新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其包括样品垫、量子垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和衬板，量子垫上包被有量子点微球标记的抗人IgM抗体或IgG抗体，硝酸纤维素膜上设置的检测线上包被有SARS‑COV2重组抗原，质控线上包被有羊抗鼠IgG。本发明专利技术提供的用于检测新型冠状病毒(SARS‑COV2)IgM抗体或IgG抗体的检测试剂卡，能够快速、准确的得到结果，为临床上的COVID‑19提供辅助诊断。

Detection reagent card for novel coronavirus antibody detection and preparation method thereof

【技术实现步骤摘要】
新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡及其制备方法
本专利技术属于医学免疫学中量子点免疫荧光层析
，具体涉及一种新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡及其制备方法。
技术介绍
研究表明：冠状病毒(Coronaviruses)为单股正链RNA病毒，分为α、β、γ和δ属四个属：新型冠状病毒(SARS-COV2)是一种新型的冠状病毒，属于β属，被列为第七类冠状病毒。2020年1月12日被世界卫生组织命名为新型冠状病毒(SARS-COV2)，能引起病毒性肺炎。《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第五版)》表述其潜伏期1-14天，一般为3-7天。以发热、乏力、干咳为主要表现。少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等症状。重症患者多在发病一周后出现呼吸困难和/或低氧血症，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍等。新型冠状病毒(SARS-COV2)引起的肺部感染被命名为“新型冠状病毒肺炎”(COVID-19)。新型冠状病毒(SARS-COV2)IgM抗体是人体感染新型冠状病毒(SARS-COV2)后，首先快速产生和分泌的抗体，主要存在于血液中。随着疾病的发展而增加，在经过有效治疗后IgM抗体逐渐消失。IgG抗体在感染中晚期出现，滴度有一个持续增高的过程，并在血液循环中保持较长时间存在。临床上可根据新型冠状病毒(SARS-COV2)IgM抗体或IgG抗体的检测结果对新型冠状病毒(SARS-COV2)的感染进行辅助诊断。新型冠状病毒(2019-nCoV)具有传播快，传染性强、发病急，病程进展快的特点，收治患者的医院面临巨大的压力。其中检测试剂短缺、检测速度慢、患者不能得到快速确诊是其中重要的瓶颈。核酸检测是现阶段确诊新型冠状病毒感染病例的主要实验室检查方法，但也存在一些方法学的局限性。检测特异抗体可以明确患者是否“近期或既往感染过新型冠状病毒”，弥补临床新型冠状病毒(SARS-COV2)的感染检验方法学单一，检验繁琐，检验要求高等不足之处。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种制作简便、反应快速、特异性强的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡。为解决以上技术问题，本专利技术采取如下技术方案：本专利技术的一个目的是提供一种新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其包括样品垫、量子垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和衬板，其中所述的样品垫、量子垫、硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在衬板上，所述量子垫的一端设在样品垫的一端与衬板之间，另一端设在硝酸纤维素膜上，所述硝酸纤维素膜的一端设在量子垫的一端与衬板之间，另一端设在吸水纸的一端与衬板之间；所述的量子垫上包被有量子点微球标记的抗人IgM抗体或者抗人IgG抗体；所述的硝酸纤维素膜上自所述的样品垫所在侧向着所述的吸水纸所在侧依次设置有检测线和质控线，所述的检测线上包被有SARS-COV2重组抗原，所述的质控线上包被有羊抗鼠IgG。优选地，所述的SARS-COV2重组抗原的浓度为0.8～1mg/mL。优选地，所述的量子点微球包括量子点聚苯乙烯微球、沉积在所述的量子点聚苯乙烯微球表面的一层或多层聚电解质层，所述的聚电解质层包括由聚丙烯胺盐酸盐形成的内层以及由聚苯乙烯磺酸钠形成的沉积在所述的内层表面的外层。