EPO在抗金黄色葡萄球菌感染药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种EPO及其类似物在制备治疗金黄色葡萄球菌感染药物中的应用和一种体外促进巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的方法。通过在巨噬细胞中加入EPO及其类似物，促进巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌可以有效对抗金黄色葡萄球菌感染。本发明专利技术提供了一种EPO及其类似物的新应用，并揭示了激活巨噬细胞EPOR可促进巨噬细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的吞噬。

【技术实现步骤摘要】
EPO在抗金黄色葡萄球菌感染药物中的应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种EPO及其类似物在制备治疗金黄色葡萄球菌感染药物中的应用和一种体外促进巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的方法。
技术介绍
金黄色葡萄球菌是一种革兰氏阳性球菌，隶属于葡萄球菌属，为一种常见的性致病微生物。根据美国疾病控制中心的报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。由于金黄色葡萄球菌能够在多种物种中定居，因此它很容易从一个物种传播到另一个物种，从人类传播到动物，然后反过来传播。细菌可通过直接接触和与受污染物体(如手机、电话、门把手、水龙头、电脑键盘、鼠标、刀、货币以及医疗设备等)直接接触而在人与人之间传播。甚至有可能通过吸入在打喷嚏或咳嗽时液滴传播。它引起的疾病从轻微的皮肤感染到危及生命的全身感染，如败血症、心内膜炎、坏死性肺炎、中毒性休克综合征、坏死性筋膜炎、坏死性肺炎以及骨关节感染等。自上世纪40年代青霉素问世后，金黄色葡萄球菌引起的感染受到了极大的控制。但是随着青霉素的广泛应用，有些金黄色葡萄球菌产生了青霉素酶，能水解β-内酰环，表现为对青霉素的耐药。但随后科学家研究出一种新的能耐青霉素酶的半合成青霉素，即甲氧西林。1959年应用于临床后甲氧西林曾有效地控制了耐青霉素金黄色葡萄球菌导致的感染。可自英国的Jevons首次发现了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)后，MRSA从发现至今感染几乎遍及全球，已成为院内和社区感染的重要病原菌之一。美国国家医院感染监测报告中，1992年医院ICU金黄色葡萄球菌感染中MRSA占35.9％，2003年为64.4％，年增长率为3.1％。据报道美国每年有近40万例金黄色葡萄球菌感染住院患者，其中MRSA感染导致约19000例死亡，相当于艾滋病、结核病和病毒性肝炎死亡的总数。根据是否对甲氧西林敏感，将金黄色葡萄球菌可分为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。荟萃分析报告显示，与MSSA感染相比，MRSA感染的罹患率和病死率明显增加，住院时间较长，医疗费用增加。长期以来，万古霉素是治疗MRSA感染的金标准。但是1996年日本首次报道了万古霉素不敏感株Mu3，万古霉素对其最小抑菌浓度(MIC)为4mg/L，此后又报道1株Mu50，万古霉素对其MIC为8mg/L(VISA)。2002年美国报道首例万古霉素耐药株(VRSA)，此后全球报道万古霉素不敏感株或耐药MRSA不断增多。迄今已报道VISA超过100株，VRSA16株。此后不断有报道万古霉素MIC为1～2mg/L的MRSA菌株，其所致感染用万古霉素治疗失败率增高。至此，万古霉素被认为是有效对付革兰阳性菌的最后一道防线也受到了挑战。除了积极寻求新一代的抗生素，开发新的抗菌感染策略和新的药物成为了迫在眉睫的任务。EPO是促红细胞生成素，EPO的功能通过与EPOR(EPO受体)作用实现，EPOR与EPO作用高度保守，不与除EPO外其它细胞因子作用。近年发现EPOR还表达于神经元等组织细胞和巨噬细胞等炎症细胞，EPO与EPOR作用后有除造血外其它功能。如在系统性红斑狼疮、自身免疫性神经炎、自身免疫性脑脊髓炎以及动脉粥样硬化中，EPO与EPOR结合后，可促进巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬，促进这些疾病的康复。而EPO类似物如唾液酸促红素、氨甲酰化促红细胞生成素以及焦谷氨酸化B螺旋表面肽无促红细胞生成作用却保留了神经保护作用。EPO及其类似物能否通过激活巨噬细胞上的EPOR发挥促细菌吞噬清除功能，应用在金黄色葡萄球菌感染性炎症，尤其是MRSA感染性炎症中还尚未可知。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种EPO及其类似物在制备治疗金黄色葡萄球菌感染药物中的应用，该应用是EPO及其类似物的新应用，为治疗金黄色葡萄球菌感染包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染性炎症提供了新的治疗思路。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：EPO及其类似物在制备治疗金黄色葡萄球菌感染药物中的应用。EPO是机体最重要促造血因子，在临床上广泛用于治疗多种原因导致的贫血，目前全球的EPO市场为70亿美元左右。