一种基于SNAP-tag技术的细胞膜荧光探针及其制备和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种基于SNAP‑tag技术的细胞膜荧光探针及其制备和应用，该荧光探针基于罗丹明6G小分子荧光染料、连接SNAP蛋白标签BG基团，其结构式如(1)所示。本发明专利技术涉及的荧光探针具有小分子荧光染料优异的光稳定性、荧光亮度的优势，同时与现有的利用小分子染料双亲性(亲水亲油性)识别细胞膜不同，该探针可以专一的共价键结合细胞膜SNAP蛋白，结合更为稳固，可长时间成像观测；且其合成步骤简单、原料廉价易得，在细胞膜成像领域中有着巨大的应用前景。

A cell membrane fluorescent probe based on snap tag technology and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种基于SNAP-tag技术的细胞膜荧光探针及其制备和应用
本专利技术属荧光成像领域，具体涉及一种基于SNAP-tag技术的细胞膜荧光探针及其制备和应用。
技术介绍
基于有机小分子荧光染料的SNAP-tag蛋白标签技术，具有独特的优点：蛋白标签与底物的反应速度快且特异性高；通过共价键的结合蛋白标记的稳定性好，即使在体外分析SDS-PAGE的变性条件下仍可稳定标记；通过模块化的设计将标签特异性底物BG基团与功能染料结合,灵活性高；便于衍生多样化的荧光染料，通用性强，可满足各种荧光成像研究的需求。目前，SNAP-tag在细胞内蛋白质标记、体外分析及靶向荧光的检测的研究中获得了非常广泛的应用。尽管如此，这种方法也存在些许不足：为了达到更高的信号强度、提高信噪比，需要充分的洗涤去除非特异性染色，这也限制了其在活细胞实时成像中的应用。细胞膜又称质膜，其主要是由磷脂构成的富有弹性的半透性膜，在生命活动过程中占据着十分重要的位置，如选择性地交换物质，吸收营养物质，排出代谢废物，分泌与运输蛋白质。但是目前关于细胞膜成像的荧光探针主要以分子双亲性(亲水亲本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于SNAP-tag技术的细胞膜荧光探针，其特征在于该荧光探针以罗丹明6G为荧光母体，对氨基鸟嘌呤为识别基团，其结构如下所示：/n

【技术特征摘要】
1.一种基于SNAP-tag技术的细胞膜荧光探针，其特征在于该荧光探针以罗丹明6G为荧光母体，对氨基鸟嘌呤为识别基团，其结构如下所示：



其中:n＝0,1,2,3,4。


2.根据权利要求1所述一种基于SNAP-tag技术的细胞膜荧光探针的制备方法，其特征在于按照如下步骤进行：
(1)中间体罗丹明6G-羧酸的合成
罗丹明6G溶于乙醇中，加入强碱试剂的水溶液，回流反应5-10h后，减压除去有机溶剂，硅胶柱分离,洗脱剂为体积比20-5:1的二氯甲烷和甲醇，减压除去溶剂后得中间体；
(2)中间体罗丹明6G-琥珀酰亚胺羧酸酯的合成
将罗丹明6G-羧酸，N-羟基琥珀酰亚胺，缩合试剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐依次加入到二氯甲烷中，室温搅拌10-16h，减压除去溶剂得粗产品；
(3)中间体罗丹明6G-甲胺烷基酸得合成
将罗丹明6G-琥珀酰亚胺羧酸酯粗产品、甲胺丁酸盐酸盐、碳酸钾依次加入到乙腈中，室温搅拌过夜；减压除去溶剂，硅胶柱分离，洗脱剂为体积比50-10:1的二氯甲烷和甲醇，减压除去溶剂后得紫色固体；
(4)探针的合成
将罗丹明6G-甲胺烷基酸、氨基鸟嘌呤、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑、碳酸钾依次加入到N,N-二甲基甲酰胺中，室温搅拌两天；减压除去溶剂，硅胶柱分离，洗脱剂为体积比40-3:1的二氯甲烷和甲醇，减压除去溶剂后得紫色固体。


3.根据权利要求2所述一种基于SNAP-tag技术的细胞膜荧光探针的制备方法，其特征在于步骤(1)中：罗丹明6G与强碱的质量比为1:0.2-0.4，
水与乙醇的体积比为1:5-8，
罗丹明6G与乙醇的质量与体积比为1:20-40g/mL。


4.根据权利要求2所述一种基于SNAP-tag技术的细...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐兆超，周伟，乔庆龙，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21