【技术实现步骤摘要】
一种检测鬼笔环肽的酶联免疫试剂盒及其制备和应用
本专利技术属于药物残留快速检测领域，涉及一种检测鬼笔环肽的试剂盒及其制备方法与应用。
技术介绍
蘑菇食物中毒一直以来是世界上许多国家重点关注的食品安全问题之一，多年来蘑菇中毒也一直是我国食物中毒事故导致死亡的主要原因。鬼笔环肽属于双环多肽类化合物，存在于鹅膏菌属（Amanita）、盔孢伞属（Galerina）、环柄菇属（Lepiota）的一些野生菌中，鬼笔环肽引起的食物中毒易误诊且缺乏针对性治疗，因此早期诊断对于中毒的救治尤为重要。目前血浆和尿液等生物样品中鬼笔毒肽类毒素的检测方法主要有毛细管电泳法、放射免疫法、高效液相色谱及质谱法等，其中液相色谱-串联质谱法能实现毒素的高通量精确分析而成为目前最主要的方法。已有的方法存在检测通量低、假阳性、灵敏度低和基质效应严重等问题，特异性强、灵敏度高的方法操作繁琐、仪器昂贵，不适用于大批量样品的筛选检测，不能满足现场检测需求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测鬼笔环肽的酶联免疫试剂盒，并提供一种灵...
【技术保护点】
1.一种检测鬼笔环肽的酶联免疫试剂盒，包括：鬼笔环肽检测酶标板、鬼笔环肽系列标准品工作液、鬼笔环肽抗体工作液、酶标记物工作液、样品稀释液、样品提取液、洗涤液、底物显色液、终止液组成，其特征在于：所述鬼笔环肽酶标板由式I所示鬼笔环肽药物半抗原与载体蛋白的偶联物包被制成：/n
【技术特征摘要】
1.一种检测鬼笔环肽的酶联免疫试剂盒，包括：鬼笔环肽检测酶标板、鬼笔环肽系列标准品工作液、鬼笔环肽抗体工作液、酶标记物工作液、样品稀释液、样品提取液、洗涤液、底物显色液、终止液组成，其特征在于：所述鬼笔环肽酶标板由式I所示鬼笔环肽药物半抗原与载体蛋白的偶联物包被制成：
式I
所述鬼笔环肽抗体为鬼笔环肽药物的特异性抗体。
2.根据权利要求1所述的一种检测鬼笔环肽的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述鬼笔环肽半抗原的制备方法包括如下步骤：称取鬼笔环肽原料10mg，10ml甲醇溶解，搅拌，加入1mg氢化钠,2.1mg四溴丁酸室温反应，TLC检测反应完全后薄层制备板纯化，得到鬼笔环肽半抗原。
3.根据权利要求1所述的一种检测鬼笔环肽的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述鬼笔环肽药物的特异性抗体为所述鬼笔环肽单克隆抗体，所述鬼笔环肽单克隆抗体由重链和轻链组成，所述重链的可变区的氨基酸序列可如序列表的序列1所示，所述轻链的可变区的氨基酸序列可如序列表的序列2所示。
4.根据权利要求1或3所述的一种检测鬼笔环肽的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述鬼笔环肽抗体工作液为将鬼笔环肽的单克隆抗体用抗体稀释液稀释1000倍，获得含有鬼笔环肽药物的单克隆抗体的抗体工作液；
所述抗体稀释液为含有Proclin300、TritonX-100的PBS缓冲液；所述抗体稀释液的溶剂为去离子水，溶质为无水磷酸氢二钠、二水合磷酸二氢钠、氯化钠、氯化钾、Proclin300和TritonX-100，所述溶质在所述PBS缓冲液中的浓度分别为1.072g/L、0.59g/L、8.5g/L、0.4g/L、200μL/L和500μL/L。
5.根据权利要求1所述的一种检测鬼笔环肽的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述酶标记物工作液为将辣根过氧化物酶标记的抗鬼笔环肽药物单克隆抗体的抗抗体用抗抗体稀释液稀释500倍获得的；
所述抗抗体稀释液为含有小牛血清、Proclin300的PBS缓冲液；所述抗体稀释液的溶剂为去离子水，溶质为无水磷酸氢二钠、二水合磷酸二氢钠、氯化钠、氯化钾、小牛血清和Proclin300，所述溶质在所述PBS缓冲液中的浓度分别为1.072g/L、0.6g/L、16g/L、0.4g/L、50mL/L和200μL/L。
6.根据权利要求1所述的一种检测鬼笔环肽的酶联免疫试剂盒，其特征在于：所述鬼笔环肽系列标准品工作液为6种鬼笔环肽标准品工作液，所述溶液的溶剂为含有光稳定剂、牛血清白蛋白的PBS缓冲液，溶质为鬼笔环肽；所述溶质在所述6种标准品工作液中的浓度分别为0μg/L、0.1μg/L、0.3μg/L、0.9μg/L、2.7μg/L、8.1μg/L；所述PBS缓冲液的溶剂为去离...
【专利技术属性】
技术研发人员：马立才，刘河冰，温凯，杨柳，丁亚芳，崔乃元，聂靖东，邢维维，刘薇，
申请(专利权)人：北京维德维康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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