市面上除了普通重组人EPO(rhEPO)外，还有一些EPO类似物，如通过高糖基化、PEG化等方式，在分子水平上对rhEPO分子进行改造，使其药动学和药效学特性得到改善，半衰期明显延长的长效化EPO；还有通过噬菌体文库技术筛选、合成的能够模拟EPO活性的低聚肽；还有以氨基酸为原料，用化学方法合成的EPO衍生肽，一些衍生肽没有促红细胞的生成作用却保留了EPO的其它功能。进一步，所述金黄色葡萄球菌为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。进一步，所述EPO为rhEPO，所述类似物为ARA290。EPO指由任何常规来源，如组织、蛋白质合成、天然或重组细胞的细胞培养获得的天然或重组蛋白质，在本专利技术中优选rhEPO。EPO类似物选取ARA290，ARA290是根据EPO-(EPOR)2晶体学研究分析设计，模拟EPO的三维空间结构，主要取自B螺旋结构的11个氨基酸的多肽的焦谷氨酸化形式，无促红细胞生成活性。进一步，所述EPO及其类似物可与万古霉素联合应用以降低万古霉素的使用剂量。进一步，所述类似物为ARA290，所述ARA290与万古霉素的质量比为1：5。本专利技术的目的之二在于提供一种体外促进巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的方法，通过该方法的研究可在体外确定EPO的及其类似物激活巨噬细胞EPOR可促进巨噬细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的吞噬，并可联合万古霉素治疗可降低万古霉素的使用剂量。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一种体外促进巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的方法在于通过在巨噬细胞中加入EPO，促进巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌并检测巨噬细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬能力。具体的，通过在巨噬细胞中加入PBS或EPO，或者是选取不同来源的小鼠巨噬细胞,检测巨噬细胞对金黄色葡萄球菌吞噬能力。从而验证EPO在体外可促进巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌。进一步，所述方法包括以下步骤：1)取得小鼠腹膜炎细胞并培养得到小鼠腹腔巨噬细胞；2)给予rhEPO孵育的小鼠巨噬细胞；3)取步骤2)的小鼠巨噬细胞加入分子探针BacLightgreen标记的金黄色葡萄球菌体外孵育；4)取步骤3)的巨噬细胞采用荧光标记F4/80抗体标记并检测巨噬细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬能力。进一步，步骤2)所述rhEPO的浓度为20IU/ml。进一步，步骤3)所述孵育时间为30分钟，所述小鼠巨噬细胞与金黄色葡萄球的数量比为1：10。进一步，所述金黄色葡萄球菌为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。为进一步研究其体内的效应，通过皮肤囊泡注射金黄色葡萄球菌致小鼠感染炎症，给予不同的处理并分组，随后检测小鼠皮肤囊腔中性粒细胞数量、金黄色葡萄球菌菌落以及炎症因子，观察小鼠皮肤组织炎症细胞浸润变化，以验证EPO联合万古霉素治疗金黄色葡萄球菌感染，可本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.EPO及其类似物在制备治疗金黄色葡萄球菌感染药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.EPO及其类似物在制备治疗金黄色葡萄球菌感染药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述金黄色葡萄球菌为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述EPO为rhEPO，所述类似物为ARA290。


4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述EPO及其类似物可与万古霉素联合应用以降低万古霉素的使用剂量。


5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述类似物为ARA290，所述ARA290与万古霉素的质量比为1：5。


6.一种体外促进巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，通过在巨噬细胞中加入EPO或ARA290，促进巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌并检测巨噬细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬能力。
<...

【专利技术属性】
技术研发人员：张志仁，梁飞红，罗邦伟，关惠婷，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学，
类型：发明
国别省市：重庆;50