一种支原体鉴定琼脂培养基及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种成分简单、增大菌落效果好且灵敏度高的支原体鉴定琼脂培养基以及其制备方法。本发明专利技术所述培养基按质量百分比计算，该培养基包括以下成分：基础培养基5.2～9.4％，添加剂0.309～0.645％，血清5.0～9.0％，余量为纯化水，其中，所述添加剂内包含有CaCl

A agar medium for Mycoplasma identification and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种支原体鉴定琼脂培养基及其制备方法
本专利技术涉及培养基领域，尤其涉及一种用于解脲支原体的支原体鉴定琼脂培养基，以及利用该培养基对支原体进行培养鉴定的方法。
技术介绍
支原体（Mycoplasma）归属于柔膜体纲，支原体目（Mycoplasmatales），支原体科，是一群大小介于细菌与病毒之问的病原体，是机会致病菌。支原体在泌尿生殖道存在定植现象，人群中存在着相当数量的支原体携带者而没有症状和体征，以Uu最为突出。培养法是目前国内医疗机构进行解脲支原体和人型支原体检测的主要手段，而且主要是使用液体培养基直接检测并同时进行支原体药敏试验，已经沿用近20年，但在临床中已暴露出很多缺陷，如假阳性率高、假阴性、以及污染干扰严重等。液体培养法易受到细菌或真菌的污染导致假阳性，因此需要固体培养基确认菌落形态才能最后诊断。固体琼脂法可以观察支原体特征性的菌落，如“海胆型”或“油煎蛋样”菌落是微生物学诊断的金标准，但是解脲支原体在固体培养基中菌落极其小，难以观察。Uu在生长过程中产生尿素酶是其最重要的一个生理特征，尿素酶可以和多种金属离子发生氧化，生成不透明的氧化物。传统支原体琼脂培养基采用硫酸锰增大解脲支原体菌落的大小便于观察，但是硫酸锰对支原体具有一定的毒性，在增大菌落的同时会抑制支原体的生产。为了解决支原体在固体琼脂上菌落小，难以观察的难题，国内外专家学者进行了大量的研究。现在市面上的固体琼脂培养基均以A7鉴别琼脂（A7DifferentialAgar）发展改进而来，选用硫酸锰增大支原体菌落的大小，以便进行观察。但正如上所述，由于硫酸锰对支原体生长的抑制作用，导致这类固体琼脂培养基的灵敏度非常的低，达不到支原体检测的要求。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术的不足,提供一种成分简单、增大菌落效果好且灵敏度高的支原体鉴定琼脂培养基，以及该培养基的制备方法，该方法步骤简单，易于实现，大大地降低了成本。本专利技术所述支原体鉴定琼脂培养基所采用的技术方案是：按质量百分比计算，该培养基包括以下成分：基础培养基5.2～9.4％，添加剂0.309～0.645％，血清5.0～9.0％，余量为纯化水，其中，所述添加剂内包含有CaCl2，所述CaCl2在培养基中的占比为0.04～0.06％。进一步地，按在培养基中的质量百分占比计算，所述基础培养基包括以下组分：琼脂粉1.0～1.5％，胰酪胨1.0～1.5％，大豆胨0.3～0.6％，葡萄糖0.3～0.6％，磷酸氢二钾0.3～0.6％，氯化钠0.3～0.6％，酵母提取液2.0～4.0％。再进一步地，按在培养基中的质量百分占比计算，所述添加剂还包括以下组分：尿素0.12～0.26％，精氨酸0.12～0.26％，酚红0.02～0.05％，青霉素钾0.003～0.005％，氨苄西林钠0.003～0.005％，两性霉素0.003～0.005％。本专利技术所述支原体鉴定琼脂培养基的有益效果是：本专利技术摒弃了传统的加入硫酸锰作为添加剂的做法，而是采用CaCl2作为添加剂的一部分，解决了目前支原体固体琼脂培养基灵敏度与解脲支原体菌落大小无法兼顾的问题，目前使用的硫酸锰虽然可以增大解脲支原体菌落的大小，但是也会抑制支原体的生长，影响产品的灵敏度，本专利技术以CaCl2作为支原体菌落增强剂具有非常好的效果，既可增强解脲支原体菌落的大小，也不会抑制支原体的生长，不会影响产品的灵敏度；作为支原体检测金标准可以提高目前检测方法准确性：目前液体培养基假阳性多，固体培养基由于硫酸锰对支原体的抑制作用导致灵敏度低，假阴性多，本专利技术产品灵敏度高、菌落易观察，可以很好的弥补目前市场上产品的缺陷。此外，上述支原体鉴定琼脂培养基的制备方法包括以下步骤：（1）基础培养基的制备：按比例称取琼脂粉、胰酪胨、大豆胨、磷酸氢二钾、葡萄糖、氯化钠和酵母提取液，直接加入纯化水中，加热使完全溶解，充分混匀后用2mol/mlHCL调节pH值至6.3±0.05，将培养基加热煮沸5分钟后，经121℃、15分钟高压灭菌备用；（2）添加剂的制备：按比例称取尿素、精氨酸、酚红、青霉素钾、氨苄西林钠、两性霉素、CaCl2，充分溶解于纯化水中备用；（3）培养基的配制：在百级洁净条件下，将高压灭菌后的基础培养基冷却至55～56℃，将无菌过滤后的血清加热至55～56℃，按照比例量取血清加入基础培养基中，充分混匀；将经过无菌过滤的添加剂加入基础培养基中，充分混匀，用2mol/mlHCL调节培养基pH值至6.05±0.05；（4）固体培养基制备：在百级洁净条件下，对培养基进行无菌分装，待培养基充分冷却凝固后，即得到固体培养基。进一步地，所述步骤（3）中，血清和添加剂均采用0.22μm的滤膜进行无菌过滤。上述方案可见，本专利技术所述支原体鉴定琼脂培养基的制备方法步骤简单，易于实现，大大地降低了成本。附图说明图1是利用本专利技术支原体鉴定琼脂培养基进行Uu菌落培养前的菌落示意图，图中所示为40倍放大图；图2是利用本专利技术支原体鉴定琼脂培养基进行Uu菌落培养后的菌落示意图，图中所示为40倍放大图，图中显示，菌落清晰可见，且数量大，说明培养基的营养丰富，培养效果好；图3是另一实施例利用本专利技术支原体鉴定琼脂培养基进行Uu菌落培养后的菌落示意图，图中所示为40倍放大图，图中显示，菌落清晰可见，且菌落体积大，说明培养基的营养丰富，培养效果好。具体实施方式本专利技术所述支原体鉴定琼脂培养基按质量百分比计算，该培养基包括以下成分：基础培养基5.2～9.4％，添加剂0.309～0.645％，血清5.0～9.0％，余量为纯化水，其中，所述添加剂内包含有CaCl2，所述CaCl2在培养基中的占比为0.04～0.06％。所述纯化水由纯水机制得。具体地，按在培养基中的质量百分占比计算，所述基础培养基包括以下组分：琼脂粉1.0～1.5％，胰酪胨1.0～1.5％，大豆胨0.3～0.6％，葡萄糖0.3～0.6％，磷酸氢二钾0.3～0.6％，氯化钠0.3～0.6％，酵母提取液2.0～4.0％。所述添加剂除了含有CaCl2，还包括以下组分：尿素0.12～0.26％，精氨酸0.12～0.26％，酚红0.02～0.05％，青霉素钾0.003～0.005％，氨苄西林钠0.003～0.005％，两性霉素0.003～0.005％。上述支原体鉴定琼脂培养基的制备方法包括以下步骤：（1）基础培养基的制备：按比例称取琼脂粉、胰酪胨、大豆胨、磷酸氢二钾、葡萄糖、氯化钠和酵母提取液，直接加入纯化水中，加热使完全溶解，充分混匀后用2mol/mlHCL调节pH值至6.3±0.05，将培养基加热煮沸5分钟后，经121℃、15分钟高压灭菌备用。（2）添加剂的制备：按比例称取尿素、精氨酸、酚红、青霉素钾、氨苄西林钠、两性霉素、CaCl2，充分溶解于纯化水中备用。（3）培养基的配制：在百级洁净条件下，将高压灭菌后的基础培养基冷却至55～56℃，将无菌过滤后本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种支原体鉴定琼脂培养基，其特征在于，按质量百分比计算，该培养基包括以下成分：基础培养基5.2～9.4％，添加剂0.309～0.645％，血清5.0～9.0％，余量为纯化水，其中，所述添加剂内包含有CaCl

