抗体的宿主细胞，通过本发明专利技术所提供的纳米抗体基因序列及宿主细胞，该纳米抗体能够在细胞内高效表达，可应用于BCMA分子检测试剂的研发，制备BCMA特异性抗体‑药物偶联物或双特异性抗体以及制备用于治疗多发性骨髓瘤的药物。

Nano antibody against B cell mature antigen and its application

【技术实现步骤摘要】
抗B细胞成熟抗原的纳米抗体及应用
本专利技术涉及免疫学领域，具体涉及一种抗B细胞成熟抗原的纳米抗体及应用。
技术介绍
1993年，Hamers等报道在骆驼血清中存在一种天然的重链抗体(HCAb)，HCAb不仅天然缺失轻链，而且缺失常规抗体重链恒定区CH1，克隆重链抗体的可变区即可得到只由一个重链可变区组成的单域抗体，其晶体结构直径2.5nm、长4nm，因此也被称为纳米抗体。与常规抗体相比，纳米抗体诸多优点，如分子量小、穿透力强、特异性高、亲和力强，将其应用于早期的医学诊断时可获得更快速而准确的结果，在应用于肿瘤等特异性治疗时可以迅速到达靶定部位，并且其免疫原性低，机体不易产生免疫排斥反应。由于其稳定性好，易于重组和表达，将其作为药物载体和其他生物技术方面也具有明显的优势。从最初诊断到复发/难治性状态的多发性骨髓瘤(MM)病程的特征是获得耐药性以及进行性免疫功能障碍。尽管如此，MM仍在开发一些部分或完全通过免疫刺激起作用的新疗法，并有望获得早期临床效果。针对PD-1/PD-L1和其他检查点分子的抗体与肿瘤靶向抗体和其他T细胞定向疗法的结合仍在继续探索中。B细胞成熟抗原(BCMA)已成为下一个重要的抗原靶标，多种BCMA特异性抗体-药物偶联物(ADCs)和T细胞定向双特异性抗体/双特异性治疗药物(BiTEs)进入临床。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗B细胞成熟抗原的纳米抗体及应用，以解决现有技术中的上述问题。本专利技术提供了一种抗B细胞成熟抗原的纳米抗体，所述纳米抗体的可变区包括互补决定区CDR1、互补决定区CDR2和互补决定区CDR3，所述CDR1的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示或与SEQIDNO.1所示的氨基酸序列具有至少90％的同源性，所述CDR2的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示或与SEQIDNO.2所示的氨基酸序列具有至少90％的同源性，所述CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示或与SEQIDNO.3所示的氨基酸序列具有至少90％的同源性。优选地，所述纳米抗体的可变区还包括框架区FR1、框架区FR2、框架区FR3和框架区FR4，所述FR1的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，所述FR2的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示，所述FR3的氨基酸序列如SEQIDNO.6所示，所述FR4的氨基酸序列如SEQIDNO.7所示。优选地，所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNO.8所示或与SEQIDNO.8所示的氨基酸序列具有至少90％的同源性。本专利技术还提供了与上述纳米抗体相关的生物材料，所述生物材料为A1)至A8)中的任一种：A1)编码上述纳米抗体的核酸分子；A2)含有A1)所述核酸分子的表达盒；A3)含有A1)所述核酸分子的重组载体；A4)含有A2)所述表达盒的重组载体；A5)含有A1)所述核酸分子的转基因动物细胞系；A6)含有A2)所述表达盒的转基因动物细胞系；A7)含有A3)所述重组载体的转基因动物细胞系；A8)含有A4)所述重组载体的转基因动物细胞系。本专利技术还提供了一种衍生抗体，所述衍生抗体为下述a)或b)或c)或d)或e)：a)含有上述纳米抗体的单链抗体；b)含有a)所述单链抗体的融合抗体；c)含有上述纳米抗体的融合抗体；d)含有上述纳米抗体的Fab；e)含有上述纳米抗体的完整抗体。本专利技术还提供了一种嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括上述纳米抗体。本专利技术还提供了一种生物制剂，所述生物制剂为B1)至B6)中的任一种：B1)包括表达上述的嵌合抗原受体的细胞群；B2)包含B1)所述细胞群的药物组合物；B3)表达上述的嵌合抗原受体的T细胞；B4)包括编码上述纳米抗体的核酸分子的检测试剂；B5)包含上述纳米抗体的BCMA特异性抗体-药物偶联物；B6)包含权利要求1或2或3所述纳米抗体的T细胞定向双特异性抗体。本专利技术还提供了一种上述的纳米抗体的制备方法，所述制备方法包括：将编码上述的纳米抗体的核酸分子导入受体细胞得到表达所述纳米抗体的转基因细胞，培养所述转基因细胞，得到所述纳米抗体。优选地，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQIDNO.16所示。本专利技术还提供了一种应用，该应用为上述的纳米抗体在制备肿瘤抑制剂或肿瘤细胞抑制剂或多发性骨髓瘤治疗药物或与BCMA结合产品中的应用。本专利技术的有益效果在于：本专利技术的抗B细胞成熟抗原的纳米抗体，包含互补决定区CDR1、互补决定区CDR2和互补决定区CDR3，对B细胞成熟抗原具有特异的识别和结合能力。本专利技术还提供了编码该纳米抗体的基因序列以及能够表达该纳米抗体的宿主细胞，通过本专利技术所提供的纳米抗体基因序列及宿主细胞，该纳米抗体能够在细胞内高效表达，可应用于BCMA分子检测试剂的研发，制备BCMA特异性抗体-药物偶联物或双特异性抗体以及制备用于治疗多发性骨髓瘤的药物。