细胞内递送及其方法技术

本发明专利技术公开用于转染细胞以将外源性材料引入细胞的方法和装置。所述方法包括在电场存在的情况下将细胞暴露在非恒定流区域，在不使细胞裂解的情况下促进将外源性材料引入细胞中。

Intracellular delivery and its methods

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞内递送及其方法
本专利技术涉及一种用于将外源性材料引入受非恒定流(unsteadyflow)影响的细胞中的方法，包括在外源性材料存在下将细胞暴露于电场。
技术介绍
生物微流体可用于分离或富集(Shieldsetal.2015)，修饰，培养和鉴定细胞。因此，生物微流体适用于基因修饰细胞疗法(GMCT)的开发和制造，其中细胞需要被分离或富集，修饰，培养和鉴定。基于修饰的T细胞的GMCTs可以为患有某些血液系统恶性肿瘤的患者提供明显改善的预后。具体地，以CD19为靶点的嵌合抗原-受体-T细胞免疫疗法(CAR-T)已显示出显著的反应，并可能治愈对所有先前疗法均无反应的晚期急性淋巴细胞白血病患者。基因修饰的CAR-T细胞是第一个获得FDA(Food&DrugAdministration)批准用于治疗癌症的细胞疗法，在此之前，急性淋巴细胞白血病的缓解率为83％。CAR-T细胞是通过对人T细胞进行基因修饰产生的，其导致修饰后的人T细胞在一个或多个共刺激域以及细胞内CD3-zeta激活域上显示出针对与铰链区连接的肿瘤靶标的细胞外单链可变片段本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过转染细胞将外源性材料引入细胞中的方法，包括：/n将含有细胞和外源性材料的液体引入微流体装置的流体通道中，所述流体通道包括至少一个分流器；/n当所述细胞流过至少一个分流器时，将细胞暴露于至少一个分流器下游的非恒定流，以暂时透化细胞膜而不使细胞被裂解；以及/n将所述细胞暴露于电场，在细胞膜被透化的同时将外源性材料引入细胞中。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171102 US 62/580,9221.一种通过转染细胞将外源性材料引入细胞中的方法，包括：
将含有细胞和外源性材料的液体引入微流体装置的流体通道中，所述流体通道包括至少一个分流器；
当所述细胞流过至少一个分流器时，将细胞暴露于至少一个分流器下游的非恒定流，以暂时透化细胞膜而不使细胞被裂解；以及
将所述细胞暴露于电场，在细胞膜被透化的同时将外源性材料引入细胞中。


2.一种将外源性材料引入细胞中的方法，包括：
细胞置于含有外源性材料的悬浮液中，将所述细胞暴露在非恒定流条件的压力变化下，以暂时透化细胞膜而不使细胞被裂解；以及
将所述细胞暴露于电场，在细胞膜被透化的同时将外源性材料引入细胞中。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述电场用于促进外源性材料的递送。


4.根据权利要求1或2所述的方法，还包括用电荷配置所述外源性材料。


5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述外源性材料带负电荷。


6.根据权利要求4所述的方法，其中，所述外源性材料带正电荷。


7.根据权利要求4所述的方法，其中，所述外源性材料为电中性。


8.根据权利要求1或2所述的方法，其中，当细胞位于非恒定流中时，细胞才暴露在电场中。


9.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述电场通过直流电产生。


10.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述电场通过交流电产生。


11.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述电场是在能够促进外源性材料递送的电场强度下产生的。


12.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述电场是在不足以扰乱细胞的状态的电场强度下产生的。


13.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述电场包括一个振荡分量和一个偏移量，所述振荡分量和偏移量足以促进外源性材料递送的。


14.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述电场包括一个振荡分量和一个偏移量，所述振荡分量和偏移量不足以扰乱细胞的状态。


15.根据权利要求1～14任一项所述的方法，其中，产生所述电场的频率不足以扰乱细胞的状态。


16.根据权利要求2所述的方法，其中，所述压力变化是负压力变化。


17.根据权利要求1所述的方法，其中，所述流体通道包括至少一个第二分流器，每个分流器都有一个最大宽度，每个分流器的最大宽度大于每个沿流体通道宽度排列成阵列的分流器之间的间隙。


18.根据权利要求1所述的方法，其中，所述流体通道包括至少一个第二分流器，每个分流器之间都有一个间隙，所述分流器之间的间隙的宽度大于细胞的直径。


19.根据权利要求1～18任一项所述的方法，其中，所述外源性材料选自有机分子，生理学上可接受的有机分子衍生物，生物分子，生理学上可接受的生物分子衍生物，生理学上可接受的生物分子类似物，无机分子，生理学上可接受的无机分子衍生物，量子点，碳纳米管，纳米颗粒和金颗粒。


20.根据权利要求19所述的方法，其中，所述生物分子选自碳水化合物，脂质，氨基酸，肽，蛋白质，核苷酸和核酸。


21.根据权利要求20所述的方法，其中，所述核酸选自脱氧核糖核酸和核糖核酸。

【专利技术属性】
技术研发人员：莱恩·鲍威尔，艾米·吐特，杰夫·费塞，凯瑟琳·刘，艾德里安·里瓦诺，朱丽安娜·阿塞维多，
申请(专利权)人：因迪私人有限公司，
类型：发明
国别省市：澳大利亚;AU