一种肌酸激酶同工酶MB的定量检测方法技术

本发明专利技术涉及生物科技技术领域，具体的说是一种肌酸激酶同工酶MB的定量检测方法，包括肌酸激酶同工酶MB溶液配制、微流肌酸激酶同工酶MB检测芯片及其使用方法、微流控芯片是以微管道网络为结构特征，各工作单元既能独立完成单一反应或单元操作，也能与其他单元合作完成较复杂的工作，使整个芯片称为一个动态的反应体系。其主要特点是高通量、微型化和自动化，是在传统生物技术和疾病诊断等方面的创新和飞跃；免疫微球化学发光与微流控芯片的结合使得全自动化仪器更加小型化和简单化，减少了后期的管道维护和机械臂维护；而且这两者的结合又将原本POCT应用的固相反应转换成了液相的均相反应，更兼具了传统管式化学发光的高反应效率，高灵敏度及检测区间。

A quantitative detection method for MB of creatine kinase isoenzyme

【技术实现步骤摘要】
一种肌酸激酶同工酶MB的定量检测方法
本专利技术涉及生物科技
，具体的说是一种肌酸激酶同工酶MB的定量检测方法。
技术介绍
肌酸激酶是细胞内能量转运、ATP代谢起着至关重要的激酶。肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)是肌酸激酶(CK)的一种同工酶，是CK在翻译后修饰过而生成的，主要存在于心肌细胞中(还有少量存在于骨骼肌、肠道、舌头、前列腺以及子宫中)，是心肌能量代谢途径中非常重要的肌酸激酶。CK-MB有两个亚基组成，分贝是M亚基和B亚基，M代表肌肉而B代表大脑，其活性蘸总肌酸激酶活性的15％～30％。除CK-MB外还存在另外两种肌酸激酶同工酶，分别是存在于大脑中的CK-BB和存在于骨骼肌中的CK-MM，三种同工酶活性相似但是等电点不同。尽管大体上肌酸激酶同工酶可分为上述三种，但是当B亚基和M亚基经过翻译后修饰作用后还可以产生多种亚型，其中包括三种CK-MM亚型(CK-MM1、CK-MM2、CK-MM3)和至少三种CK-MB亚型(人类体内已经发现了两种CK-MB1和一种CK-MB2)，在非受损的组织中CK-MM的95％的存在亚型为CK-MM3。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肌酸激酶同工酶MB的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)肌酸激酶同工酶MB溶液配制：/n1A、肌酸激酶同工酶MB系列校准品的制备：用小牛血清将肌酸激酶同工酶MB抗原梯度稀释成一组校准品，浓度范围为0～300ng/mL；/n1B、肌酸激酶同工酶MB抗体包被的磁珠溶液的制备：/n方案A：/na1、将1.5μL羧基磁微粒用活化/偶联缓冲液充分清洗3次，在最后一轮洗涤后，将微球重悬于活化/偶联缓冲液中，并确保磁微粒保持分散态；/na2、在室温条件下用去离子水配制200mM EDC和200mM Sulfo-NHS活化试剂；/na3、向每mg洗涤后的磁微粒中快速加入24μL 200m...

【技术特征摘要】
1.一种肌酸激酶同工酶MB的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)肌酸激酶同工酶MB溶液配制：
1A、肌酸激酶同工酶MB系列校准品的制备：用小牛血清将肌酸激酶同工酶MB抗原梯度稀释成一组校准品，浓度范围为0～300ng/mL；
1B、肌酸激酶同工酶MB抗体包被的磁珠溶液的制备：
方案A：
a1、将1.5μL羧基磁微粒用活化/偶联缓冲液充分清洗3次，在最后一轮洗涤后，将微球重悬于活化/偶联缓冲液中，并确保磁微粒保持分散态；
a2、在室温条件下用去离子水配制200mMEDC和200mMSulfo-NHS活化试剂；
a3、向每mg洗涤后的磁微粒中快速加入24μL200mMEDC和240μL200mMSulfo-NHS；
a4、室温涡旋震荡后用转盘式混合器孵育30分钟后磁吸后去除上清，然后加入活化/偶联缓冲液洗涤微球并充分洗涤3次；
a5、重悬磁微粒后按每mg磁珠加入20～80μg，充分混匀后在室温下用转盘式混合器混合悬液2.5小时，磁吸后去除上清，加入1mL含0.5％牛血清白蛋白的Tris溶液，室温下用转盘式混合器反应0.5小时；
a6、磁吸去上清，用含有0.5％牛血清白蛋白的PBS溶液洗涤3次，并以此最终保存于2～8℃；
方案B：
b1、用PBS缓冲液制备Biotin溶液，将每mg抗体与25μLBiotin溶液室温涡旋震荡后用转盘式混合器孵育30～60分钟，反应完成后取出用脱盐柱进行纯化后2～8℃备用；
b2、用含有0.5％牛血清白蛋白的PBS溶液将1.5μm链霉亲和素磁微粒洗涤三次，在每mg磁微粒中加入20～80μg已处理的抗体，室温涡旋震荡后用转盘式混合器孵育0.5～2小时；
b3、最后用含有0.5％牛血清白蛋白的PBS溶液洗涤三次后加入保存液2～8℃保存。
1C、碱性磷酸酶标记的肌酸激酶同工酶MB抗体溶液的制备：
c1、用PBS缓冲液配制SPDP溶液，在每mg抗体中加入20～50μLSPDP溶液，室温涡旋震荡后用转盘式混合器孵育30～60分钟，反应完成后取出用脱盐柱进行纯化后2～8℃备用；
c2、用PBS缓冲液配制2-IT溶液，在每mg碱性磷酸酶中加入20～50μL2-IT溶液，室温涡旋震荡后用转盘式混合器孵育30～60分钟，反应完成后取出用脱盐柱进行纯化后2～8℃备用；
c3、经处理后的抗体和碱性磷酸酶等比例混合，室温涡旋震荡后继续用转盘式混合器孵育2小时，反应完成后取出用脱盐柱进行纯化后2～8℃备用；
c4、最后用含有0.5％牛血清白蛋白的PBS溶液进行稀释并于2～8℃保存；
1D、化学发光底物液的制备：AMPPD加入到高PH值的Tris盐酸缓冲液中，加入无机盐和表面活性剂；
1E、清洗液的制备：在Tris盐酸缓冲体系中加入20％氯化钠，2％吐温以及0.2％曲拉通；
(2)微流控肌酸激酶同工酶MB检测芯片及其使用方法：
2A、标准曲线的制作：取10μL心...

【专利技术属性】
技术研发人员：林佳慧，杨意枫，倪燕婕，连海燕，杨晓君，杨晓雯，
申请(专利权)人：苏州国科均豪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32