突变型FGF-21肽缀合物及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种包含经由糖基接头附接至突变型FGF‑21肽的PEG部分的突变型成纤维细胞生长因子‑21(FGF‑21)肽缀合物及其用途。进一步提供了一种用于产生突变型FGF‑21肽缀合物的方法以及包含所述突变型FGF‑21肽缀合物的药物组合物和容器。

Mutant FGF-21 peptide conjugate and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】突变型FGF-21肽缀合物及其用途相关申请的交叉引用本申请要求2017年9月4日提交的美国临时申请号62/553,970的优先权，将其整体出于所有目的通过引用并入本文。
本专利技术涉及包含经由糖基部分(moiety)附接至突变型(mutant)FGF-21肽的聚乙二醇(PEG)部分的突变型成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)肽缀合物(conjugate)及其治疗用途。本文还涵盖了用于产生该突变型FGF-21肽缀合物的方法以及包含该突变型FGF-21肽缀合物的药物组合物和容器。
技术介绍
FGF-21是作为单体非糖基化蛋白天然存在的内分泌激素。与FGF-19和FGF-23一起，FGF-21属于内分泌作用亚家族，而其余18种哺乳动物FGF配体被归类为五个旁分泌作用亚家族。与旁分泌作用FGF相反，内分泌作用FGF对硫酸肝素仅表现出低亲和力，并且因而能够进入血液循环。因此，内分泌FGF能够调节代谢过程，比如胆汁酸稳态、肝葡萄糖和蛋白质代谢(FGF-19)、葡萄糖和脂质代谢(FGF-21)以及维生素D和磷酸盐(phosphate)稳态本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种突变型成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)肽缀合物，其包含/ni)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的突变型FGF-21肽，/nii)糖基部分，和/niii)20kDa聚乙二醇(PEG)，/n其中所述突变型FGF-21肽通过在SEQ ID NO:2的氨基酸位置173处的苏氨酸和所述糖基部分的第一位点之间的共价键附接至所述糖基部分，并且其中所述糖基部分通过在所述糖基部分的第二位点和所述20kDa PEG之间的共价键附接至所述20kDa PEG。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170904 US 62/553,9701.一种突变型成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)肽缀合物，其包含
i)包含SEQIDNO:2的氨基酸序列的突变型FGF-21肽，
ii)糖基部分，和
iii)20kDa聚乙二醇(PEG)，
其中所述突变型FGF-21肽通过在SEQIDNO:2的氨基酸位置173处的苏氨酸和所述糖基部分的第一位点之间的共价键附接至所述糖基部分，并且其中所述糖基部分通过在所述糖基部分的第二位点和所述20kDaPEG之间的共价键附接至所述20kDaPEG。


2.根据权利要求1所述的突变型FGF-21肽缀合物，其中所述糖基部分包含以下中的至少一种：N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)残基、半乳糖(Gal)残基、唾液酸(Sia)残基、Sia残基的5-胺类似物、甘露糖(Man)残基、甘露糖胺、葡萄糖(Glc)残基、N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)残基、岩藻糖残基、木糖残基或其组合。


3.根据前述权利要求中任一项所述的突变型FGF-21肽缀合物，其中所述糖基部分包含以下中的至少一种：N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)残基、半乳糖(Gal)残基、唾液酸(Sia)或其组合。


4.根据权利要求3所述的突变型FGF-21肽缀合物，其中至少一个Sia残基是九碳羧化糖。


5.根据权利要求4所述的突变型FGF-21肽缀合物，其中所述至少一个Sia残基是N-乙酰基-神经氨酸(2-酮-5-乙酰胺基-3,5-双脱氧-D-甘油-D-半乳壬酮吡喃-1-糖酸(Neu5Ac)、N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc)、2-酮-3-脱氧-壬酮糖酸(KDN)或9-取代的唾液酸。


6.根据权利要求5所述的突变型FGF-21肽缀合物，其中所述9-取代的唾液酸是9-O-乳酰基-Neu5Ac、9-O-乙酰基-Neu5Ac、9-脱氧-9-氟-Neu5Ac或9-叠氮基-9-脱氧-Neu5Ac。


7.根据前述权利要求中任一项所述的突变型FGF-21肽缀合物，其中所述糖基部分包含结构-GalNAc-Sia-。


8.根据前述权利要求中任一项所述的突变型FGF-21肽缀合物，其中所述20kDaPEG部分通过共价键至接头附接至所述糖基部分，其中所述接头包含至少一个氨基酸残基。