具体地，所述的量子点微球通过如下步骤制备得到：(1)将所述的量子点聚苯乙烯微球分散在水中，加入聚丙烯胺盐酸盐溶液，摇床孵化30～60min形成所述的聚电解质层的内层，离心去除多余的聚丙烯胺盐酸盐；(2)将步骤(1)制得的形成有所述的内层的量子点聚苯乙烯微球分散在水中，加入聚苯乙烯磺酸钠溶液，摇床孵化30～60min形成所述的聚电解质层的外层，离心去除多余的聚苯乙烯磺酸钠；(3)选择性地重复步骤(1)和步骤(2)，得到所述的量子点微球。本专利技术中，所述的量子点聚苯乙烯微球可以采用市购获得的量子点聚苯乙烯微球，或者采用本领域常规方法制得的量子点聚苯乙烯微球。更具体地，步骤(1)中，所述的量子点聚苯乙烯微球与所述的聚丙烯胺盐酸盐的投料质量比为1：60～70；步骤(2)中，所述的形成有所述的内层的量子点聚苯乙烯微球与所述的聚苯乙烯磺酸钠的投料质量比为1：60～70。更具体地，步骤(1)中，所述的量子点聚苯乙烯微球加水稀释至浓度为2.5～4mg/mL。更具体地，步骤(1)中，所述的聚丙烯胺盐酸盐溶液的浓度为1～3mg/mL。更具体地，步骤(2)中，形成有所述的内层的量子点聚苯乙烯微球加水稀释至浓度为2.5～4mg/mL。更具体地，步骤(2)中，所述的聚苯乙烯磺酸钠溶液的浓度为1～3mg/mL。优选地，所述的量子点微球与所述的抗体的投料质量比为1：0.8～1.2。优选地，所述的量子点微球中的量子点为CdSe/CdS和/或CdSe/ZnS。优选地，所述的量子垫为经过预处理的量子垫，所述的预处理的方法为：将量子垫浸没在量子垫优化缓冲液中，然后干燥并控制湿度在30％以下，其中，所述的量子垫优化缓冲液包括浓度为45～55mmol/L的三羟甲基氨基甲烷、质量百分浓度为0.8～1.2％的牛血清白蛋白、质量百分浓度为0.4～0.6％的吐温20、质量百分浓度为1.8～2.2％的蔗糖、质量百分浓度为0.08～0.12％的proclin300、以及余量的纯化水。本专利技术的另一个目的是提供一种所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡的制备方法，包括如下步骤：(1)将所述的量子点微球分散在磷酸盐缓冲液中，然后加入所述的抗体，10～40℃摇床孵化1.5～2.5h，再加入量子点微球封闭液，孵化2～3h，离心过滤得到所述的量子点微球标记的抗体，其中，所述的量子点微球封闭液包括质量百分浓度为8～12％的牛血清白蛋白、质量百分浓度为0.04～0.06％的NaN3、以及余量的纯化水；(2)将步骤(1)制得的所述的量子点微球标记的抗体用量子点稀释缓冲液稀释至0.4～0.6μmol/L，然后以0.8～1.2μL/cm的量喷涂在所述的量子垫上，干燥制得包被有量子点微球标记的抗体的量子垫，其中，所述的量子点稀释缓冲液包括浓度为90～110mmol/L的三羟甲基氨基甲烷、质量百分浓度为0.8～1.2％的牛血清白蛋白、质量百分浓度为0.4～0.6％的吐温20、质量百分浓度为1.8～2.2％的蔗糖、质量百分浓度为0.08～0.12％的proclin300、以及余量的纯化水；(3)将所述的硝酸纤维素膜粘贴到所述的衬板上，将所述的SARS-COV2重组抗原用印膜缓冲液稀释成0.8～1mg/mL，其中SARS-COV2重组抗原为哺乳动物细胞体外培养获得的SARS-COV2刺突糖蛋白(SpikeProtein)片段，包含400-950个氨基酸。然后将所述的羊抗鼠IgG用印膜缓冲液稀释成0.4～0.8mg/mL，然后分别以0.8～1.2μL/cm的量喷涂在所述的硝酸纤维素膜，干燥制得所述的检测线和所述的质控线，其中，所述的印膜缓冲液包括浓度为0.01～0.03mol/L、pH7～7.4的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其包括样品垫(1)、量子垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、吸水纸(4)和衬板(5)，其特征在于：所述的样品垫(1)、量子垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、吸水纸(4)依次粘贴在衬板(5)上，所述量子垫(2)的一端设在样品垫(1)的一端与衬板(5)之间，另一端设在硝酸纤维素膜(3)上，所述硝酸纤维素膜(3)的一端设在量子垫(2)的一端与衬板(5)之间，另一端设在吸水纸(4)的一端与衬板(5)之间；/n所述的量子垫(2)上包被有量子点微球标记的抗人IgM抗体或者抗人IgG抗体；所述的硝酸纤维素膜(3)上自样品垫(1)所在侧向着吸水纸(4)所在侧依次设置有检测线(6)和质控线(7)，所述的检测线(6)上包被有SARS-COV2重组抗原，所述的质控线(7)上包被有羊抗鼠IgG。/n

