用于培养和扩充细胞的组合物和方法技术

本文尤其提供了用于培养和扩充细胞(如T细胞、二倍体细胞或非二倍体细胞)的组合物、系统、试剂盒和方法以及用于治疗病症(例如，用T细胞治疗)的方法和用于产生生物分子和组合物(例如，蛋白质、病毒、病毒粒子或其片段等)(包含疫苗)的方法。

Composition and method for culture and expansion of cells

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于培养和扩充细胞的组合物和方法相关申请的交叉引用本申请要求于2017年9月15日提交的美国临时申请第62/559,391号和于2018年8月31日提交的美国临时申请第62/725,376号的权益。前述申请的全部内容通过引用并入本文。
技术介绍
允许用于增加如细胞分裂等的细胞特性速率的方法具有改善生物产物和治疗干预的潜力，尤其是在从个体中移除细胞，进行培养然后再引入此个体的情况下。T细胞识别与例如各种癌症或感染性生物相关的通用抗原的能力由T细胞抗原受体(TCR)赋予，所述受体由α(alpha)链和β(beta)链或γ(gamma)和δ(delta)链组成。T细胞和各种亚群在癌症、自身免疫性病症、炎症性疾病、过敏性疾病和感染性疾病的治疗中具有广泛的治疗意义。长期以来，一直需要一种可靠、有效和快速的方式来扩充T细胞以及其它细胞。
技术实现思路
提供了用于培养和/或扩充细胞(例如，人细胞)的组合物和方法，其中细胞产生一种或多种产物(例如，一种或多种蛋白质(例如，一种或多种异源蛋白质)、一种或多种核酸分子(例如，一种或多种异源蛋白质)、一种或多种病毒和/或一种或多种VLP)。本文进一步尤其提供了用于培养和/或扩充细胞(例如，T细胞)的组合物、系统、试剂盒和方法，以及用细胞(例如T细胞)治疗病症的方法。一方面，本文提供了包括环糊精和至少一种脂质的培养基组合物(例如，无血清细胞培养基组合物)。在一些实施例中，组合物包括亚油酸、至少一种其它ω-6脂肪酸、胆固醇和甲基化环糊精。一方面，本文包含了包括环糊精和至少一种脂质的培养补充剂组合物(例如，无血清细胞培养补充剂组合物)。在一些实施例中，组合物包括亚油酸、至少一种其它ω-6脂肪酸、胆固醇和甲基化环糊精。本文进一步提供了包括亚油酸、至少一种其它ω-6脂肪酸、胆固醇和至少一种环糊精的细胞培养基组合物(例如，无血清细胞培养基组合物)和包括亚油酸、至少一种其它ω-6脂肪酸、胆固醇和至少一种环糊精的细胞培养补充剂组合物(例如，无血清细胞培养补充剂组合物)。在许多实例中，环糊精是甲基化环糊精。在许多实例中，环糊精以约50μM到约200μM的水平存在。在许多实例中，胆固醇是合成性胆固醇，并且胆固醇以约5μM到约30μM的浓度存在。另外地，在一些实例中，所述至少一种其它ω-6脂肪酸是多不饱和ω-6脂肪酸。在一些实例中，至少一种其它ω-6脂肪酸是或包含花生四烯酸。在一些实例中，多不饱和ω-6脂肪酸是选自由以下组成的群组中的一种或多种脂肪酸：花生四烯酸、亚油酸、亚麻酸、肉豆蔻酸、油酸、棕榈酸、棕榈油酸和硬脂酸。在一些实例中，细胞培养补充剂组合物的有效稀释度为约1∶10到约1∶5000。本文所提供的细胞培养基组合物(例如，无血清细胞培养基组合物)和/或本文所提供的细胞培养基补充剂(例如，无血清细胞培养基补充剂)组合物能够用于培养可以产生蛋白质(例如，异源蛋白质)、核酸分子(例如，异源蛋白质)、疫苗、病毒、病毒粒子、病毒蛋白或核酸或病毒片段的细胞。可以使用本文所提供的细胞培养基组合物培养的细胞包含真菌细胞(例如，酵母细胞，如酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae))、植物细胞和动物细胞(例如，昆虫细胞，如sf9细胞以及哺乳动物细胞，如人细胞、鸡细胞、猴细胞等)。在一些实例中，动物细胞是牛细胞、犬细胞、猫细胞、昆虫细胞、鸟类细胞、灵长类细胞或人细胞。另外，如本文所述的培养的细胞可以是二倍体细胞。在一些实例中，本文所提供的细胞培养基组合物用于培养细胞，其中细胞选自由以下组成的群组：MRC-5、MRC-5RCB、MRC-9、WI-38、2BS、Walvax-2、IMR-90、IMR-91、KMB-17、HUT系列细胞、张氏肝细胞(Changliver)、U937、MDCK、表达CD4的T细胞、表达CD8的T细胞、VERO和前述细胞的任何克隆。