一种从脂肪组织中提取蛋白质的方法技术

本发明专利技术的目的是提供一种从脂肪组织中提取蛋白质的方法，包括将所述脂肪组织用镊子夹取放入到1.5ml离心管中，然后在1.5ml离心管中加入100mg蛋白提取粉和50ul所述第一缓冲液的步骤；充分研磨和混合的步骤；离心处理步骤和在保持零下20度的冰箱中进行开盖孵育的步骤；本发明专利技术的目的是提供一种从脂肪组织中提取蛋白质的方法，采用离心管柱为表面具有孔径结构的离心管柱，操作简单，蛋白质获得率高。

A method of extracting protein from adipose tissue

【技术实现步骤摘要】
一种从脂肪组织中提取蛋白质的方法
本专利技术涉及细胞生命科学
，尤其涉及一种从脂肪组织中提取蛋白质的方法。
技术介绍
脂肪组织主要由脂肪细胞组成。脂肪细胞质内充满脂肪滴，胞质位于细胞边缘成一薄层，核亦被挤到细胞的边缘，压成扁形。脂肪组织特别是白色脂肪组织除了具有能量储存功能外，还与内分泌和器官炎症有关。从脂肪组织中提取和分析蛋白质对于了解许多生理/病理状态越来越重要。但是由于白色脂肪组织(WAT)和棕色脂肪组织(BAT)中蛋白质含量很低，所以从脂肪组织中提取蛋白质具有很大的难度。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种从脂肪组织中提取蛋白质的方法。本专利技术所提供的一种从脂肪组织中提取蛋白质的方法，包括如下步骤：S11将第一缓冲液、离心管柱和接收管套管放置于冰上进行预冷的步骤；S12取50mg至80mg脂肪组织放置在具有较强吸附能力的纸巾上，对所述脂肪组织进行按压从而将脂肪组织中部分油进行预去除；S13将所述脂肪组织用镊子夹取放入到1.5ml离心管中，然后在1.5ml离心管中加入100mg蛋白提取粉和50ul所述第一缓冲液；S14用研磨棒将1.5ml离心管中的脂肪组织、蛋白提取粉和第一缓冲液进行研磨和混合处理2分钟，形成糊状混合物；然后再次加入25050ul所述第一缓冲液，充分研磨和混合30秒钟；S15盖上1.5ml离心管盖子放入离心机，将离心机的相对离心力设置为350xg，离心处理1分钟；S16将1.5ml离心管中的上清液转移到离心管柱套管中并将离心管柱套管置入保持零下20度的冰箱中进行开盖孵育18分钟；S17孵育后立刻在相对离心力设置为350xg的离心机中开盖离心处理100秒；S18去除离心管柱，完成蛋白质提取。本专利技术所提供的另一种从脂肪组织中提取蛋白质的方法，包括如下步骤：S21使用低速离心方式收集脂肪细胞的步骤；S22将收集到的脂肪细胞置入1.5ml离心管中，然后加入1ml预冷的PBS2重悬细胞和100mg蛋白提取粉；S23将1.5ml离心管盖上盖子，放入相对离心力设置为500xg的离心机中离心处理3分钟；S24去除1.5ml离心管中的上清液；S25将1.5ml离心管中剩余组分用研磨棒进行研磨和混合处理2分钟，使其成为细胞均浆；S26在1.5ml离心管中加入250ul第一缓冲液，然后再次用研磨棒进行研磨和混合处理30秒；S27盖上1.5ml离心管盖子放入离心机，将离心机的相对离心力设置为350xg，离心处理1分钟；S28将1.5ml离心管中的上清液转移到离心管柱套管中并将离心管柱套管置入保持零下20度的冰箱中进行开盖孵育18分钟；S29孵育后立刻在相对离心力设置为350xg的离心机中开盖离心处理100秒；S210去除离心管柱，完成蛋白质提取。本专利技术所提供的从脂肪组织中提取蛋白质的方法，所述孵育时间预评估步骤包括：在1.5ml离心管中加入0.5ml水；将1.5ml离心管放入设定为零下20摄氏度的冰箱中进行开盖孵育并开始计时或将1.5ml离心管放入设定为零下70摄氏度至零下70摄氏度的冰箱中进行冷冻并开始计时；当水完全冷冻时结束计时；将计时结果作为所述将1.5ml离心管中的上清液转移到离心管柱套管中并将离心管柱套管置入保持零下20度的冰箱中进行开盖孵育的时间。本专利技术所提供的从脂肪组织中提取蛋白质的方法，操作简单，蛋白质获得率高。