【附图说明】图1为本专利技术实施例中第一轮PCR扩增纳米抗体可变区基因电泳鉴定图；图2为本专利技术实施例中第二轮PCR扩增纳米抗体可变区基因电泳鉴定图；图3为本专利技术实施例中单克隆样品的显色值的结果示意图；图4为本专利技术实施例中构建的EF1α-p2a-eGFP载体的结构示意图；图5为本专利技术实施例中纳米抗体被BCMA识别的流式细胞仪分析结果图。【具体实施方式】下面将结合本专利技术实施例中的附图，对专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。在本文中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本专利技术的至少一个实施例中。在说明书中的各个位置出现该短语并不一定均是指相同的实施例，也不是与其它实施例互斥的独立的或备选的实施例。本领域技术人员显式地和隐式地理解的是，本文所描述的实施例可以与其它实施例相结合。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1抗BCMA纳米抗体文库的构建1、羊驼的免疫以及驼源淋巴细胞的分离，免疫使用的蛋白为HumanBCMAproteinLlamaIgG2bFctag(购自义翘神州)，首次免疫时，取0.5mgBCMA蛋白与等体积的弗氏完全佐剂震荡混匀乳化后，于羊驼背部及颈部分点注射，总计免疫四次，每三周免疫一次，每次免疫蛋白用量为0.5mg，加强免疫所使用的佐剂均为弗氏不完全佐剂。四免后十天左右，采集60mL羊驼全血，使用淋巴细胞分离液分离出外周血源单核细胞(PBMC)。2、提取PBMC的总RNA(trizol法)。3、将RNA反转录为cDNA，操作步骤参照P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗B细胞成熟抗原的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的可变区包括互补决定区CDR1、互补决定区CDR2和互补决定区CDR3，所述CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示或与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少90％的同源性，所述CDR2的氨基酸序列如SEQID NO.2所示或与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列具有至少90％的同源性，所述CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示或与SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列具有至少90％的同源性。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗B细胞成熟抗原的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的可变区包括互补决定区CDR1、互补决定区CDR2和互补决定区CDR3，所述CDR1的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示或与SEQIDNO.1所示的氨基酸序列具有至少90％的同源性，所述CDR2的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示或与SEQIDNO.2所示的氨基酸序列具有至少90％的同源性，所述CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示或与SEQIDNO.3所示的氨基酸序列具有至少90％的同源性。


2.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的可变区还包括框架区FR1、框架区FR2、框架区FR3和框架区FR4，所述FR1的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，所述FR2的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示，所述FR3的氨基酸序列如SEQIDNO.6所示，所述FR4的氨基酸序列如SEQIDNO.7所示。


3.根据权利要求3所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQIDNO.8所示或与SEQIDNO.8所示的氨基酸序列具有至少90％的同源性。


4.与权利要求1或2或3所述纳米抗体相关的生物材料，其特征在于，所述生物材料为A1)至A8)中的任一种：
A1)编码权利要求1或2或3所述纳米抗体的核酸分子；
A2)含有A1)所述核酸分子的表达盒；
A3)含有A1)所述核酸分子的重组载体；
A4)含有A2)所述表达盒的重组载体；
A5)含有A1)所述核酸分子的转基因动物细胞系；
A6)含有A2)所述表达盒的转基因动物细胞系；
A7)含有A3)所述重组载体的转基因动物细胞系；
A8)含有A4)所述重组载体...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅志超，吴靖，余涛，罗新高，
申请(专利权)人：深圳市南科生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44