一种基于loop区域改造的褐藻胶裂解酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种基于loop区域改造的褐藻胶裂解酶突变体及其应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术基于褐藻胶裂解酶的结构推测，采用结构序列分析方法，确定对催化域附近的loop区域进行改造，并通过定点突变和组合突变进行改造，得到对PolyG片段具有较高的降解能力的突变体；将亲本褐藻胶裂解酶氨基酸序列中位于催化域附近的loop区205位、210位突变为酪氨酸，将褐藻胶裂解酶对底物的偏好性由M转变为G，酶活6100U/mL，稳定性得以提高。

A loop based mutant of alginate lyase and its application

【技术实现步骤摘要】
一种基于loop区域改造的褐藻胶裂解酶突变体及其应用
本专利技术涉及一种基于loop区域改造的褐藻胶裂解酶突变体及其应用，属于基因工程

技术介绍
褐藻是三大藻类之一，主要成分为褐藻胶、甘露醇和海带多糖。其中，甘露醇和海带多糖的利用的相关研究较为成熟，因此，如何高效降解褐藻胶并实现工业化应用是目前研究的热点。褐藻胶是由β-D-甘露糖醛酸(M)和α-L-古罗糖醛酸(G)构成的线性多糖，其降解产物褐藻寡糖具有重要的生理活性，如抗氧化、抗肿瘤、促进植物根细胞生长等，因此受到了广泛的关注。目前，制备褐藻寡糖的方法主要是酸解等化学法，制备条件剧烈且容易造成环境污染，而相比之下，生物法降解褐藻多糖条件温和、易于控制并且绿色环保，因此开发高效、稳定性高且易于制备的褐藻胶裂解酶是十分必要的。褐藻胶裂解酶(Aly)可以通过β-消除反应机制来降解褐藻胶，并且在降解产物的非还原端形成不饱和的碳碳双键，形成末端不饱和双键结构的降解片段。根据其酶切方式，可将其分为内切型(endo-type)和外切型(exo-type)褐藻胶裂解酶，内切型Aly降本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于loop区域改造的褐藻胶裂解酶突变体，其特征在于，所述的突变体是以氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的褐藻胶裂解酶为亲本，将亲本褐藻胶裂解酶氨基酸序列201～211位loop区域进行定点突变。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于loop区域改造的褐藻胶裂解酶突变体，其特征在于，所述的突变体是以氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的褐藻胶裂解酶为亲本，将亲本褐藻胶裂解酶氨基酸序列201～211位loop区域进行定点突变。


2.根据权利要求1所述的褐藻胶裂解酶突变体，其特征在于，所述的褐藻胶裂解酶突变体是将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的褐藻胶裂解酶亲本的205位甘氨酸突变为酪氨酸。


3.根据权利要求1所述的褐藻胶裂解酶突变体，其特征在于，所述的褐藻胶裂解酶突变体是将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的褐藻胶裂解酶亲本的210位天冬酰胺突变为酪氨酸。


4.根据权利要求1所述的褐藻胶裂解酶突变体，其特征在于，所述的褐藻胶裂解酶突变体是将氨基酸序列如SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：李恒，史劲松，李星霖，吴雯，龚劲松，许正宏，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32