【技术特征摘要】
1.一种支原体鉴定琼脂培养基，其特征在于，按质量百分比计算，该培养基包括以下成分：基础培养基5.2～9.4％，添加剂0.309～0.645％，血清5.0～9.0％，余量为纯化水，其中，所述添加剂内包含有CaCl2，所述CaCl2在培养基中的占比为0.04～0.06％。


2.根据权利要求1所述的一种支原体鉴定琼脂培养基，其特征在于，按在培养基中的质量百分占比计算，所述基础培养基包括以下组分：
琼脂粉1.0～1.5％，胰酪胨1.0～1.5％，大豆胨0.3～0.6％，葡萄糖0.3～0.6％，磷酸氢二钾0.3～0.6％，氯化钠0.3～0.6％，酵母提取液2.0～4.0％。


3.根据权利要求2所述的一种支原体鉴定琼脂培养基，其特征在于，按在培养基中的质量百分占比计算，所述添加剂还包括以下组分：
尿素0.12～0.26％，精氨酸0.12～0.26％，酚红0.02～0.05％，青霉素钾0.003～0.005％，氨苄西林钠0.003～0.005％，两性霉素0.003～0.005％。


4.一种如权利要求3所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙宜峰，熊伟，马萍，王妹，曾冰冰，
申请(专利权)人：珠海市银科医学工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44