一种包含NT-proBNP抗原结合结构域的结合蛋白制造技术

本发明专利技术涉及一种新颖的包含NT‑proBNP抗原结合结构域的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。所述结合蛋白活性强，与人NT‑proBNP蛋白具有很高的亲和力，可广泛应用于NT‑proBNP蛋白的检测领域。

A binding protein containing NT proBNP antigen binding domain

【技术实现步骤摘要】
一种包含NT-proBNP抗原结合结构域的结合蛋白
本专利技术涉及免疫
，具体而言，涉及一种一种包含NT-proBNP抗原结合结构域的结合蛋白。
技术介绍
1988年日本学者Sudoh首次从猪脑内分离得到一种具有强有力的利尿、扩血管和降压作用的多肽，将其命名为脑钠肽(BrainNatriureticPeptide，BNP)。BNP分布在心脏含量最高，但心肌细胞首先合成的是含有108个氨基酸的proBNP(BNP前体)，当心肌细胞受到刺激后，proBNP在内切酶的作用下裂解为含有76个氨基酸、无生物活性的N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)和含有32个氨基酸、具有活性的B型利钠肽(BNP)，两者来源相同并且等摩尔分泌释放进入血循环。当心脏容量负荷增加或心脏功能受损时，N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)与BNP的指标浓度会异常升高，其中NT-proBNP相对BNP生物稳定性较好，半衰期较长(120min)，浓度相对较稳定，有效检测时间长，血液中含量相对比BNP高约16～20倍，因此检测相对容易，并且血浆标本在体外的稳定性长(>48h)，是诊断心力衰竭和评价心脏功能的最佳心肌标志物。正常的人血液中NT-proBNP含量一般低于0.3ng/mL。当心脏功能受损，心肌扩张时，NT-proBNP会快速合成并大量分泌释放进入到人体血液中。在发现一些相关早期病症的时候，准确、灵敏、高效稳定地测定血液中NT-proBNP的量，能给早期心功能不全、心衰、呼吸困难的心源性及非心源性心衰治疗及预后监测、急性冠状动脉综合征的分级等方面提供快速、准确的早期诊断依据。目前用于检NT-proBNP含量的方法主要有金标定性试验、荧光免疫法、酶联免疫吸附试验(ELISA)和磁微粒化学发光法(CMIA)，但是这些测量方法都需要针对于NT-proBNP的特异性单克隆抗体，目前国内用于检测NT-proBNP的单克隆抗体灵敏度、特异性上都不够理想。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术涉及一种新颖的包含NT-proBNP抗原结合结构域的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。其中所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区：或；与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与NT-proBNP具有KD≤2.26×10-8的亲和力；互补决定区CDR-VH1为G-X1-S-X2-T-T-Y-Y-X3-D，其中，X1是P或F，X2是I、V或L，X3是I、V或L；互补决定区CDR-VH2为M-T-K-D-X1-N-A-V-H-X2-P-T-X3-R-S，其中，X1是G或A，X2是Q或N，X3是I、V或L；互补决定区CDR-VH3为V-X1-G-X2-I-D-X3-G，其中，X1是K或R，X2是I、V或L，X3是F或W；互补决定区CDR-VL1为G-S-S-D-X1-V-G-X2-G-D-Y-X3-N，其中，X1是Q或N，X2是F或P，X3是I、V或L；互补决定区CDR-VL2为I-F-X1-A-X2-S-R-X3-R-G，其中，X1是A或G，X2是T、Y或S，X3是I、V或L；互补决定区CDR-VL3为G-S-X1-N-S-R-X2-Y-V-X3-G，其中，X1是P、A或G，X2是GG或N，X3是W或F。一个重要优点在于，所述结合蛋白活性强，与人NT-proBNP具有很高的亲和力，且与目前市面上常见的NT-proBNP抗体相比，具有较优的亲和力。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术一个实施例中抗人NT-proBNP的单克隆抗体电泳图。具体实施方式本专利技术可通过后续对于本专利技术一些实施方案描述以及其中所包括的实施例的详细内容而更容易被了解。在进一步叙述本专利技术之前，应明了本专利技术不会被局限于所述特定实施方案中，因为这些实施方案必然是多样的。亦应明了本说明书中所使用的用语仅是为了阐述特定实施方案，而非作为限制，因为本专利技术的范围将会被仅仅界定在所附的权利要求中。名词定义“包含抗原结合结构域的结合蛋白”泛指包含CDR区的一切蛋白/蛋白片段。“抗体”此用语包括多克隆抗体及单克隆抗体以及这些抗体的抗原化合物结合片段，包括Fab、F(ab’)2、Fd、Fv、scFv、双特异抗体和抗体最小识别单位，以及这些抗体和片段的单链衍生物。抗体的类型可以选择IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgD。此外，“抗体”此用语包括天然发生的抗体以及非天然发生的抗体，包括例如嵌合型(chimeric)、双功能型(bifunctional)和人源化(humanized)抗体，以及相关的合成异构形式(isoforms)。“抗体”此用语可和“免疫球蛋白”互换使用。抗体的“可变区”或“可变结构域”是指抗体的重链或轻链的氨基端结构域。重链的可变结构域可以被称为“VH”。轻链的可变结构域可以被称为“VL”。这些结构域通常是抗体的最可变的部分，并含有抗原结合位点。轻链或重链可变区(VL或VH)由被三个称为“互补决定区”或“CDR”的高变区打断的构架区构成。构架区和CDR的范围已被精确定义，例如在Kabat(参见《免疫重要的蛋白质的序列》(SequencesofProteinsofImmunologicalInterest)，E.Kabat等，美国卫生与人类服务部(U.S.DepartmentofHealthandHumanServices)，(1983))和Chothia中。抗体的构架区，即构成要件轻链和重链的组合的构架区，起到定位和对齐CDR的作用，所述CDR主要负责与抗原的结合。当在本文中使用时，“构架”或“FR”区意味着抗体可变结构域的排除被定义为CDR的那些区域之外的区域。每个抗体可变结构域构架可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域(FR1、FR2、FR3和FR4)。通常情况下，重链和轻链的可变区VL/VH可由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。当在本文中使用时，与多肽或核酸相关联的术语“纯化的”或“分离的”是指多肽或核酸不是处于其天然介质中或天然形式下。因此，术语“分离的”包括从其原始环境，例如如果它是天然存在的，从天然环境取出的多肽或核酸。例如，分离的多肽通常不含通常与其结合或通常与其混合或在溶液中的至少某些蛋白质或其他细胞组分。分离的多肽包括细胞裂解物中包含的天然生产的所述多肽，纯化或部分纯化形式的所述多肽，重组多肽，被细胞表达或分泌的所述多肽，以及在异源宿主细胞或培养本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含NT-proBNP抗原结合结构域的结合蛋白，其特征在于，其中所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区：或；与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与NT-proBNP具有K

