新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了新型冠状病毒2019‑nCoV核酸检测试剂盒，具体的地，本发明专利技术公开了一种多重检测新型冠状病毒2019‑nCoV核酸的试剂盒及方法，能够同时检测新型冠状病毒2019‑nCoV的3个核酸靶标，可通过不同靶标之间相互验证，防止出现假阳性，对可能因突变而引起的漏检进行确认，显著提高了病毒鉴定的准确性。

Novel coronavirus 2019-nCoV nucleic acid detection kit

【技术实现步骤摘要】
新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒
本专利技术属于生物技术和分子诊断领域，具体地说，本专利技术涉及用于检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合及试剂盒。
技术介绍
冠状病毒在系统分类上属冠状病毒科（Coronaviridae）冠状病毒属（Coronavirus）。冠状病毒属的病毒是具外套膜的正链单股RNA病毒，直径约80～120nm，其遗传物质是所有RNA病毒中最大的，感染人、鼠、猪、猫、犬、狼、鸡、牛、禽类脊椎动物。冠状病毒的一个变种是引起非典型肺炎的病原体，属于RNA病毒。病毒颗粒的直径60～200nm，平均直径为100nm，呈球形或椭圆形，具有多形性。病毒有包膜，包膜上存在棘突，整个病毒像日冕，不同的冠状病毒的棘突有明显的差异。目前已知的可感染人的冠状病毒共7种分别是HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV和新型冠状病毒2019-nCoV。新型冠状病毒2019-nCoV（SARS-CoV-2）属于β属的新型冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm。其基因特征与SARSr-CoV和MERSr-CoV有明显区别。新型冠状病毒2019-nCoV为新发现病毒（基因序列参见GISAID：BetaCov/Wuhan/WH01/2019|EPI_ISL_406798），目前对于该病毒的诊断主要依靠临床症状、病毒分离培养和病毒核酸检测技术进行。临床症状可初步判定为疑似病例，病毒的确诊需要通过核酸检测阳性后方可确认。培养法具有较高的特异性和敏感性，但临床检测时间过长，过程繁琐，不适用于大范围检测。实时荧光PCR技术是在核酸反应管中加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时探针结合在DNA一条单链上，在Taq酶的5’－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。荧光PCR技术是一种灵敏度、特异性和精密度更高的核酸检测技术，其检测结果准确，重复性高，能反应病原体变化，同时避免了传统PCR需后处理的问题，降低了污染的可能性。市场上目前已有一些依据实时荧光定量PCR技术开发的核酸检测试剂盒，但多为单靶标检测试剂，缺乏多基因同时检测以对病毒进行确认，并且试剂性能差异较大，不利于病毒的检测与诊断。基于此，开发一套灵敏度高、特异性强、重复性好的产品用于新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测显得非常必要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒，以便能够高效率、高特异性、低成本的对新型冠状病毒2019-nCoV感染患者进行检测。在本专利技术的第一方面，提供了一种用于多重检测新型冠状病毒2019-nCoV核酸的引物对集，所述引物对集包括：第一引物对组，所述第一引物对组包括：如SEQIDNO.1所示的正向引物；和，如SEQIDNO.2所示的反向引物。在另一优选例中，所述引物对集还包括：第二引物对组，所述第二引物对组包括：如SEQIDNO.4所示的正向引物；和，如SEQIDNO.5所示的反向引物。在另一优选例中，所述引物对集还包括：第三引物对组，所述第三引物对组包括：如SEQIDNO.7所示的正向引物；和，如SEQIDNO.8所示的反向引物。在另一优选例中，所述引物对集还包括：内标引物对组，所述内标引物对组包括：如SEQIDNO.10所示的正向引物；和，如SEQIDNO.11所示的反向引物。本专利技术的第二方面，提供了一种多重检测新型冠状病毒2019-nCoV核酸的探针组，所述探针组包括核苷酸序列如SEQIDNO.3所示的第一探针。在另一优选例中，所述探针组还包括核苷酸序列如SEQIDNO.6所示的第二探针。在另一优选例中，所述探针组还包括核苷酸序列如SEQIDNO.9所示的第三探针。在另一优选例中，所述探针组还包括核苷酸序列如SEQIDNO.12所示的内控探针。在另一优选例中，各探针的5’端包含有荧光报告基团；和/或，各探针的3’端包含有荧光淬灭基团。在另一优选例中，各探针标记的荧光报告基团互不相同。本专利技术的第三方面，提供了一种用于多重检测新型冠状病毒2019-nCoV核酸的试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术第一方面所述的引物对集。在另一优选例中，所述试剂盒还包括本专利技术第二方面所述的探针组。在另一优选例中，所述试剂盒包括第一容器，所述第一容器内包含引物探针混合液，所述引物探针混合液中包含SEQIDNO.1-9所示的多核苷酸序列。在另一优选例中，所述试剂盒包括第一容器，所述第一容器内包含引物探针混合液，所述引物探针混合液中还包含SEQIDNO.10-12所示的多核苷酸序列。在另一优选例中，使用PCR用缓冲液（Buffer）配制所述引物探针混合液。在另一优选例中，所述试剂盒还包括第二容器，所述第二容器内包含PCR酶系，所述PCR酶系包括热启动酶、和逆转录酶M-MMLV；优选地还包括RNA酶抑制剂。在另一优选例中，所述试剂盒还包括第三容器，所述第三容器内包含阳性质控品。在另一优选例中，所述试剂盒还包括第四容器，所述第四容器内包含阴性质控品。本专利技术的第四方面，提供了一种多重检测新型冠状病毒2019-nCoV核酸的方法，所述方法包括步骤：（1）提供待检测对象的核酸样本；（2）制备PCR反应体系并进行PCR检测：其中，所述PCR反应体系包括：步骤（1）提供的所述核酸样本、本专利技术第一方面所述的引物对集、和本专利技术第二方面所述的探针组。在另一优选例中，所述核酸样本可来自咽拭子样本、肺泡灌洗液样本、血液样本、或环境样本。在另一优选例中，所述方法为非诊断目的的检测方法。在另一优选例中，所述PCR反应体系还包括阳性质控品，和/或阴性质控品。在另一优选例中，所述PCR反应体系还包括PCR酶系。本专利技术的第五方面，提供了本专利技术第一方面所述的引物对集、和/或本专利技术第二方面所述的探针组的用途，用于制备PCR检测试剂盒，所述PCR检测试剂盒用于检测新型冠状病毒2019-nCoV核酸。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1：N基因检测限；图2：ORF1ab基因检测限测试；图3：E基因检测限测试；图4：内标测试结果；图5.特异性测试结果；图6.特异性检测内标测试结果；图7.N基因精本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于多重检测新型冠状病毒2019-nCoV核酸的引物对集，其特征在于，所述引物对集包括：/n第一引物对组，所述第一引物对组包括：/n如SEQ ID NO.1所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.2所示的反向引物。/n