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其包括样品垫(1)、量子垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、吸水纸(4)和衬板(5)，其特征在于：所述的样品垫(1)、量子垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、吸水纸(4)依次粘贴在衬板(5)上，所述量子垫(2)的一端设在样品垫(1)的一端与衬板(5)之间，另一端设在硝酸纤维素膜(3)上，所述硝酸纤维素膜(3)的一端设在量子垫(2)的一端与衬板(5)之间，另一端设在吸水纸(4)的一端与衬板(5)之间；
所述的量子垫(2)上包被有量子点微球标记的抗人IgM抗体或者抗人IgG抗体；所述的硝酸纤维素膜(3)上自样品垫(1)所在侧向着吸水纸(4)所在侧依次设置有检测线(6)和质控线(7)，所述的检测线(6)上包被有SARS-COV2重组抗原，所述的质控线(7)上包被有羊抗鼠IgG。


2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其特征在于：所述的SARS-COV2重组抗原的浓度为0.8～1mg/mL。


3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其特征在于：所述的量子点微球包括量子点聚苯乙烯微球、沉积在量子点聚苯乙烯微球表面的一层或多层聚电解质层，所述的聚电解质层包括由聚丙烯胺盐酸盐形成的内层以及由聚苯乙烯磺酸钠形成的沉积在内层表面的外层。


4.根据权利要求3所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其特征在于：所述的量子点微球通过如下步骤制备得到：
(1)将所述的量子点聚苯乙烯微球分散在水中，加入聚丙烯胺盐酸盐溶液，摇床孵化30～60min形成聚电解质层的内层，离心去除多余的聚丙烯胺盐酸盐；
(2)将步骤(1)制得的形成有内层的量子点聚苯乙烯微球分散在水中，加入聚苯乙烯磺酸钠溶液，摇床孵化30～60min形成聚电解质层的外层，离心去除多余的聚苯乙烯磺酸钠；
(3)选择性地重复步骤(1)和步骤(2)，得到量子点微球。


5.根据权利要求4所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其特征在于：步骤(1)中，所述的量子点聚苯乙烯微球与聚丙烯胺盐酸盐的投料质量比为1：60～70；步骤(2)中，所述的形成有内层的量子点聚苯乙烯微球与聚苯乙烯磺酸钠的投料质量比为1：60～70。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其特征在于：所述的量子点微球中的量子点为CdSe/CdS和/或CdSe/ZnS。


7.根据权利要求1所述的新型冠状病毒抗体检测用检测试剂卡，其特征在于：所述的量子垫(2)为经过预处理的量子垫，所述的预处理的方法为：将量子垫(2)浸没在量子垫优化缓冲液中，然后干燥并控制湿度在30％以下，其中，所述的量子垫优化缓冲液包括浓度为45～...

【专利技术属性】
技术研发人员：张念林，何乐春，胡昌华，左云国，孙婵，
申请(专利权)人：重庆新赛亚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50