在一些实例中，本文所提供的细胞培养基组合物进一步包括2-脱氧-D-葡萄糖。在一些实例中，本文所提供的细胞培养基组合物可以用于增加细胞的生长(例如，与省略一种或多种组分的细胞培养基组合物相比的生长速率)、细胞的活细胞密度、由感染的细胞产生的病毒的病毒滴度或其组合。在一些实例中，使用本文所提供的细胞培养基组合物培养的细胞被病毒(例如，动物病毒、植物病毒、噬菌体等)感染或含有编码期望产生的一种或多种表达产物(例如，一种或多种蛋白质，如一种或多种细胞因子、促红细胞生成素、抗体等)的异源核酸。在一些实例中，此类病毒是选自由以下组成的群组中的一种或多种病毒：水痘带状疱疹病毒(VZV)、风疹病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、甲型肝炎病毒、腺病毒、脊髓灰质炎病毒、轮状病毒、天花病毒、水痘病毒、黄热病病毒、乳头瘤病毒、埃博拉病毒、HIV、狂犬病病毒风疹病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、甲型肝炎病毒、腺病毒、脊髓灰质炎病毒、轮状病毒、天花病毒、水痘病毒、黄热病病毒、乳头瘤病毒、埃博拉病毒、HIV、狂犬病病毒或水疱性口炎病毒(VSV)和登革热病毒。在一些实例中，使用在本文所提供的细胞培养基组合物中培养的细胞产生的病毒粒子源自细小病毒科(Parvoviridae)、逆转录病毒科(Retroviridae)、黄病毒科(Flaviviridae)或噬菌体。可以将本文所提供的细胞培养补充剂组合物添加到基础培养基，以培养可以产生蛋白质、疫苗、病毒、病毒粒子、病毒蛋白或核酸和/或病毒片段的细胞(例如二倍体细胞)。在一些实例中，此类细胞在无血清条件下培养。本文进一步提供了用于培养细胞群体(例如，二倍体细胞群体)的方法，所述方法包括在包括环糊精和至少一种脂质的细胞培养基中温育细胞群体。在一些实例中，此类方法包括产生疫苗的细胞(例如，二倍体细胞)，其中所述方法包括在无血清细胞培养基中温育细胞群体，所述无血清细胞培养基包括：(i)环糊精(例如，甲基化环糊精)、亚油酸、至少一种其它ω-6脂肪酸(例如，一种或多种多不饱和ω-6脂肪酸，如以下中的一种或多种：花生四烯酸、亚麻酸、肉豆蔻酸、油酸、棕榈酸、棕榈油酸和硬脂酸)和胆固醇，或适当稀释度的在表1和/或表2中描述的补充剂；其中与没有环糊精的含血清培养基中的活细胞密度相比，所述培养使所述无血清细胞培养基中的活细胞密度增加。在一些实例中，用于培养细胞群体(例如，二倍体细胞群体)的方法包含以下实例：(i)培养基或补充物增加了：细胞的生长、细胞的活细胞密度、病毒感染的细胞的病毒滴度或其组合；和/或(ii)细胞(例如，二倍体细胞)能够在无血清条件下产生疫苗、病毒、病毒粒子、病毒蛋白或核酸或其病毒片段；和/或(iii)细胞被病毒感染。另外，在一些实例中：(i)病毒是动物病毒、植物病毒或噬菌体；和/或(ii)病毒选自由以下组成的群组：水痘带状疱疹病毒(VZV)、风疹病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、甲型肝炎病毒、腺病毒、脊髓灰质炎病毒、轮状病毒、天花病毒、水痘病毒、黄热病病毒、乳头瘤病毒、埃博拉病毒、HIV、狂犬病病毒风疹病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、甲型肝炎病毒、腺病毒、脊髓灰质炎病毒、轮状病毒、天花病毒、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种无血清细胞培养基组合物，其包括亚油酸、至少一种其它ω-6脂肪酸、胆固醇和环糊精。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170915 US 62/559,391;20180831 US 62/725,3761.一种无血清细胞培养基组合物，其包括亚油酸、至少一种其它ω-6脂肪酸、胆固醇和环糊精。