【技术特征摘要】
20200205 CN 20201007842791.一种用于多重检测新型冠状病毒2019-nCoV核酸的引物对集，其特征在于，所述引物对集包括：
第一引物对组，所述第一引物对组包括：
如SEQIDNO.1所示的正向引物；和，如SEQIDNO.2所示的反向引物。


2.如权利要求1所述的引物对集，其特征在于，所述引物对集还包括：
第二引物对组，所述第二引物对组包括：
如SEQIDNO.4所示的正向引物；和，如SEQIDNO.5所示的反向引物。


3.如权利要求1所述的引物对集，其特征在于，所述引物对集还包括：
第三引物对组，所述第三引物对组包括：
如SEQIDNO.7所示的正向引物；和，如SEQIDNO.8所示的反向引物。


4.一种多重检测新型冠状病毒2019-nCoV核酸的探针组，其特征在于，所述探针组包括核苷酸序列如SEQIDNO.3所示的第一探针；
核苷酸序列如SEQIDNO.6所示的第二探针；
核苷酸序列如SEQIDNO.9所示的第三探针；和
核苷酸序列如SEQIDNO.12所示的内控探针。


5.一种用于多重检测新型冠状病毒2019-nCoV核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋析文，范建，彭海龙，
申请(专利权)人：中山大学达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44