肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒、其制备方法及使用方法技术

本发明专利技术公开了肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒、其制备方法及使用方法，其包括，荧光免疫层析试纸条、微球溶液、样品稀释液；所述荧光免疫层析试纸条，包括吸水纸、层析膜、样品垫、支持底板，所述层析膜上设置检测线和质控线，所述检测线上涂有抗人IgM抗体；所述微球溶液中，含有偶联着MP抗原的微球。本发明专利技术通过采用免疫层析试纸条提高了检测速率。通过采用荧光物质实现定量检测。通过在现有试纸条基础上改变了试纸条的构造，去除结合垫；并采用了不同的检测步骤，从而显著提高了特异荧光信号的强度和灵敏度，降低了检测背景干扰和非特异结合。

Immunoassay kit, preparation and application of antibody IgM against Mycoplasma pneumoniae

【技术实现步骤摘要】
肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒、其制备方法及使用方法
本专利技术属于免疫分析
，具体涉及肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒、其制备方法及使用方法。
技术介绍
肺炎支原体(MP)是一种无细胞壁的原核细胞，能与宿主呼吸道粘膜上皮细胞的甘露糖胺丙酮酸受体结合并产生毒素，导致肺炎。经血清流行病学研究显示：在中国20.7-38.9％的社区获得性肺炎患者由MP引起，居成人社区获得性肺炎病原体的首位。MP除导致呼吸道症状外，20-25％的病例可出现脑膜炎、心肌炎、溶血性贫血、血小板减少性紫癜等肺外表现。及时有效的诊断可有效控制MP感染病情的加重，降低死亡率。因此，MP的准确诊断具有重要的临床意义。肺炎支原体的诊断方法主要依靠血清学检测，已报道的酶联免疫分析法(ELISA)和化学发光法(CLA)均可以检测特异性的IgG、IgM等抗体，而这些亚型与感染的病程相关。MP-IgM阳性可作为早期或急性感染的诊断指标，一般在感染约7天后可被检测到，10-30天后达到峰值，76.5％的患者2周后降低至无法检测到的程度。单次测定MP-IgM阳性即可判定为MP新近感染。因此临床强调对更加准确可靠的诊断技术的研制需求。现用的ELISA和CLA操作简便，可定量检测MP-IgM，但耗时长，整个反应时间需要1个小时以上，且ELISA无法满足随到随检需求，因此若能保证试剂符合灵敏、定量技术要求的同时，提供一种快速、单人份检测试剂，则有利于临床医生快速诊断，缩短患者等候时间。
技术实现思路
本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。作为本专利技术其中一个方面，本专利技术提供一种肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒。为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：一种肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒，其包括：荧光免疫层析试纸条、微球溶液、样品稀释液；所述荧光免疫层析试纸条，包括吸水纸、层析膜、样品垫、支持底板，所述层析膜上设置检测线和质控线，所述检测线上涂有抗人IgM抗体；所述微球溶液中，含有偶联MP抗原的微球，微球的浓度为5～50μg/mL；所述MP抗原与微球偶联反应的质量比为1：10～100。作为本专利技术所述的肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒的一种优选方案：所述样品稀释液中含有蛋白质和表面活性剂。作为本专利技术所述的肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒的一种优选方案：所述样品稀释液包括含有0.1～1.0％BSA和0.1～2.0％S9的磷酸盐或Tris-HCl缓冲液。作为本专利技术所述的肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒的一种优选方案：所述荧光微球，其为聚苯乙烯材质；所述微球，其直径为100～500nm。作为本专利技术所述的肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒的一种优选方案：所述荧光微球，其荧光物质包括异硫氰酸荧光素或镧系元素；所述层析膜包括硝酸纤维素膜。作为本专利技术所述的肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒的一种优选方案：所述检测线，其抗人IgM抗体的含量为20～250ng/mm2。作为本专利技术的另一个方面，本专利技术提供制备所述的肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒的方法，其包括，制备微球溶液，所述制备微球溶液的制备方法为：活化微球：将碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺加入微球进行活化；偶联：加入2-(N-吗啉)乙磺酸溶液清洗后，再加入MP抗原或抗人IgG抗体，按抗原与微球的质量比为1：10～100进行偶联；封闭：加入封闭液进行封闭；洗涤：去除未反应物，获得偶联微球；稀释：将偶联得到的微球稀释至10～50μg/mL。作为本专利技术所述肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒的方法的一种优选方案：所述2-(N-吗啉)乙磺酸溶液，其pH为4.5；所述活化液，含有碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺；所述封闭液，含有10％牛血清白蛋白；所述洗涤，其洗涤液为含有Tween-20的Tris-HCl缓冲液。作为本专利技术的另一个方面，本专利技术提供所述的肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒的使用方法：将样品滴加在样品垫中孵育5～30min；向样品垫加入微球溶液，孵育5～30min；进行荧光检测，获得样本值。作为本专利技术所述的肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒的使用方法的一种优选方案：所述血液样品，其在滴加到样品垫之前先进行稀释，稀释倍数为50～1000倍。本专利技术的有益效果：本专利技术通过采用免疫层析试纸条提高了检测速率。通过采用荧光物质实现定量检测。通过在现有试纸条基础上改变了试纸条的构造，去除结合垫；并采用了不同的检测步骤，即：两步法反应，第一步加入样本孵育，第二步加入示踪物(微球抗原偶联物)，从而显著提高了特异荧光信号的强度和灵敏度，降低了检测背景干扰和非特异结合。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：图1为MP-IgM免疫层析试纸条剖面图(a.样品垫b.检测线c.质控线d.吸水纸e.层析膜f.底板)。图2为本专利技术测定人血液MP-IgM的荧光免疫层析试剂的标准曲线。图3为实施例1与对照例1检测MP-IgM高值样本的扫描曲线，其中，实线为实施例1方法扫描曲线，虚线为对照例1方法曲线。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术，但是本专利技术还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似推广，因此本专利技术不受下面公开的具体实施例的限制。其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本专利技术至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。实施例1：检测MP-IgM的试纸条，包括底板，以及沿所述底板长度方向顺次粘覆于所述底板上的吸水纸、NC膜以及样品垫；其中，NC膜e粘覆于所述底板f的中间部位；吸水纸d、NC膜e以及所述样品垫a之间，依次与且仅与相邻部位相接触且部分重叠；NC膜上设有相间隔的喷涂有抗人IgM的T线b，以及喷涂有质控二抗的C线c；其中，T线b靠近所述样品垫a设置，C线c靠近吸水纸d设置。高分子纳米微球含有铕离子，含有铕离子的高分子纳米微球的设置减少了稀土离子在样品溶液的猝灭，提高了稀土离子发出的荧光强度，因此不仅提高了检测的精确度，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒，其特征在于：包括，/n荧光免疫层析试纸条、微球溶液、样品稀释液；/n所述荧光免疫层析试纸条，包括吸水纸、层析膜、样品垫、支持底板，所述层析膜上设置检测线和质控线，所述检测线上涂有抗人IgM抗体；/n所述微球溶液中，含偶联有MP抗原的微球，微球的浓度为5～50μg/mL；所述MP抗原与微球偶联反应的质量比为1：10～100。/n