2.一种无血清细胞培养补充剂组合物，其包括亚油酸、至少一种其它ω-6脂肪酸、胆固醇和环糊精。


3.根据权利要求1所述的无血清细胞培养基组合物或根据权利要求2所述的无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述环糊精是甲基化环糊精。


4.根据权利要求3所述的无血清细胞培养基组合物或无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述甲基化环糊精以约50μM到约200μM的水平存在。


5.根据前述权利要求中任一项所述的无血清细胞培养基组合物或根据前述权利要求中任一项所述的无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述胆固醇是合成性胆固醇；和/或其中所述胆固醇以约5μM到约30μM的水平存在。


6.根据前述权利要求中任一项所述的无血清细胞培养基组合物或根据前述权利要求中任一项所述的无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述至少一种其它ω-6脂肪酸是多不饱和ω-6脂肪酸。


7.根据前述权利要求中任一项所述的无血清细胞培养基组合物或根据前述权利要求中任一项所述的无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述至少一种其它ω-6脂肪酸是花生四烯酸。


8.根据前述权利要求中任一项所述的无血清细胞培养基组合物或根据前述权利要求中任一项所述的无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述多不饱和ω-6脂肪酸选自由以下组成的群组：花生四烯酸、亚油酸、亚麻酸、肉豆蔻酸、油酸、棕榈酸、棕榈油酸和硬脂酸。


9.根据前述权利要求中任一项所述的无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述补充剂的有效稀释度为约1∶10到约1∶5000。


10.根据权利要求1所述的无血清细胞培养基组合物或根据权利要求2所述的无血清细胞培养补充剂组合物，所述组合物能够培养可以产生疫苗、病毒、病毒粒子、病毒蛋白或核酸或病毒片段的细胞。


11.根据前述权利要求中任一项所述的无血清细胞培养基组合物或无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述细胞是动物细胞。


12.根据权利要求11所述的无血清细胞培养基组合物或无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述动物细胞是牛细胞、犬细胞、猫细胞、昆虫细胞、鸟类细胞、灵长类细胞或人细胞。


13.根据权利要求11或12所述的无血清细胞培养基组合物或无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述动物细胞是二倍体细胞。


14.根据前述权利要求中任一项所述的无血清细胞培养基组合物，其进一步包括2-脱氧-D-葡萄糖。


15.根据前述权利要求中任一项所述的无血清细胞培养基组合物或无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述细胞选自由以下组成的群组：MRC-5、MRC-5RCB、MRC-9、WI-38、2BS、Walvax-2、IMR-90、IMR-91、KMB-17、HUT系列细胞、张氏肝细胞(Changliver)、U937、MDCK、表达CD4的T细胞、表达CD8的T细胞、VERO和前述细胞的任何克隆。


16.根据前述细胞中的任何细胞所述的无血清细胞培养基组合物或无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述培养基或补充剂增加：所述细胞的生长、所述细胞的活细胞密度、病毒感染的细胞的病毒滴度或其组合。


17.根据前述权利要求中任一项所述的无血清细胞培养基组合物或无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述细胞被病毒感染。


18.根据权利要求16或17所述的无血清细胞培养基组合物或无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述病毒是动物病毒、植物病毒或噬菌体。


19.根据权利要求16到18所述的无血清细胞培养基组合物或无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述病毒选自由以下组成的群组：水痘带状疱疹病毒(VZV)、风疹病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、甲型肝炎病毒、腺病毒、脊髓灰质炎病毒、轮状病毒、天花病毒、水痘病毒、黄热病病毒、乳头瘤病毒、埃博拉病毒、HIV、狂犬病病毒或水疱性口炎病毒(VSV)和登革热病毒。


20.根据权利要求10到19中任一项所述的无血清细胞培养基组合物或无血清细胞培养补充剂组合物，其中所述病毒粒子源自细小病毒科(Parvoviridae)、逆转录病毒科(Retroviridae)、黄病毒科(Flaviviridae)或噬菌体。


21.根据权利要求2所述的无血清细胞培养补充剂组合物，所述组合物被添加到基础培养基以培养可以产生疫苗、病毒、病毒粒子、病毒蛋白或核酸或病毒片段的二倍体细胞，其中所述细胞在无血清条件下培养。


