circRRM2B基因作为新靶点在筛选维罗非尼耐药的黑色素瘤治疗药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了circRRM2B基因作为新靶点在筛选维罗非尼耐药的黑色素瘤治疗药物中的应用。所述药物以circRRM2B基因为靶点，抑制或者沉默circRRM2B基因的表达。本发明专利技术还提供了抑制或沉默circRRM2B基因表达的试剂在制备用于抑制黑色素瘤药物中的应用。本发明专利技术通过芯片筛选，发现了circRRM2B与黑色素瘤维罗非尼耐药相关，是筛选维罗非尼耐药的黑色素瘤治疗药物的新靶点，对于筛选新的药物具有积极的意义。同时，新靶点的发现将为耐药黑色素瘤的治疗提供了一种新思路。

【技术实现步骤摘要】
circRRM2B基因作为新靶点在筛选维罗非尼耐药的黑色素瘤治疗药物中的应用
本专利技术属于生物工程领域，涉及黑色素瘤，具体来说是以circRRM2B基因作为靶点在筛选用于抑制黑色素瘤药物中的应用。
技术介绍
1.1维罗非尼耐药是黑色素瘤治疗中的难题黑色素瘤是一种黑色素细胞来源的恶性肿瘤，传统治疗效果差、死亡率高。约40-60％黑色素瘤患者携带BRAFV600E突变，这个位点突变能激活MEK-ERK通路，促进肿瘤细胞不断分裂、增殖。针对BRAFV600E突变的靶向药物维罗非尼(VemurafenibPLX4032)可以明显延长患者无进展生存和总生存率。然而临床发现维罗非尼治疗1年内几乎所有的患者都会出现耐药。主要的获得性耐药机制包括：MEK-ERK通路再活化(BRAFV600E基因表达上调，NRAS或MEK等多个点突变的产生)、RTK或PI3K-AKT通路代偿激活和肿瘤微环境改变等。采用BRAF抑制剂联合用药方案，包括联合MEK抑制剂、PI3K抑制剂等可以降低耐药性，然而多种药物联合应用价格昂贵，且研究发现联合应用亦会通过激活代偿通路，再次产生耐药。因此深入研究黑色素瘤维罗非尼的耐药机理，寻找新的耐药靶点，对减少黑色素瘤维罗非尼耐药具有重要的现实意义。1.2外泌体介导的circRNA转运是肿瘤耐药的新机制外泌体是一类由细胞分泌的膜性囊泡，直径约40-100nm，内含蛋白质、脂质、非编码RNA等物质，是细胞间通讯的重要介质。非编码RNA是指不编码蛋白质的RNA，包括LncRNA、miRNA和circRNA等。circRNA是一种新型的非编码RNA。它们通过共价键形成闭合环，结构稳定，难以被RNA酶降解，在外泌体中表达十分丰富。近年来一些学者发现外泌体通过将circRNA转移到受体细胞，调控相应基因表达，参与肿瘤耐药。越来越多的研究也支持circRNA在细胞耐药方面显示出强大的生物学功能是肿瘤耐药的新靶点。1.3circRRM2B--黑色素瘤维罗非尼耐药的新靶点circRRM2B是我们通过芯片筛选到的环状RNA。circRRM2B的circbaseID：hsa_circ_0003794，基因长度973bp,位于人类的第8条染色体上。序列为：caaaagtagattttctatctgctatccatcgcaaggcccaatctgcttttttcttaacatagggcatggtttcaattgcattaaataaaaattccctgtaaaaacaaaagaatgaacagcaaagttattcacttgtttttctttttttttttttgagacagagtctcgctctgttgcccaggctggagtgcagtggcacgatctcggctcactgcaagctccacctcccgggttcatgccattctcctgcctcagcctcccgagtagctaggacgacaggtgcccgccaccacgcccggctagtatttttagtagagacgtggtttcactgtgttagccaggatggtctcaatctcctgacctcgtgatccacctgcttcggcctcccaaggtgctgggattacagccatgagccaccatgccttggcctcacttgtttttcttaattggactaaacttaatcagagataataattgtaactctacggtatgctaccagatctgtagtttttatacatttttacatgtccatagaacagaaataaaactcaaattattggtttgaatctggtctcatacaaaaccagctaaatttgagtattcaatttctaaacagaagatgctactgaacagttcttaaagataaaatatctaaaggttaactggttctataacaagttttttttaaaacccaatacattattaagcaatagaaaatattatgctcagaaacttccatacttgaataatctttccttaacattgagttttggaataaattctgatctgaacataaccaagccgtaagcaatattttgtaaataaaatcccaacaataccttttcttgggatctctgatgtaagtgtctatcagcaaactgtacatctctgagtgaacattctcgatgagaatttgaaagccatagaaacagcgagcctctggaacctgcacctcctgactaaagcgctccac。由于circRNA的研究处在起步阶段，目前尚没有circRRM2B生物学功能的研究报道。而circRNA和其对应的线性基因有一定关联，因此circRNA可能具有和线性基因相关的功能。查circbase发现circRRM2B(hsa_circ_0003794)对应的线性基因是RRM2B。RRM2B基因又被称为P53R2，是黑素瘤的预后因子，沉默P53R2可以增强黑色素瘤细胞对尼莫司汀的敏感性。我们在实验中使用黑色素瘤细胞株(维罗非尼耐药株和敏感株)：耐药株来源的外泌体和敏感株共培养,增加了敏感株对药物的抗性。随后采用circRNA芯片筛选耐药株和敏感株外泌体中表达差异最显著的10个环状RNA，qRT-PCR验证发现circRRM2B在耐药株及其外泌体中表达明显增高。耐药株分泌的外泌体和敏感株共培养后敏感株中circRRM2B的表达也明显升高。说明circRRM2B被包裹在外泌体中，通过囊泡传递到敏感株，增加了细胞的耐药表型。而在耐药株中抑制circRRM2B的表达可以增加耐药株对维罗非尼的敏感性。这提示circRRM2B基因可以作为黑色素瘤维罗非尼耐药治疗的新靶点。
技术实现思路
针对现有技术中的上述技术问题，本专利技术提供了circRRM2B基因作为靶点在筛选用于抑制黑色素瘤的药物中的应用，所述的这种应用解决了现有技术中黑色素瘤维罗非尼耐药的技术问题。本专利技术提供了circRRM2B基因作为靶点在筛选用于抑制黑色素瘤药物中的应用，所述药物以circRRM2B基因为靶点，抑制或者沉默circRRM2B基因的表达。本专利技术还提供了抑制或沉默circRRM2B基因表达的试剂在制备用于抑制黑色素瘤药物中的应用。circRRM2B(hsa_circ_0003794)是我们通过circRNA芯片筛选到的。在pubmed上尚未查到其生物学功能的研究报道。我们通过实验发现：在黑色素瘤维罗非尼耐药的细胞株中，抑制circRRM2B表达可以增加耐药株对药物的敏感性；而在敏感株中增加circRRM2B表达可以增强细胞的抗药性。故提示circRRM2B基因可以作为黑色素瘤维罗非尼耐药治疗的新靶点。本专利技术和已有技术相比，其技术进步是显著的。现有的解决黑色素瘤维罗非尼耐药方案为多种靶向药物联合应用。对人体毒副作用大，且价格昂贵。本专利技术通过芯片筛选，发现了circRRM2B与黑色素瘤维罗非尼耐药相关，是筛选用于抑制黑色素瘤的药物的新靶点，对于筛选新的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.circRRM2B基因作为新靶点在筛选维罗非尼耐药的黑色素瘤治疗药物中的应用，其特征在于：所述药物以circRRM2B基因为靶点，抑制或者沉默circRRM2B基因的表达。/n

【技术特征摘要】
1.circRRM2B基因作为新靶点在筛选维罗非尼耐药的黑色素瘤治疗药物中的应用，其特征在于：所述药物以circRRM2B基因为靶点，抑制或...

【专利技术属性】
技术研发人员：程琼，
申请(专利权)人：上海市东方医院同济大学附属东方医院，
类型：发明
国别省市：上海;31