一种基于高通量测序法的肿瘤抗原表达检测引物及试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种基于高通量测序的肿瘤抗原表达检测引物及试剂盒及其用途。所述试剂盒中包括中国人常发肿瘤(包括肺癌、肝癌、胰腺癌、结直肠癌等)多个肿瘤抗原的多对扩增引物、以及进行高通量测序所需的RNA逆转录、文库构建及测序试剂。本发明专利技术的引物及试剂盒能够通过对样本进行一次性检测和分析，完成58种肿瘤抗原的RNA表达水平检测，具有通路高、灵敏度高、检测限低、特异性高等特点。

A primer and kit for detection of tumor antigen expression based on high-throughput sequencing

【技术实现步骤摘要】
一种基于高通量测序法的肿瘤抗原表达检测引物及试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种基于高通量测序法的肿瘤抗原表达检测引物及试剂盒。
技术介绍
肿瘤抗原是指由肿瘤细胞制造的一种具有免疫原性的物质，能够激发宿主机体的免疫应答。由于机体的自身耐受作用，机体内一般正常存在的蛋白物质不具有抗原性。但未经免疫耐受的蛋白就会激发免疫应答，这类蛋白可以是机体内存在的正常蛋白，包括隔离于免疫系统之外的隐蔽抗原、极低量存在的蛋白或仅在特定发育阶段存在的蛋白，也可以是由于突变造成结构异常的蛋白。肿瘤抗原通常来源于病毒蛋白、或突变导致的结构异常蛋白、或者在肿瘤中过度或异常表达的正常蛋白。肿瘤抗原是识别肿瘤的重要标志物，同时也是潜在的治疗靶点，因此，肿瘤抗原的检测和鉴定对于肿瘤的诊断、治疗和预后都具有重要的意义。肿瘤抗原包括肿瘤相关抗原和肿瘤特异性抗原。一些肿瘤相关抗原在正常组织中也存在，只是在肿瘤组织中高表达；而肿瘤特异性抗原一般是分子量较小的多肽，仅在肿瘤组织中表达，而正常组织中不表达。肿瘤细胞具有高度异质性，无论是表型还是分子特征，不同患者之间、同一患者的肿瘤原发灶和转移灶之间、甚至同一肿瘤病灶的不同亚克隆之间，均存在很强的肿瘤异质性，因而可作为治疗靶点的肿瘤抗原也呈现高度异质性。因此目前靶向肿瘤抗原的免疫治疗的开发，均具有个体化、多靶点、特异性的特点，也亟需高通量、高灵敏度及高覆盖度的肿瘤抗原的检测和鉴定方法。病毒抗原、癌睾抗原、组织特异性肿瘤抗原、肿瘤过表达抗原等目前在蛋白层面有相对成熟的检测和鉴定方法，主要基于酶联免疫吸附测定(ELISA)、抗体芯片等，这些方法通量低、且检测范围受限于已有抗体的抗原。
技术实现思路
为了解决目前技术上对肿瘤抗原的检测和鉴定的缺陷，本专利技术的目的是提供一种基于高通量测序法的肿瘤抗原表达检测引物及试剂盒，尤其是一种全面、高效、便捷、可适用于多癌种的检测(高通量测序法)鉴定肿瘤抗原的引物及试剂盒。为了实现上述目的以及其他相关目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了一种基于高通量测序法的肿瘤抗原表达检测引物，所述引物为用于肿瘤抗原基因的PCR扩增引物和用于看家基因的PCR扩增引物；其中，所述肿瘤抗原基因包括MAGEC1,SSX1,MAGEC2,GAGE1,MAGEA1,MAGEA10,MAGEA3,MAGEA4,CTAG1B,SYCP1,SSX2,SSX4,DDX43,MAGEA2,MAGEA5,MAGEA6,PAGE4,SPANXB1,TPTE,GAGE10,GAGE12J,GAGE2A,CTAG2,MAGEA12,MLANA,XAGE1B,SPANXC,SSX5,MAGEB1,MAGEB2,MUC1,TERT,CEACAM5,KDR,GAST,WT1,KIF20A,CAP1,NBR1,MSLN,LUZP4,CTAG1A,SSX2B,SSX4B,CT45A1,DDX53,CTAGE1,FATE1,ACRBP,KDM5B,BAGE2,GAGE12F,GAGE12I,GAGE13,GAGE2E,GAGE2C,XAGE1A和BAGE中一个或两个以上；所述看家基因包括JUN,LRP1,MRPL13,HMBS和TBP中的一个或两个以上。根据本专利技术所述的引物，其中作为一种选择，所述用于肿瘤抗原基因的PCR扩增引物包括以下58对引物中的一对或两对以上：针对GAGE12F扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；针对CT45A1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；针对SPANXC扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.5所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；针对GAGE12J扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.7所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.8所示；针对BAGE扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.9所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.10所示；针对DDX43扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.11所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.12所示；针对GAGE2C扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.13所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.14所示；针对GAGE13扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.15所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.16所示；针对NBR1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.17所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.18所示；针对CTAGE1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.19所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.20所示；针对MAGEA1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.21所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.22所示；针对CAP1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.23所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.24所示；针对PAGE4扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.25所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.26所示；针对MAGEC1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.27所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.28所示；针对SPANXB1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.31所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.32所示；针对FATE1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.35所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.36所示；针对MAGEA3扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.37所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.38所示；针对ACRBP扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.39所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.40所示；针对SSX2扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.41所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.42所示；针对GAGE10扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.43所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.44所示；针对MUC1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于高通量测序法的肿瘤抗原表达检测引物，其特征在于，所述引物包括用于肿瘤抗原基因的PCR扩增引物和用于看家基因的PCR扩增引物；/n其中，所述肿瘤抗原基因包括MAGEC1,SSX1,MAGEC2,GAGE1,MAGEA1,MAGEA10,MAGEA3,MAGEA4,CTAG1B,SYCP1,SSX2,SSX4,DDX43,MAGEA2,MAGEA5,MAGEA6,PAGE4,SPANXB1,TPTE,GAGE10,GAGE12J,GAGE2A,CTAG2,MAGEA12,MLANA,XAGE1B,SPANXC,SSX5,MAGEB1,MAGEB2,MUC1,TERT,CEACAM5,KDR,GAST,WT1,KIF20A,CAP1,NBR1,MSLN,LUZP4,CTAG1A,SSX2B,SSX4B,CT45A1,DDX53,CTAGE1,FATE1,ACRBP,KDM5B,BAGE2,GAGE12F,GAGE12I,GAGE13,GAGE2E,GAGE2C,XAGE1A和BAGE中一个或两个以上；/n所述看家基因包括JUN,LRP1,MRPL13,HMBS和TBP中的一个或两个以上。/n...

