【技术实现步骤摘要】
工程化免疫细胞的制备及其用途
本专利技术涉及生物医药
更具体地，涉及一种CD52基因被敲除的工程化免疫细胞的制备及其用途。
技术介绍
嵌合抗原受体(CAR)细胞，尤其是CART细胞是目前最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一，其基本原理主要是提取患者自身的T细胞，并通过基因和细胞工程手段使其表达能够识别并结合肿瘤细胞表面抗原的特异性嵌合抗原受体，从而靶向杀伤肿瘤细胞。CART已经在白血病和淋巴瘤治疗中取得显著的疗效。2017年8月30日，美国FDA批准了CART细胞疗法Kymriah正式上市，用于治疗复发性或难治性儿童、青少年B-细胞急性淋巴细胞白血病（rALL）。急性淋巴细胞白血病在15岁以下儿童癌症确诊病例中约占25%，是美国最常见的儿童癌。在我国，急性淋巴细胞白血病占儿童急性白血病的80%，发病率为十万分之一。另一款批准上市的CART细胞疗法是Yescarta，用于治疗成年特定类型大B细胞淋巴瘤患者。Kymriah和Yescarta都属于自体CART，即从患者身体分离T细胞并进行改造后，再输入该患者。自体CAT...
【技术保护点】
1.一种sgRNA分子，其包含的间隔区序列如SEQ ID NO：13所示。/n
【技术特征摘要】
1.一种sgRNA分子，其包含的间隔区序列如SEQIDNO：13所示。
2.一种核酸分子，其编码根据权利要求1所述的sgRNA分子。
3.一种载体，其包含根据权利要求2所述的核酸分子。
4.一种制备工程化免疫细胞的方法，包括将免疫细胞与Cas9酶和根据权利要求1所述的sgRNA接触从而敲除CD52基因。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述Cas9酶是蛋白或编码核酸的形式，所述sgRNA是RNA分子、其编码核酸或载体的形式。
6.根据权利要求4所述的方法，其中所述免疫细胞是T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞、单核细胞、NK细胞或NKT细胞。
7.根据权利要求6所述的方法，进一步包括向所述免疫细胞引入编码嵌合抗原受体或T细胞受体或两者的核酸。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述嵌合抗原受体包含配体结合结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和胞内信号传导结构域，所述配体结合结构域靶向选自以下的靶标：CD19、CD20、CD22、BAFF-R、CD33、EGFRvIII、BCMA、GPRC5D、PSMA、ROR1、FAP、ERBB2(Her2/neu)、MUC1、EGFR、CAIX、WT1、NY-ESO-1、CD79a、CD79b、GPC3、Claudin18.2、NKG2D和它们的任意组合。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述配体结合结构域是靶向CD19、CD22或两者的抗体。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述配体结合结构域包含：（1）抗CD19抗体，其包含与SEQIDNO：26第1-107位或SEQIDNO：28第1-107位所示的氨基酸序列具有至少90％、95％、97％、99％或100％序列同一性的轻链可变区序列和与SEQIDNO：26第123-242位或SEQIDNO：28第123-238位所示的氨基酸序列具有至少90％、95％、97％、99％或100％序列同一性的重链可变区序列，和/或
（2）抗CD22抗体，其包含与SEQIDNO：30第1-124位所示的氨基酸序列具有至少90％、95％、97％、99％或100％序列同一性的重链可变区序列和与SEQIDNO：30第143-249位所示的氨基酸序列具有90％、95％、97％、99％或100％序列同一性的轻链可变区序列。
11.根据权利要求8所述的方法，其中所述跨膜结构域选自以下蛋白质的...
【专利技术属性】
技术研发人员：周亚丽，任江涛，贺小宏，王延宾，韩露，
申请(专利权)人：南京北恒生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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