一种重组溶瘤病毒在制备治疗淋巴瘤药物组合物中的用途制造技术

本发明专利技术提供了一种重组溶瘤痘苗病毒在制备治疗淋巴瘤药物组合物中的用途，通过在溶瘤痘苗病毒上插入编码scFvCD47的外源基因获得重组溶瘤痘苗病毒(OVVscFvCD47)并用在治疗淋巴瘤药物组合物中。本发明专利技术将恶性肿瘤的基因治疗与病毒治疗有效结合起来，制备了可高效表达scFvCD47的溶瘤痘苗病毒，相对于单纯的基因疗法或病毒疗法增强了对肿瘤的杀伤能力。本发明专利技术采用了肿瘤靶向治疗策略，可以有效地靶向肿瘤细胞，并在其中特异性增殖。从而大大增强了溶瘤痘苗病毒载体的安全性。本发明专利技术采用病毒复制相关基因缺失的方式，确保病毒的肿瘤内特异性复制，大大增强了溶瘤痘苗病毒载体的安全性。本发明专利技术通过构建携带人scFvCD47编码序列的重组溶瘤痘苗病毒，发挥了较好的抗淋巴瘤的效果。

The use of a recombinant oncolytic virus in the preparation of pharmaceutical composition for the treatment of lymphoma

