一种分离和/或富集结核分枝杆菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种分离和/或富集结核分枝杆菌的方法。本发明专利技术的发明专利技术人基于

A method for isolation and / or enrichment of Mycobacterium tuberculosis

【技术实现步骤摘要】
一种分离和/或富集结核分枝杆菌的方法
本专利技术属于生物医学领域，具体涉及一种分离和/或富集结核分枝杆菌的方法。
技术介绍
结核病是由细胞内细菌病原体结核分枝杆菌引起的慢性传染病。由于结核分枝杆菌其独特的致病特点及流行和传播方式，特别是近年来耐药结核分枝杆菌的产生以及与人类免疫缺陷症病毒(HIV)的交叉感染等原因导致结核病的流行再度呈现上升趋势。结核分枝杆菌是一种胞内感染菌，它是最成功的病原体之一，已经进化出适应宿主细胞和逃避免疫监视的各种策略。结核分枝杆菌经过呼吸道进入人体后，主要在巨噬细胞内寄生，并采用多种策略逃避宿主细胞的免疫杀伤作用，其可以在巨噬细胞内长期存活并缓慢增殖。当宿主免疫力低下时，休眠的结核分枝杆菌可以被重新活化，导致机体发展为活动性结核病。感染结核分枝杆菌后病原体能在宿主体内长期潜伏或造成持续性感染，为该疾病的治疗和预防造成了极大的障碍。此外，现阶段结核病的治疗难点还在于多重耐药性和广泛耐药性结核病。结核病新药的匮乏以及结核分枝杆菌相关基础研究的不足是耐药性结核病治愈率低下的主要原因。因此，迫切需要寻找新的药物靶点，开发新的抗结核病药物来治疗结结核病。确定结核分枝杆菌自身蛋白间的蛋白质-蛋白质相互作用能够更深入的表征细菌在宿主体内存活和结核发病的分子机制，也将有助于寻找到新的抗结核药物靶点，开发出新的抗结核药物，以利于对结核病的治疗。Rv0577蛋白、Rv0949蛋白、Rv2098c蛋白、Rv3009c蛋白和Rv3803c蛋白是结核分枝杆菌的固有蛋白，通过检测待检标本中这些结核蛋白之中的任一蛋白即可鉴定病原菌-结核分枝杆菌的存在，因此可以借此来实现对结核感染或结核病的快速诊断。此外，已有转座子突变实验证实，Rv3009c蛋白为结核分枝杆菌体外生长必需基因，编码Rv3009c蛋白的基因被破坏时将导致体外H37Rv的生长缺陷(DeJesusMA，GerrickER，XuW，ParkSW，etal.ComprehensiveEssentialityAnalysisoftheMycobacteriumtuberculosisGenomeviaSaturatingTransposonMutagenesis.MBio.2017Jan17；8(1).pii:e02133-16.)。Rv3009c蛋白可能被作为新的抗结核药物靶点来开发新的抗结核药物，用于治疗结核病。研究结核分枝杆菌自身蛋白之间的相互作用可以更深入的表征细菌在宿主体内存活和结核病发病的分子机制，也将有助于寻找到新的抗结核药物靶点。
技术实现思路
本专利技术的目的是检测结核分枝杆菌。本专利技术首先保护Rv1875蛋白在制备结核分枝杆菌分离试剂、结核分枝杆菌富集试剂、结核分枝杆菌检测试剂、结核疫苗和抗结核药物中至少一种的应用。上述应用中，所述结核分枝杆菌分离试剂、所述结核分枝杆菌富集试剂和所述结核分枝杆菌检测试剂均可通过Rv1875蛋白和结核分枝杆菌固有蛋白结合实现。所述结核分枝杆菌固有蛋白可为Rv0577蛋白、Rv0949蛋白、Rv2098c蛋白、Rv3009c蛋白和Rv3803c蛋白中的至少一种。本专利技术还保护编码Rv1875蛋白的核酸分子在制备结核分枝杆菌分离试剂、结核分枝杆菌富集试剂、结核分枝杆菌检测试剂、结核疫苗和抗结核药物中至少一种的应用。Rv1875蛋白或编码Rv1875蛋白的核酸分子在分离结核分枝杆菌和/或富集结核分枝杆菌和/或检测结核分枝杆菌中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述应用中，所述“分离结核分枝杆菌和/或富集结核分枝杆菌和/或检测结核分枝杆菌”均可通过Rv1875蛋白和结核分枝杆菌固有蛋白结合实现；所述结核分枝杆菌固有蛋白可为Rv0577蛋白、Rv0949蛋白、Rv2098c蛋白、Rv3009c蛋白和Rv3803c蛋白中的至少一种。本专利技术还保护一种试剂，可包括b1)-b3)中的至少一种：b1)Rv1875蛋白；b2)编码Rv1875蛋白的核酸分子；b3)含有编码Rv1875蛋白的核酸分子的重组菌；所述试剂用于结核分枝杆菌分离和/或结核分枝杆菌富集或结核分枝杆菌检测。所述试剂具体可由b1)-b3)中的至少一种组成；b1)Rv1875蛋白；b2)编码Rv1875蛋白的核酸分子；b3)含有编码Rv1875蛋白的核酸分子的重组菌。本专利技术还保护一种分离和/或富集结核分枝杆菌的方法，通过Rv1875蛋白和结核分枝杆菌固有蛋白结合实现；所述结核分枝杆菌固有蛋白可为Rv0577蛋白、Rv0949蛋白、Rv2098c蛋白、Rv3009c蛋白和Rv3803c蛋白中的至少一种。本专利技术还保护一种检测待测样本是否存在结核分枝杆菌的方法，包括如下步骤：(1)取待测样本的总蛋白，采用Rv1875蛋白进行分离和/或富集；(2)完成步骤(1)后，进行如下判断：如果分离和/或富集的产物含有目标蛋白，则待测样本存在结核分枝杆菌；如果分离和/或富集的产物不含有所述目标蛋白，则待测样本不存在结核分枝杆菌；所述目标蛋白可为Rv0577蛋白、Rv0949蛋白、Rv2098c蛋白、Rv3009c蛋白和Rv3803c蛋白中的至少一种。上述任一所述Rv1875蛋白可为a1)或a2)或a3)或a4)：a1)SEQIDNO：2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；a2)SEQIDNO：9所示的氨基酸序列组成的蛋白质；a3)在SEQIDNO：2或SEQIDNO：9所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；a4)将SEQIDNO：2或SEQIDNO：9所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且与a1)所述蛋白质具有相同功能的蛋白质。上述任一所述编码Rv1875蛋白的核酸分子可为c1)或c2)或c3)或c4)或c5)所示的DNA分子：c1)编码区是SEQIDNO：1所示的DNA分子；c2)核苷酸序列是SEQIDNO：1所示的DNA分子；c3)核苷酸序列是SEQIDNO：8所示的DNA分子；c4)与c1)或c2)或c3)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，来源于结核分枝杆菌且编码上述任一所述Rv1875蛋白的DNA分子；c5)在严格条件下与c1)或c2)或c3)限定的核苷酸序列杂交，来源于结核分枝杆菌且编码上述任一所述Rv1875蛋白的DNA分子。上述任一所述Rv0577蛋白为SEQIDNO：3所示的氨基酸序列组成的蛋白质。上述任一所述Rv0949蛋白为SEQIDNO：4所示的氨基酸序列组成的蛋白质。上述任一所述Rv2098c蛋白为SEQIDNO：5所示的氨基酸序列组成的蛋白质。上述任一所述Rv3009c蛋白为SEQIDNO：6所示的氨基酸序列组成的蛋白质。上述任一所述Rv3803c蛋白为SEQIDNO：7所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本专利技术的专利技术人基于结核分枝杆菌蛋白质本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Rv1875蛋白在制备结核分枝杆菌分离试剂、结核分枝杆菌富集试剂、结核分枝杆菌检测试剂、结核疫苗和抗结核药物中至少一种的应用。/n

