一种利用CRISPR-Cas9技术建立CDK13基因敲除动物模型的方法技术

本发明专利技术属于利用基因修饰技术制作基因敲除动物模型的领域，公开了一种利用CRISPR‑Cas9技术建立CDK13基因敲除动物模型的方法，包括靶向小鼠CDK13基因的gRNA载体构建、mRNA制备、显微注射获得F0小鼠、鉴定筛选出阳性F0代小鼠、阳性F0代小鼠性成熟后与WT小鼠配繁、筛选鉴定出阳性F1代杂合子小鼠和获得纯合后代；本发明专利技术还提供了一种利用CRISPR‑Cas9技术建立CDK13基因敲除动物模型的试剂盒。本发明专利技术能够简便高效的实现基因组的精确修饰，具有效率高的优点，降低了基因编辑模型制备的难度和成本，本发明专利技术提供的试剂盒加速了基因编辑模型的制备进入生产阶段的速度，能够更好的进行CDK13基因敲除的研究。

A method of establishing CDK13 knockout animal model by crispr-cas9 Technology

【技术实现步骤摘要】
一种利用CRISPR-Cas9技术建立CDK13基因敲除动物模型的方法
本专利技术属于利用基因修饰技术制作基因敲除动物模型的领域，具体涉及一种利用CRISPR-Cas9技术建立CDK13基因敲除动物模型的方法。
技术介绍
CRISPR/Cas(ClusteredRegularlyInterspacedShotPalindromicrepeats/CRISPR-associated)系统，是一种来源于细菌获得性免疫的由RNA介导Cas蛋白对目的基因进行靶向修饰的技术。经过研究者改造过的TypeIICRISPR/Cas9系统自2013年成功敲除哺乳动物细胞后，现在己经被应用于多种模式生物的基因敲除。CRISPR/Cas9系统载体构建简单快速、易操作、省时省力周期短，且几乎对所有物种都适用。针对每个基因，CRISPR/Cas9只需要构建一个sgRNA(singleguideRNA)，而且效率都很高，序列选择限制较小，只需要基因组上出现GG就可以。与zinc-fingernucleases(ZFNs)andTALEN相比，CRISPR/Cas9本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用CRISPR-Cas9技术建立CDK13基因敲除动物模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1：靶向小鼠CDK13基因的gRNA载体构建/n通过对CDK13基因进行分析，选择合适的敲除区域，选定具体的敲除区域后，根据靶基因设计一对相应的gRNA序列，并合成gRNA序列，gRNA序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；/nS2：mRNA制备/n将步骤S1中合成的一对gRNA序列在体外转录成mRNA；/nS3：显微注射获得F0小鼠/n将步骤S2中获得的mRNA与cas9质粒一并通过显微注射的方式注射入目标受精卵中，培育后获得F0代小鼠；/nS4：鉴定筛选出阳性F0代小...

【技术特征摘要】
1.一种利用CRISPR-Cas9技术建立CDK13基因敲除动物模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：靶向小鼠CDK13基因的gRNA载体构建
通过对CDK13基因进行分析，选择合适的敲除区域，选定具体的敲除区域后，根据靶基因设计一对相应的gRNA序列，并合成gRNA序列，gRNA序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2；
S2：mRNA制备
将步骤S1中合成的一对gRNA序列在体外转录成mRNA；
S3：显微注射获得F0小鼠
将步骤S2中获得的mRNA与cas9质粒一并通过显微注射的方式注射入目标受精卵中，培育后获得F0代小鼠；
S4：鉴定筛选出阳性F0代小鼠
剪除出生的F0代小鼠的鼠尾，将鼠尾裂解后提取DNA做genetyping鉴定，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王荣跃，
申请(专利权)人：温州医科大学附属第二医院，温州医科大学附属育英儿童医院，
类型：发明
国别省市：浙江;33