一种从痰液中检测结核分枝杆菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种从痰液中检测结核分枝杆菌的方法。本发明专利技术提供了一种试剂盒，其包括如下1)‑3)所示的物质：1)扩增含有6110‑crRNA靶序列的引物对；2)6110‑crRNA，其靶序列为序列3；3)LwCas13a蛋白，其氨基酸序列由序列表中序列2所示的氨基酸残基组成。本发明专利技术在CRISPR‑Cas13a检测技术的基础上，首次将PCR扩增技术和CRISPR‑Cas13a检测技术相结合，PCR技术因其技术稳定，实用性强，更适合应用于临床核酸检测；建立了一个新的高灵敏、高特异核酸检测方法。

A method of detecting Mycobacterium tuberculosis from sputum

【技术实现步骤摘要】
一种从痰液中检测结核分枝杆菌的方法
本专利技术属于诊断试剂领域，涉及结核病诊断试剂及试剂盒，具体涉及一种从痰液中检测结核分枝杆菌的方法。
技术介绍
全球范围内，结核病仍是导致死亡的十大原因之一，据世界卫生组织(WorldHealthOrganization,WHO)报道：2017年全球估计有1000万新发结核病患者，中国估计有88.9万新发患者。结核病疫情严重，对于结核病的诊治仍迫在眉睫。目前结核病细菌学诊断和免疫学诊断方面都面临很多问题，敏感性和特异性及检测的快捷方便和成本问题均不同程度存在问题。现阶段检测临床样本中的结核分枝杆菌诊断技术是临床上的综合诊断。目前结核病诊断的金标准为痰涂片阳性、分枝杆菌分离培养阳性、分子生物学检测阳性或者肺组织病理学检查阳性等。(一)、细菌学诊断：(1)涂片：抗酸染色敏感度低；(2)改良罗氏培养：时间长，需观察8周，敏感性不高；(3)BACTECMGIT960快速培养系统：1-3周,仪器试剂昂贵；(二)分子生物学诊断：(1)XpertMtb/RIF检测:Mtb特异的实时PCR，是集标本处理、PCR、利福平耐药基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种试剂盒，其包括如下1)-3)所示的物质：/n1)扩增含有6110-crRNA靶序列的引物对；/n2)6110-crRNA，其靶序列为序列3；/n3)LwCas13a蛋白，其氨基酸序列如下a)-d)中任一种：/na)、氨基酸序列由序列表中序列2所示的氨基酸残基组成；/nb)将a)所限定的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；/nc)与a)所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的蛋白质；/nd)a)-c)中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种试剂盒，其包括如下1)-3)所示的物质：
1)扩增含有6110-crRNA靶序列的引物对；
2)6110-crRNA，其靶序列为序列3；
3)LwCas13a蛋白，其氨基酸序列如下a)-d)中任一种：
a)、氨基酸序列由序列表中序列2所示的氨基酸残基组成；
b)将a)所限定的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；
c)与a)所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的蛋白质；
d)a)-c)中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的蛋白。


2.一种试剂盒，包括如下A和B所示的物质：
A)扩增含有6110-crRNA靶序列的引物对；
B)含有6110-crRNA和LwCas13a蛋白的扩增体系；
所述6110-crRNA的靶序列为序列3；
所述LwCas13a蛋白，其氨基酸序列如下a)-d)中任一种：
a)、氨基酸序列由序列表中序列2所示的氨基酸残基组成；
b)将a)所限定的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；
c)与a)所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的蛋白质；
d)a)-c)中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的蛋白。


3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述6110-crRNA的核苷酸序列为序列4。


4.根据权利要求1-3中任一所述的试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：李传友，刘毅，张旭霞，于佳佳，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京胸科医院，
类型：发明
国别省市：北京;11