【技术特征摘要】
1.一种基于高通量测序法的肿瘤抗原表达检测引物，其特征在于，所述引物包括用于肿瘤抗原基因的PCR扩增引物和用于看家基因的PCR扩增引物；
其中，所述肿瘤抗原基因包括MAGEC1,SSX1,MAGEC2,GAGE1,MAGEA1,MAGEA10,MAGEA3,MAGEA4,CTAG1B,SYCP1,SSX2,SSX4,DDX43,MAGEA2,MAGEA5,MAGEA6,PAGE4,SPANXB1,TPTE,GAGE10,GAGE12J,GAGE2A,CTAG2,MAGEA12,MLANA,XAGE1B,SPANXC,SSX5,MAGEB1,MAGEB2,MUC1,TERT,CEACAM5,KDR,GAST,WT1,KIF20A,CAP1,NBR1,MSLN,LUZP4,CTAG1A,SSX2B,SSX4B,CT45A1,DDX53,CTAGE1,FATE1,ACRBP,KDM5B,BAGE2,GAGE12F,GAGE12I,GAGE13,GAGE2E,GAGE2C,XAGE1A和BAGE中一个或两个以上；
所述看家基因包括JUN,LRP1,MRPL13,HMBS和TBP中的一个或两个以上。


2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，所述用于肿瘤抗原基因的PCR扩增引物包括以下58对引物中的一对或两对以上：
针对GAGE12F扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；
针对CT45A1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；
针对SPANXC扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.5所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；
针对GAGE12J扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.7所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.8所示；
针对BAGE扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.9所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.10所示；
针对DDX43扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.11所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.12所示；
针对GAGE2C扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.13所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.14所示；
针对GAGE13扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.15所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.16所示；
针对NBR1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.17所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.18所示；
针对CTAGE1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.19所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.20所示；
针对MAGEA1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.21所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.22所示；
针对CAP1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.23所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.24所示；
针对PAGE4扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.25所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.26所示；
针对MAGEC1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.27所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.28所示；
针对SPANXB1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.31所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.32所示；
针对FATE1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.35所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.36所示；
针对MAGEA3扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.37所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.38所示；
针对ACRBP扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.39所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.40所示；
针对SSX2扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.41所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.42所示；
针对GAGE10扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.43所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.44所示；
针对MUC1扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.47所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.48所示；
针对SSX5扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.49所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.50所示；
针对MAGEC2扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.53所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.54所示；
针对SSX2B扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.55所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.56所示；
针对XAGE1A扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.57所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.58所示；
针对DDX53扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.59所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.60所示；
针对GAST扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.61所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.62所示；
针对MSLN扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.63所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.64所示；
针对GAGE2E扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.65所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.66所示；
针对MAGEB2扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.67所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.68所示；
针对SSX4扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.69所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.70所示；
针对CTAG1A扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.71所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.72所示；
针对LUZP4扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.73所示，负向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.74所示；
针对MAGEA12扩增的引物对，所述引物对包括正向引物：其核苷酸序列如SEQIDNO.75所示，负向引...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋瑾，张恒辉，孔雅娴，
申请(专利权)人：北京臻知医学科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：北京;11