【技术实现步骤摘要】
一种重组溶瘤病毒在制备治疗淋巴瘤药物组合物中的用途
本专利技术属于基因工程学和肿瘤学，涉及一种携带scFvCD47的编码序列的重组溶瘤痘苗病毒在制备用于治疗淋巴瘤的药物组合物、药物或试剂盒中的用途。
技术介绍
淋巴瘤是一组起源于淋巴结和结外其他淋巴网状组织的恶性肿瘤，其种类繁多且发病率高。根据《2018全球癌症统计》的资料显示，全球新增癌症患者超过1800万例，淋巴癌占比3％左右。在我国，非霍奇金淋巴瘤发病总数占恶性淋巴瘤发病人数的80％左右，且具有难以治愈等特点。化疗依然是目前治疗淋巴瘤的重要手段。虽然小分子化学药具有渗透性好、细胞毒性较强的优势，但其特异性低，往往会引起严重的毒副作用，使之不能获得满意的临床收益。此外，在过去25年间，伴随着免疫学、分子生物学、基因组学、蛋白质组学等生命科学技术的进步，以及抗体人源化和优化技术的发展，单克隆抗体在淋巴瘤治疗方面的应用前景也颇受关注。但是，这些疗法都存在一定的局限性，很多时候无法取得良好的疗效，因此发展新型安全有效的治疗方法以提高淋巴瘤患者生存期具有非常重要的意义。溶瘤病毒免疫疗法(OncolyticVirotherapy)是近年来发展非常迅速的一种肿瘤治疗新方法，并已取得一些令人鼓舞的成果，很多产品正在国内和国际上进行I期、II期和III期临床研究。其中，美国安进公司的重组人GM-CSF溶瘤腺病毒(T-VEC)在临床试验中表现优异，已于2015年获得美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市，用于首次手术后复发的黑色素瘤患者不可切除的皮肤、皮下和淋巴结病灶的局部治疗。国内有重组人p53腺病毒(今又生)获得国家食品药品监督管理局颁发的新药证书，临床上用于治疗实体肿瘤患者。这些结果表明溶瘤病毒是一种非常具有前景的治疗癌症的新方法。溶瘤痘苗病毒(OncolyticPoxvirus)是溶瘤病毒免疫疗法的新型载体，其优点在于：病毒稳定性好、致病性低、基因转染效力高、安全性良好。溶瘤痘苗病毒能够选择性感染肿瘤细胞并在细胞内复制、杀死肿瘤细胞，而对正常组织和细胞几乎没有感染性，因此毒性很小。CD47属于免疫球蛋白超家族，其是人类、猪和啮齿动物信号调节蛋白α(SIRP-α)的主要配体，在体内所有正常细胞上均有表达。CD47作为正常细胞表面的“自我”标记物，与巨噬细胞表达的SIRP-α相互作用，发送“DoNotEatMe”的信号。之前有研究表明，在急性髓细胞白血病(AML)、B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)、多发性骨髓瘤(MM)等多种血液肿瘤中，CD47蛋白表达增加，并通过CD47–SIRP-α相互作用抑制吞噬作用，因而成为肿瘤细胞免疫逃逸最重要的机制之一。Chao1等发现，阻断CD47与SIRP-α的结合使得巨噬细胞增强了对非霍奇金淋巴瘤细胞的吞噬能力。Lin2等也发现利用抗体阻断这两者的结合使得巨噬细胞能够吞噬急性髓系白血病细胞。因此，抑制CD47与SIRP-α的结合可以使巨噬细胞重新获得吞噬肿瘤细胞的能力，从而获得更强的肿瘤杀伤效果。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种重组溶瘤痘苗病毒在制备用于治疗癌症的药物组合物中的用途。具体而言，将携带CD47单链可变区抗体(scFvCD47)的重组溶瘤痘苗病毒OVVscFvCD47施用于受试者。本专利技术一方面提供了重组溶瘤痘苗病毒在制备用于治疗癌症的药物组合物中的用途，其中所述重组溶瘤痘苗病毒上携带CD47单链可变区抗体(scFvCD47)。进一步地，重组溶瘤痘苗病毒上携带CD47单链可变区抗体(scFvCD47)编码序列通过可操作地在溶瘤痘苗病毒上插入能够编码scFvCD47的外源基因实现。编码scFvCD47的外源基因序列可为在严紧条件下与scFvCD47的核苷酸序列进行杂交、且编码具有抑制淋巴瘤细胞增值活性的scFvCD47的多核苷酸序列或其互补序列；优选地，编码scFvCD47的外源基因序列可为如SEQIDNO.1所示的序列。另一方面，本专利技术所述的重组溶瘤痘苗病毒可被进一步修饰，以表达治疗淋巴瘤的蛋白活性成分。示例性地，本专利技术中用于表达的治疗癌症的蛋白活性成分是p53。再一方面，本专利技术中所述药物组合物可含有用于治疗癌症的其他活性成分。示例性地，其中所述的其他活性成分是紫杉醇。又一方面，本专利技术的用途中所涉及的药物组合物含有药学上可接受的载体。示例性地，所述的药物组合物是固体或注射液的形式。优选的，所述的药物组合物是包装在药盒中的；更优选的，所述药盒还含有所述药物组合物的使用说明书。本专利技术的有益效果是：1、本专利技术将恶性肿瘤的基因治疗与病毒治疗有效结合起来，制备了可高效表达scFvCD47的重组溶瘤痘苗病毒，相对于单纯的基因疗法或病毒疗法增强了对肿瘤的杀伤能力。2、本专利技术采用了肿瘤靶向治疗策略，可以有效地靶向肿瘤细胞，并在其中特异性增殖。从而大大增强了溶瘤痘苗病毒载体的安全性。3、本专利技术采用病毒复制相关基因缺失的方式，确保病毒的肿瘤内特异性复制，大大增强了溶瘤痘苗病毒载体的安全性。4、本专利技术通过构建携带scFvCD47的重组溶瘤痘苗病毒，发挥了较好的抗淋巴瘤的效果。附图说明下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。图1是流式细胞仪检测携带GFP的重组溶瘤痘苗病毒感染Raji、SUDHL-4细胞中GFP的表达水平。图2是RT-PCR检测携带scFvCD47的重组溶瘤痘苗病毒感染Raji、SUDHL-4细胞，scFvCD47的表达水平。图3-1和图3-2是MTT法检测细胞存活率分析图，数据以剂量梯度相对于PBS组的百分率表示。图4是OVV和对Raji、SUDHL-4细胞荷瘤小鼠的肿瘤大小随时间变化图。具体实施方式本专利技术提供了重组溶瘤痘苗病毒在制备用于治疗癌症的药物组合物中的用途，其中所述重组溶瘤痘苗病毒OVVscFvCD47上携带CD47单链可变区抗体(scFvCD47)的编码基因。其中重组溶瘤痘苗病毒OVVscFvCD47上携带CD47单链可变区抗体(scFvCD47)的编码基因通过可操作地在溶瘤痘苗病毒上插入能够编码人scFvCD47的外源基因实现。具体而言，本专利技术所述的人scFvCD47的编码序列是任何能够编码人scFvCD47的任何DNA序列，优选地，该序列为如SEQIDNO.1所示的序列或其互补序列。另一方面，本专利技术所述的人scFvCD47的编码序列可为在严紧条件下与人scFvCD47的核苷酸序列进行杂交的、且编码具有抑制淋巴瘤细胞增值活性的人scFvCD47的多核苷酸或其互补序列；本文所述的“严紧条件”，可以为低严紧条件、中严紧条件、高严紧条件中的任一种，优选为高严紧条件。示例性地，“低严紧条件”可为30℃、5×SSC、5×Denhardt液、0.5％SDS、52％甲酰胺的条件；“中严紧条件”可为40℃、5×SSC、5×Denhardt液、0.5％SDS、52％甲酰胺的条件；“高严紧条件”可为50℃、5×SSC、5×Denhar本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组溶瘤痘苗病毒在制备用于治疗淋巴瘤的药物组合物中的用途，其特征在于，所述重组溶瘤痘苗病毒上携带CD47单链可变区抗体序列(scFvCD47)的编码序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组溶瘤痘苗病毒在制备用于治疗淋巴瘤的药物组合物中的用途，其特征在于，所述重组溶瘤痘苗病毒上携带CD47单链可变区抗体序列(scFvCD47)的编码序列。


2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述重组溶瘤痘苗病毒通过在溶瘤痘苗病毒中插入编码scFvCD47的外源基因获得。编码scFvCD47的外源基因序列可为在严紧条件下与scFvCD47的核苷酸序列进行杂交、且编码具有抑制淋巴瘤细胞增值活性的scFvCD47的多核苷酸序列或其互补序列。


3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的编码scFvCD47的外源基因序列可为如SEQIDNO.1所示。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其特征在于，所述重...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱文斌，王世兵，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33