9.根据权利要求8所述的突变型FGF-21肽缀合物，其中所述至少一个氨基酸残基是甘氨酸(Gly)。


10.根据前述权利要求中任一项所述的突变型FGF-21肽缀合物，其包含结构-GalNAc-Sia-Gly-PEG(20kDa)。


11.根据前述权利要求中任一项所述的突变型FGF-21肽缀合物，其包含以下结构：



其中n是选自450至460的整数。


12.根据前述权利要求中任一项所述的突变型FGF-21肽缀合物，其中所述20kDaPEG是线性或支化PEG。


13.根据前述权利要求中任一项所述的突变型FGF-21肽缀合物，其中所述20kDaPEG是线性PEG。


14.根据前述权利要求中任一项所述的突变型FGF-21肽缀合物，其中所述20kDaPEG是20kDa甲氧基-PEG。


15.一种药物组合物，其包含根据前述权利要求中任一项所述的突变型FGF-21肽缀合物和药学上可接受的运载体。


16.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述突变型FGF-21肽缀合物以从0.1mg/mL至50mg/mL、特别是从1mg/mL至45mg/mL、更特别是从10mg/mL至40mg/mL的范围的浓度、最特别是以26±4mg/mL的浓度存在。


17.根据权利要求15或16所述的药物组合物，其进一步包含缓冲剂、特别是Tris缓冲液。


18.根据权利要求17所述的药物组合物，其中所述缓冲剂以从1mM至100mM、特别是从2mM至75mM、更特别是从5mM至50mM、甚至更特别是从10mM至25mM、最特别是16±2mM的浓度存在。


19.根据权利要求15至18中任一项所述的药物组合物，其中pH在从6.0至8.5、特别是从6.5至8.0、更特别是从6.75至8.0的范围内，最特别地是7.5±0.3。


20.根据权利要求15至19中任一项所述的药物组合物，其进一步包含盐、特别是无机盐、更特别是NaCl。


21.根据权利要求20所述的药物组合物，其中所述盐以从30mM至200mM、特别是从40mM至150mM、更特别是从50mM至100mM、最特别是56±2mM的浓度存在。


22.根据权利要求15至21中任一项所述的药物组合物，其进一步包含张力调节剂。


23.根据权利要求22所述的药物组合物，其中所述张力调节剂选自由甘油、氨基酸、氯化钠、蛋白质、糖和糖醇组成的组；特别地，所述张力调节剂是糖；更特别地，所述张力调节剂是蔗糖。


24.根据权利要求22或23所述的药物组合物，其中所述张力调节剂以50mM至200mM的浓度、更特别地以100mM至175mM的浓度存在，甚至更特别地以135mM至160mM的浓度、最特别地以150±2mM的浓度存在。


25.根据权利要求15至24中任一项所述的药物组合物，其进一步包含表面活性剂、特别是非离子表面活性剂。


26.根据权利要求25所述的药物组合物，其中所述表面活性剂或非离子表面活性剂是基于聚山梨酯的非离子表面活性剂、特别是聚山梨酯20或聚山梨酯80、更特别是聚山梨酯20。


27.根据权利要求25或26所述的药物组合物，其中所述表面活性剂或非离子表面活性剂以0.01mg/mL至1mg/mL的浓度、特别地以0.05至0.5mg/mL的浓度、更特别地以0.2±0.02mg/mL的浓度存在。


28.根据权利要求15至27中任一项所述的药物组合物，其包含0.1mg/mL至50mg/mL的突变型FGF-21肽缀合物，1mM至100mM缓冲剂、特别是Tris缓冲液，30mM至200mMmM盐、特别是NaCl，50mM至200mM张力调节剂、特别是蔗糖，以及0.01mg/mL至1mg/mL表面活性剂或非离子表面活性剂、特别是聚山梨酯20，并且具有6.0至8.5的pH。


29.一种药物容器，其包含根据权利要求1至14中任一项所述的突变型FGF-21肽缀合物或根据权利要求15至28中任一项所述的药物组合物。


30.根据权利要求29所述的药物容器，其中所述药物容器是注射器、小瓶、输液瓶、安瓿、注射管、配备有针保护系统的注射器或注射笔内的注射管。


31.一种产生根据权利要求1至14中任一项所述的突变型FGF-21肽缀合物的方法，其包括以下步骤：
(1)在表达宿主中重组产生所述突变型FGF-21肽；和
(2)将PEG-糖基部分酶促地附接至步骤(1)的所述突变型FGF-21肽，其中所述PEG具有20kDa，从而形成所述突变型FGF-21肽缀合物。


32.根据权利要求31所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·K·科佩克，P·M·刘，
申请(专利权)人：八九生物有限公司，
类型：发明
国别省市：以色列;IL