纤维寡糖转运蛋白LacY的突变位点、突变转运蛋白LacY及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于基因工程领域，具体涉及纤维寡糖转运蛋白LacY的突变位点、突变转运蛋白LacY及其制备方法和应用。本发明专利技术的高效转运纤维寡糖的突变转运蛋白的制备方法，包括：(1)定向进化LacY对纤维寡糖的底物特异性；(2)分析步骤(1)进化样品的氨基酸序列，获取突变位点；(3)构建突变转运蛋白LacY的表达载体，并进行表达获得突变转运蛋白LacY。本发明专利技术还提供用上述方法得到的纤维二糖、纤维三糖、纤维四糖的突变转运蛋白LacY的表达载体，含所述表达载体的微生物，以及他们在纤维质利用领域的应用方法。本发明专利技术方法制得的突变转运蛋白LacY能够高效转运纤维寡糖，提高纤维质的利用。

Mutation site, mutation transporter lacy of fibrooligosaccharide transporter lacy and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
纤维寡糖转运蛋白LacY的突变位点、突变转运蛋白LacY及其制备方法和应用
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及纤维寡糖转运蛋白LacY的突变位点、突变转运蛋白LacY及其制备方法和应用。
技术介绍
纤维质是世界上蕴藏量最丰富的天然高分子化合物，绝大多数由绿色植物通过光合作用合成。当前利用纤维质生产工业副产品，如酒精等，首先需将纤维质进行理化处理或者用纤维素酶等预处理将纤维质降解成葡萄糖，再供微生物利用生产工业副产品。事实上经过预处理的纤维质降解产物中还含有大量的纤维二糖、纤维三糖等纤维寡糖，但是微生物中由于缺乏特异性的纤维寡糖转运蛋白，微生物无法高效利用纤维寡糖，导致资源浪费，纤维质利用率低。LacY是乳糖或半乳糖转运蛋白，其对纤维寡糖的转运效率非常低，且当前在细菌中并未发现其他特异性转运纤维寡糖的转运蛋白，因此在纤维质利用领域，尤其是利用细菌发酵纤维质获取工业副产品方面受到制约。
技术实现思路
鉴于此，有必要针对上述问题提供纤维寡糖转运蛋白LacY的突变型、突变转运蛋白LacY及其制备方法和应用。本专利技本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.纤维二糖转运蛋白LacY的突变位点，其特征在于，包括A177T、A177V、R142C、L62M中任意一个突变位点或至少任意X个突变位点的组合；X大于等于2且小于等于4。/n

【技术特征摘要】
20181205 CN 20181148298271.纤维二糖转运蛋白LacY的突变位点，其特征在于，包括A177T、A177V、R142C、L62M中任意一个突变位点或至少任意X个突变位点的组合；X大于等于2且小于等于4。


2.一种高效转运纤维二糖的突变转运蛋白LacY的表达载体，其特征在于，包括权利要求1所述的纤维二糖转运蛋白LacY的突变位点或突变位点组合。


3.根据权利要求2所述的转运纤维二糖的突变转运蛋白LacY的表达载体，其特征在于，所述表达载体中LacY的启动子为J23109，cepA(纤维二糖磷酸化酶)的启动子为J23102。


4.纤维三糖转运蛋白LacY的突变位点，其特征在于，包括A177V、F140Y、R142C、I79T、V316I、V326I、V416I中任意一个突变位点或至少任意Y个突变位点的组合；Y大于等于2且小于等于7。


5.一种高效转运纤维三糖的突变转运蛋白LacY的表达载体，其特征在于，包括权利要求4所述的纤维三糖转运蛋白LacY的突变位点或突变位点组合。


6.纤维四糖转运蛋白LacY的突变位点，包括A177T、A177V、R142C、G150S、V326I、A51V、G96E、A203D、M83V、I92V中任意一个突变位点或至少任意Z个突变位点的组合；Z大于等于2且小于等于10。


7.一种高效转运纤维四糖的突变转运蛋白LacY的表达载体，其特征在于，包括权利要求6所述的纤维四糖转运蛋白LacY的突变位点或突变位点组合。


8.根据权利要求5所述的转运纤维三糖的突变转运蛋白LacY的表达载体或权利要求7...

【专利技术属性】
技术研发人员：李小明，崔金明，刘陈立，
申请(专利权)人：广州中国科学院先进技术研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44