附图说明图1为本专利技术实施例一所述的一种从脂肪组织中提取蛋白质的方法流程示意图；图2为本专利技术实施例一所述的另一种从脂肪组织中提取蛋白质的方法流程示意图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例一如图1所示，本实施例提供一种从脂肪组织中提取蛋白质的方法，包括如下步骤：S11将第一缓冲液、离心管柱和接收管套管放置于冰上进行预冷的步骤；S12取50mg至80mg脂肪组织放置在具有较强吸附能力的纸巾上，对所述脂肪组织进行按压从而将脂肪组织中部分油进行预去除；S13将所述脂肪组织用镊子夹取放入到1.5ml离心管中，然后在1.5ml离心管中加入100mg蛋白提取粉和50ul所述第一缓冲液；S14用研磨棒将1.5ml离心管中的脂肪组织、蛋白提取粉和第一缓冲液进行研磨和混合处理2分钟，形成糊状混合物；然后再次加入25050ul所述第一缓冲液，充分研磨和混合30秒钟；S15盖上1.5ml离心管盖子放入离心机，将离心机的相对离心力设置为350xg，离心处理1分钟；S16将1.5ml离心管中的上清液转移到离心管柱套管中并将离心管柱套管置入保持零下20度的冰箱中进行开盖孵育18分钟；S17孵育后立刻在相对离心力设置为350xg的离心机中开盖离心处理100秒；S18去除离心管柱，完成蛋白质提取。本实施例所提供的从脂肪组织中提取蛋白质的方法，还包括将提取出的蛋白质中的非水溶性细胞组分进行稀释的步骤。本领域技术人员可以理解，稀释后的非水溶性细胞组分混合液可用于ELIS1A检测水溶性蛋白。本实施例所提供的从脂肪组织中提取蛋白质的方法，还包括：在提取出的蛋白溶液中加入1/10第二缓冲液，使之成为变性蛋白溶液；本领域技术人员可以理解，所述变形蛋白溶液，可用于S1DS1-PAGE或WeS1tern或其他下游应用中。本实施例所提供的从脂肪组织中提取蛋白质的方法，还包括：在提取出的蛋白溶液中加入1/10第三缓冲液，使之成为非变性蛋白溶液；本领域技术人员可以理解，所述非变性蛋白溶液，可用于IP或ELIS1A或其他下游应用中。本实施例所提供的从脂肪组织中提取蛋白质的方法，还包括：在提取出的蛋白溶液中加入1/10第四缓冲液，从而形成可用于2D分析的混合溶液。所述第四缓冲液为2X的2D胶样品缓冲液。本实施例所提供的从脂肪组织中提取蛋白质的方法，还包括将透析蛋白溶液的步骤。本领域技术人员可以理解，所述第一缓冲液中含有影响质谱分析的组分，对蛋白溶液进行透析处理后，便于对进行蛋白溶液进行质谱分析。本实施例所提供的从脂肪组织中提取蛋白质的方法，还包括用TCA法沉淀蛋白的步骤。本领域技术人员可以理解，所述第一缓冲液中含有影响质谱分析的组分，对蛋白容易用TCA法沉淀蛋白后，便于对进行蛋白溶液进行质谱分析。本实施例所提供的从脂肪组织中提取蛋白质的方法，所述每次使用研磨棒进行研磨和混合处理后，须用酒精对研磨棒进行擦拭清洁并在室温环境下空气干燥处理。本实施例所提供的从脂肪组织中提取蛋白质的方法，还包括孵育时间预评估步骤，包括：在1.5ml离心管中加入0.5ml水；将1.5ml离心管放入设定为零下20摄氏度的冰箱中进行开盖孵育并开始计时；<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从脂肪组织中提取蛋白质的方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS11将第一缓冲液、离心管柱和接收管套管放置于冰上进行预冷的步骤；/nS12取50mg至80mg脂肪组织放置在具有较强吸附能力的纸巾上，对所述脂肪组织进行按压从而将脂肪组织中部分油进行预去除；/nS13将所述脂肪组织用镊子夹取放入到1.5ml离心管中，然后在1.5ml离心管中加入100mg蛋白提取粉和50ul所述第一缓冲液；/nS14用研磨棒将1.5ml离心管中的脂肪组织、蛋白提取粉和第一缓冲液进行研磨和混合处理2分钟，形成糊状混合物；然后再次加入25050ul所述第一缓冲液，充分研磨和混合30秒钟；/nS15盖上1.5ml离心管盖子放入离心机，将离心机的相对离心力设置为350xg，离心处理1分钟；/nS16将1.5ml离心管中的上清液转移到离心管柱套管中并将离心管柱套管置入保持零下20度的冰箱中进行开盖孵育18分钟；/nS17孵育后立刻在相对离心力设置为350xg的离心机中开盖离心处理100秒；/nS18去除离心管柱，完成蛋白质提取。/n

