一种疫苗菌株的筛选方法技术

本发明专利技术涉及一种筛选方法，具体涉及一种疫苗菌株的筛选方法。本发明专利技术疫苗菌株的筛选方法包括以下步骤：待筛选菌株分离培养；鉴定待筛选菌株是否为所需种类的疫苗菌株，如果是，则进行后续操作；鉴定待筛选菌株的血清型；获取待筛选菌株的基因指纹；建立混合菌株感染模型，以获得最佳攻毒剂量以及攻毒后最佳分离待筛选菌株的时间；筛选优胜者菌株及最佳优胜者；将最佳优胜者中的各菌株按照相同的剂量制备灭活苗，进行免疫，保护效果最佳的菌株即为所需的疫苗菌株。本发明专利技术提供了一种高效的疫苗菌株筛选方法，该方法筛选时间短，易于操作，方便快捷，同时大幅度降低了成本，能达到快速筛选的目的。

A screening method of vaccine strains

【技术实现步骤摘要】
一种疫苗菌株的筛选方法
本专利技术涉及一种筛选方法，具体涉及一种疫苗菌株的筛选方法。
技术介绍
疫苗菌株通常选用保护效率高，免疫剂量小，容易培养且生产成本低的菌株。在某种细菌研究背景知识模糊，毒力因子尚不明确时，疫苗菌株的筛选方法通常的是，依次对各个分离株进行毒力的测定，常用不同剂量的细菌感染易感动物，通过测定最小致死量(MLD)和/或半数致死量(LD50)还可以用最小感染量(MID)和/或半数感染量(ID50)来评价。这些方法都需要将临床分离的细菌一一测定，工作量较大，比较费时费力，限制了能够参与筛选的菌株的数量。RA感染是发生在鸭、鹅、火鸡等禽类的一种接触传染性疾病，通常称该病为鸭传染性浆膜炎，该病呈急性或慢性经过，其特征是纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪性输卵管炎和脑膜炎。该菌主要侵害1～8周龄鸭，是长期以来是危害国内外养鸭业的一种主要疫病。由于RA血清型众多(目前已鉴定出25种血清型)且交叉保护效果几乎没有，只有同血清型的RA才能有效保护同血清型的RA感染，而且，即使是同一种血清型的RA，对同血清型RA的感染能够提供的保护力本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种疫苗菌株的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)待筛选菌株分离培养：从疑似病理组织中获取含菌病料，进行分离培养，得到待筛选菌株；/n(2)鉴定待筛选菌株是否为所需种类的疫苗菌株，如果是，则进行后续操作；/n(3)鉴定待筛选菌株的血清型；/n(4)获取待筛选菌株的基因指纹；/n(5)混合菌株感染模型的建立:从步骤(1)所得待筛选菌株中挑取单菌落，进行培养后调整菌株浓度，选取相同血清型的不同待筛选菌株进行多个菌株同样的浓度混合，每个组内多个菌株的浓度一样，按照不同细菌浓度得到多个混合组；且同混合组内待筛选菌株的基因指纹不同；然后进行攻毒，在攻毒后不同时间梯度分离菌株，以获得最佳攻毒...

【技术特征摘要】
1.一种疫苗菌株的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)待筛选菌株分离培养：从疑似病理组织中获取含菌病料，进行分离培养，得到待筛选菌株；
(2)鉴定待筛选菌株是否为所需种类的疫苗菌株，如果是，则进行后续操作；
(3)鉴定待筛选菌株的血清型；
(4)获取待筛选菌株的基因指纹；
(5)混合菌株感染模型的建立:从步骤(1)所得待筛选菌株中挑取单菌落，进行培养后调整菌株浓度，选取相同血清型的不同待筛选菌株进行多个菌株同样的浓度混合，每个组内多个菌株的浓度一样，按照不同细菌浓度得到多个混合组；且同混合组内待筛选菌株的基因指纹不同；然后进行攻毒，在攻毒后不同时间梯度分离菌株，以获得最佳攻毒剂量以及攻毒后最佳分离待筛选菌株的时间；
(6)从步骤(1)所得待筛选菌株中重新挑取单菌落，按照步骤(5)建立多个混合组，并筛选出每个混合组中的1～3个优胜者；
(7)重复步骤(6)从而获得多个优胜者，测序各个优胜者的基因指纹，然后再将多个优胜者组成新的小组，按照步骤(6)的方式继续筛选，得到多个最佳优胜者；
(8)将最佳优胜者中的各菌株按照相同的剂量制备灭活苗，进行免疫和交叉保护试验，保护效果最佳的菌株即为所需的疫苗菌株。


2.如权利要求1所述的疫苗菌株的筛选方法，其特征在于，所述步骤(4)中，获取待筛选菌株的基因指纹的方法包括以下步骤：
(4a)基因组提取：从步骤(1)所得待筛选菌株中挑取单菌落，培养后提取基因组；
(4b)采用PCR扩增步骤(...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘军发，邢娟娟，周祺，杨德鸿，麦凯杰，罗翠芬，周庆丰，刘士奇，
申请(专利权)人：温氏食品集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44