一种检测幽门螺旋杆菌的引物制造技术

本发明专利技术涉及微生物检测技术领域，公开了一种检测幽门螺旋杆菌的引物

【技术实现步骤摘要】
一种检测幽门螺旋杆菌的引物、探针、试剂盒


[0001]本专利技术涉及微生物检测
，具体涉及一种检测幽门螺旋杆菌的引物
、
探针
、
试剂盒
。

技术介绍

[0002]幽门螺杆菌
(Helicobacter pylori
，
H.pylori)
是一种单极
、
多鞭毛
、
螺旋形弯曲的革兰阴性细菌，大小为
(0.3
～
1.0)
μ
m
×
(2.0
～
5.0)
μ
m。
人类是幽门螺杆菌的主要宿主，是一种能从人胃中分离培养的微生物，也是被国际癌症研究机构
(International Agency for Research on Cancer
，
IARC)
定为Ⅰ类致癌原的细菌
。Hp
感染已对人类的生命健康构成严重威胁，鉴于
Hp
的易感性和对人类健康的高危害性，以及由于传播途径不确定而对其预防的不彻底性，国内外学者试图寻找一种高灵敏度和高特异度的方法对其进行检测，以实现“早发现早治疗”的目的
。
[0003]Hp
检测可分为侵入性检测和非侵入性检测，
Hp
侵入性检测方法主要包括内镜检查
、
组织病理切片染色法
、
免疫组织化学
(immunohistochemistry
，
IHC)
法
、
分离培养鉴定法等
。
内镜检查：近年来，内镜检查技术不断更新完善，具有直观
、
快速和准确等优点
。
但在
《
第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识
》
中提到由于内镜检测需要专业仪器设备和经验丰富的医师做出判断，而且检测过程会让患者产生一定的不适反应，所以不作为常规检测方法应用
。
组织病理切片染色法：该方法可在显微镜下直接查找
Hp。HE
染色法准确性较高且成本较低，但其操作过程繁琐
、
耗时较长且检测结果易受操作人员专业水平影响，因此无法在临床上作为常规检查开展
。Hp
分离培养鉴定法：
Hp
的分离培养鉴定法虽特异度高
(100
％
)
但其灵敏度低
(85
％～
95
％
)
，且
Hp
对生长环境的要求十分严苛，所以导致待检组织体外运输困难，加之细菌培养周期长和培养条件苛刻，通常用于
Hp
抗生素耐药性检测而不作为
Hp
感染的常规诊断方法
。
[0004]Hp
非侵入性检测方法主要包括尿素酶检测法
、
酶联免疫吸附试验
(enzyme linked immunosorbent assay
，
ELISA)
法
、
免疫层析试验
(immunochromatography assay
，
ICA)
和聚合酶链式反应
(polymerase chain reaction
，
PCR)
法等
。
尿素酶检测法：
15N
尿氨排出试验
(15N
‑
urine test)
与
13/14C
‑
UBT
检测的灵敏度和准确性较高，能够反映胃内整体情况且采样比呼气试验更方便，但由于其对肝肾组织有损害且检测质谱仪昂贵和标本时效性差等原因，导致其适用范围受限
。ICA
法：不需要特殊仪器和设备的辅助，仅肉眼观察条带颜色便可得出结果，但
ICA
法灵敏度和精确度较低，在
Hp
感染诊断中不适合单独使用
。PCR
法：自
PCR
法用于检测
Hp
感染以来，已广泛应用于胃组织活检标本
、
胃液
、
唾液
、
牙菌斑和粪便等标本的检测
。
然而
PCR
检测技术受取样及实验设计等影响，灵敏度和特异性不能满足临床需求
。
[0005]因此，有必要开发一种检测幽门螺旋杆菌的引物
、
探针
、
试剂盒，并通过对核酸扩增主要原料的筛选及扩增体系性能试验，设计出一套高特异性和高灵敏度的引物探针，有效解决目前幽门螺旋杆菌漏检
、
灵敏度低的问题，为临床幽门螺旋杆菌检测提供了更加可靠的检验方法
。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一
。
为此，本专利技术提出一种检测幽门螺旋杆菌的引物
、
探针
、
试剂盒，提高检测方法的特异性和灵敏度
。
[0007]本专利技术的第一方面提供一种检测幽门螺旋杆菌的引物和探针
。
[0008]具体的，所述引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：1所示；所述反向引物的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：2所示；所述探针的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：3所示
。
[0009]优选的，所述引物的
Tm
值为
54
～
58℃
；所述探针的
Tm
值为
60
～
63℃。
这样的温度可使引物和探针在
60℃
左右均可完成退火并且有效延伸，从而完成检测；并且正向和反向引物
Tm
值基本相同，但比配套探针的温度低
5℃
左右，这样的温度组合更有利于进行两步法扩增，增加其检测的特异性
。
[0010]优选的，所述探针的5’
端标记有荧光基团；所述探针的3’
端标记有淬灭基团
。
[0011]优选的，所述荧光基团为
FAM、TET、HEX、CY3、JOE
中的任意一种
。
[0012]优选的，所述淬灭基团为
BHQ1、BHQ2、TAMRA、DABCYL、MGB、Eclipse
中的任意一种
。
[0013]本专利技术的第二方面提供一种检测幽门螺旋杆菌的试剂盒
。
[0014]具体的，包括第一方面所述的引物和探针
。
[0015]优选的，所述试剂盒还包括明胶
、
镁离子缓冲液
、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种检测幽门螺旋杆菌的引物和探针，其特征在于，所述引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：1所示；所述反向引物的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：2所示；所述探针的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：3所示
。2.
根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述引物的
Tm
值为
54
～
58℃
；所述探针的
Tm
值为
60
～
63℃。3.
根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针的5’
端标记有荧光基团；所述探针的3’
端标记有淬灭基团
。4.
根据权利要求3所述的引物和探针，其特征在于，所述荧光基团为
FAM、TET、HEX、CY3、JOE
中的任意一种
。5.
根据权利要求3所述的引物和探针，其特征在于，所述淬灭基团为
BHQ1、BHQ2、TAMRA、DABCYL、MGB、...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙宜峰，熊伟，曾冰冰，杨文丽，
申请(专利权)人：珠海市银科医学工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：