【技术特征摘要】
1.一种从脂肪组织中提取蛋白质的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S11将第一缓冲液、离心管柱和接收管套管放置于冰上进行预冷的步骤；
S12取50mg至80mg脂肪组织放置在具有较强吸附能力的纸巾上，对所述脂肪组织进行按压从而将脂肪组织中部分油进行预去除；
S13将所述脂肪组织用镊子夹取放入到1.5ml离心管中，然后在1.5ml离心管中加入100mg蛋白提取粉和50ul所述第一缓冲液；
S14用研磨棒将1.5ml离心管中的脂肪组织、蛋白提取粉和第一缓冲液进行研磨和混合处理2分钟，形成糊状混合物；然后再次加入25050ul所述第一缓冲液，充分研磨和混合30秒钟；
S15盖上1.5ml离心管盖子放入离心机，将离心机的相对离心力设置为350xg，离心处理1分钟；
S16将1.5ml离心管中的上清液转移到离心管柱套管中并将离心管柱套管置入保持零下20度的冰箱中进行开盖孵育18分钟；
S17孵育后立刻在相对离心力设置为350xg的离心机中开盖离心处理100秒；
S18去除离心管柱，完成蛋白质提取。


2.一种从脂肪组织中提取蛋白质的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S21使用低速离心方式收集脂肪细胞的步骤；
S22将收集到的脂肪细胞置入1.5ml离心管中，然后加入1ml预冷的PBS2重悬细胞和100mg蛋白提取粉；
S23将1.5ml离心管盖上盖子，放入相对离心力设置为500xg的离心机中离心处理3分钟；
S24去除1.5ml离心管中的上清液；
S25将1.5ml离心管中剩余组分用研磨棒进行研磨和混合处理2分钟，使其成为细胞均浆；
S26在1.5ml离心管中加入250ul第一缓冲液，然后再次用研磨棒进行研磨和混合处理30秒；
S27盖上1.5ml离心管盖子放入离心机，将离心机的相对离心力设置为350xg，离心处理1分钟；
S28将1.5ml离心管中的上清液转移到离心管柱套管中并将离心管柱套管置入保持零下20度的冰箱中进行开盖孵育18分钟；<...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟军，谭圆圆，
申请(专利权)人：上海循益生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31