【技术特征摘要】
1.一种肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒，其特征在于：包括，
荧光免疫层析试纸条、微球溶液、样品稀释液；
所述荧光免疫层析试纸条，包括吸水纸、层析膜、样品垫、支持底板，所述层析膜上设置检测线和质控线，所述检测线上涂有抗人IgM抗体；
所述微球溶液中，含偶联有MP抗原的微球，微球的浓度为5～50μg/mL；所述MP抗原与微球偶联反应的质量比为1：10～100。


2.如权利要求1所述的肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒，其特征在于：所述样品稀释液中含有蛋白质和表面活性剂。


3.如权利要求2所述的肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒，其特征在于：所述样品稀释液包括0.1～1.0％BSA和0.1～2.0％S9。


4.如权利要求1～3中任一项所述的肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒，其特征在于：所述荧光微球，其为聚苯乙烯材质；所述微球，其直径为100～500nm。


5.如权利要求1～3中任一项所述的肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒，其特征在于：所述荧光微球，其荧光物质包括异硫氰酸荧光素或镧系元素；所述层析膜包括硝酸纤维素膜。


6.如权利要求1～3中任一项所述的肺炎支原体抗体IgM的免疫检测试剂盒，其特征在于：所述检测线，其抗人IgM抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：张艺，胡志刚，周彬，金浩然，郭明明，杨润琳，谢敏浩，范俊，
申请(专利权)人：江苏省原子医学研究所，
类型：发明
国别省市：江苏;32