【技术特征摘要】
20181219 CN 20181155746851.一种包含NT-proBNP抗原结合结构域的结合蛋白，其特征在于，其中所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区：或；与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与NT-proBNP具有KD≤2.26×10-8的亲和力；
互补决定区CDR-VH1为G-X1-S-X2-T-T-Y-Y-X3-D，其中，
X1是P或F，X2是I、V或L，X3是I、V或L；
互补决定区CDR-VH2为M-T-K-D-X1-N-A-V-H-X2-P-T-X3-R-S，其中，
X1是G或A，X2是Q或N，X3是I、V或L；
互补决定区CDR-VH3为V-X1-G-X2-I-D-X3-G，其中，
X1是K或R，X2是I、V或L，X3是F或W；
互补决定区CDR-VL1为G-S-S-D-X1-V-G-X2-G-D-Y-X3-N，其中，
X1是Q或N，X2是F或P，X3是I、V或L；
互补决定区CDR-VL2为I-F-X1-A-X2-S-R-X3-R-G，其中，
X1是A或G，X2是T、Y或S，X3是I、V或L；
互补决定区CDR-VL3为G-S-X1-N-S-R-X2-Y-V-X3-G，其中，
X1是P、A或G，X2是GG或N，X3是W或F；
优选的：
所述互补决定区CDR-VH1中，X1是F；
所述互补决定区CDR-VH2中，X1是G；
所述互补决定区CDR-VH3中，X1是R；
所述互补决定区CDR-VL1中，X2是F；
所述互补决定区CDR-VL2中，X1是G；
所述互补决定区CDR-VL3中，X3是F；
优选的，所述互补决定区CDR-VH1中，X2是I；
优选的，所述互补决定区CDR-VH1中，X2是V；
优选的，所述互补决定区CDR-VH1中，X2是L；
优选的，所述互补决定区CDR-VH1中，X3是I；
优选的，所述互补决定区CDR-VH1中，X3是V；
优选的，所述互补决定区CDR-VH1中，X3是L；
优选的，所述互补决定区CDR-VH2中，X2是Q；
优选的，所述互补决定区CDR-VH2中，X2是N；
优选的，所述互补决定区CDR-VH2中，X3是I；
优选的，所述互补决定区CDR-VH2中，X3是V；
优选的，所述互补决定区CDR-VH2中，X3是L；
优选的，所述互补决定区CDR-VH3中，X2是I；
优选的，所述互补决定区CDR-VH3中，X2是V；
优选的，所述互补决定区CDR-VH3中，X2是L；
优选的，所述互补决定区CDR-VH3中，X3是F；
优选的，所述互补决定区CDR-VH3中，X3是W；
优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X1是Q；
优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X1是N；
优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X3是I；
优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X3是V；
优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X3是L；
优选的，所述互补决定区CDR-VL2中，X2是T；
优选的，所述互补决定区CDR-VL2中，X2是Y；
优选的，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟媛，钟冬梅，叶庆妮，梁碧，游辉，马秋燕，李蔚芝，
申请(专利权)人：东莞市朋志生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44