【技术特征摘要】
1.Rv1875蛋白在制备结核分枝杆菌分离试剂、结核分枝杆菌富集试剂、结核分枝杆菌检测试剂、结核疫苗和抗结核药物中至少一种的应用。


2.编码Rv1875蛋白的核酸分子在制备结核分枝杆菌分离试剂、结核分枝杆菌富集试剂、结核分枝杆菌检测试剂、结核疫苗和抗结核药物中至少一种的应用。


3.Rv1875蛋白或编码Rv1875蛋白的核酸分子在分离结核分枝杆菌和/或富集结核分枝杆菌和/或检测结核分枝杆菌中的应用。


4.一种试剂，包括b1)-b3)中的至少一种：
b1)Rv1875蛋白；
b2)编码Rv1875蛋白的核酸分子；
b3)含有编码Rv1875蛋白的核酸分子的重组菌；
所述试剂用于结核分枝杆菌分离和/或结核分枝杆菌富集或结核分枝杆菌检测。


5.如权利要求1至3任一所述的应用或权利要求4所述的试剂，其特征在于：
所述Rv1875蛋白为a1)或a2)或a3)或a4)：
a1)SEQIDNO：2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
a2)SEQIDNO：9所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
a3)在SEQIDNO：2或SEQIDNO：9所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；
a4)将SEQIDNO：2或SEQIDNO：9所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且与a1)所述蛋白质具有相同功能的蛋白质。


6.如权利要求1至3任一所述的应用或权利要求4所述的试剂，其特征在于：所述编码Rv1875蛋白的核酸分子为c1)或c2)或c3)或c4)或c5)所示的DNA分子：
c1)编码区是SEQIDNO：1所示的DNA分子；
c2)核苷酸序列是SEQIDNO：1所示的DNA分子；
c3)核苷酸序列是SEQIDNO：8所示的DNA分子；
c4)与c1)或c2)或c3)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，来源于结核分枝杆菌且编码权利要求5所述Rv1875蛋白的DNA分子；
c5)在严格条件下与...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹廷明，孙照刚，贾红彦，李自慧，杜凤娇，戴广明，褚洪迁，张宗德，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京胸科医院，北京市结核病胸部肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11