22.一种用于培养二倍体细胞群体的方法，所述方法包括在包括环糊精和至少一种脂质的细胞培养基中温育所述细胞群体。


23.根据权利要求22所述的培养细胞群体的方法，所述细胞群体包括产生疫苗的二倍体细胞，所述方法包括在无血清细胞培养基中温育所述细胞群体，所述无血清细胞培养基包括：
(i)环糊精、亚油酸、至少一种其它ω-6脂肪酸和胆固醇，或
(ii)适当稀释度的在表1和/或表2中描述的补充剂；其中与没有环糊精的含血清培养基中的活细胞密度相比，所述培养使所述无血清细胞培养基中的活细胞密度增加。


24.根据权利要求23所述的用于培养二倍体细胞群体的方法，其中所述环糊精是甲基化环糊精。


25.根据权利要求24所述的用于培养二倍体细胞群体的方法，其中所述甲基化环糊精以约50μM到约200μM的水平存在。


26.根据权利要求23所述的用于培养二倍体细胞群体的方法，其中所述至少一种其它ω-6脂肪酸是多不饱和ω-6脂肪酸。


27.根据权利要求23所述的用于培养二倍体细胞群体的方法，其中所述多不饱和ω-6脂肪酸选自由以下组成的群组：花生四烯酸、亚麻酸、肉豆蔻酸、油酸、棕榈酸、棕榈油酸和硬脂酸。


28.根据权利要求22到27中任一项所述的用于培养二倍体细胞群体的方法，其中
(i)所述培养基或补充剂增加：所述细胞的生长、所述细胞的活细胞密度、病毒感染的细胞的病毒滴度或其组合；和/或
(ii)所述二倍体细胞能够在无血清条件下产生疫苗、病毒、病毒粒子、病毒蛋白或核酸或其病毒片段；和/或
(iii)所述细胞被病毒感染。


29.根据权利要求22到28中任一项所述的用于培养二倍体细胞群体的方法，其中
(i)所述病毒是动物病毒、植物病毒或噬菌体；和/或
(ii)所述病毒选自由以下组成的群组：水痘带状疱疹病毒(VZV)、风疹病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、甲型肝炎病毒、腺病毒、脊髓灰质炎病毒、轮状病毒、天花病毒、水痘病毒、黄热病病毒、乳头瘤病毒、埃博拉病毒、HIV、狂犬病病毒或水疱性口炎病毒(VSV)和登革热病毒；和/或
(iii)所述病毒粒子源自细小病毒科家族、逆转录病毒科家族、黄病毒科家族或噬菌体。


30.根据权利要求22到29中任一项所述的方法，其中所述细胞群体选自由以下组成的群组：MRC-5、MRC-5RCB、MRC-9、WI-38、2BS、Walvax-2、IMR-90、IMR-91、KMB-17、HUT系列细胞、张氏肝细胞、U937、MDCK、表达CD4的T细胞、表达CD8的T细胞、VERO和前述细胞的任何克隆。


31.一种组合，其包括：
(i)细胞群体；(ii)包括环糊精和至少一种脂质的无血清细胞培养基，或者
(i)细胞群体；(ii)无血清基础细胞培养基；以及(iii)包括环糊精和至少一种脂质的补充剂，或者
(i)细胞群体；(ii)无血清基础细胞培养基；以及(iii)适当稀释度的在表1和/或表2中描述的补充剂。


32.根据权利要求31所述的组合，其中：
(i)所述细胞是动物细胞；或者
(ii)所述动物细胞是牛细胞、猫细胞、昆虫细胞、鸟类细胞、灵长类细胞或人细胞；或者
(iii)所述动物细胞是二倍体细胞；或者
(iv)所述细胞选自由以下组成的群组：MRC-5、MRC-5RCB、MRC-9、WI-38、2BS、Walvax-2、IMR-90、IMR-91、KMB-17、HUT系列细胞、张氏肝细胞、U937、MDCK、表达CD4的T细胞、表达CD8的T细胞、VERO和前述细胞的任何克隆。


33.根据权利要求31或32所述的组合，其中所述二倍体细胞在无血清条件下产生疫苗、病毒、病毒粒子、病毒蛋白或核酸或病毒片段。


34.一种产生无血清二倍体细胞培养基的方法，所述方法包括混和(i)基础培养基；以及(ii)包括环糊精和至少一种脂质的补充剂；或(ii)适当稀释度的在表1和/或表2中描述的补充剂。


35....

【专利技术属性】
技术研发人员：A·瓦雷拉罗和纳，J·多纳托，S·曼苏尔，M·达拉斯，AB·哈彻曼，
申请(专利权)人：生命技术公司，
类型：发明
国别省市：美国;US