千金藤碱在制备抑制或治疗皮肤恶性黑素瘤的药物制剂中的应用及该药物制剂制造技术

本发明专利技术涉及抑制或治疗皮肤恶性黑素瘤的药物制剂和应用，该药物制剂包括有效量的千金藤碱。本发明专利技术的千金藤碱对皮肤恶性黑素瘤细胞有抑制增殖、促进凋亡的抗癌作用，且作用呈剂量依赖性。在小鼠皮肤恶性黑素瘤模型中，发现局部注射或局部涂抹外用千金藤碱溶液，可缩小小鼠皮肤恶性黑素瘤体积。同时也在人体皮肤上做了皮肤安全性检测，发现一定浓度的千金藤碱对人体皮肤无刺激且不会引起皮肤接触过敏反应，证明使用千金藤碱安全、可靠。

Application of stephanine in the preparation of drug preparation for inhibiting or treating cutaneous malignant melanoma and the drug preparation

【技术实现步骤摘要】
千金藤碱在制备抑制或治疗皮肤恶性黑素瘤的药物制剂中的应用及该药物制剂
本专利技术涉及千金藤碱在制备抑制或治疗皮肤恶性黑素瘤的药物制剂中的应用及该药物制剂。
技术介绍
皮肤恶性黑素瘤为来自黑素细胞的一种恶性肿瘤，黑素瘤好发于日光照晒部位或摩擦挤压部位，损害为带有黑素的肉瘤样肿瘤，发展快速，容易破溃，经常出血，肿瘤的基底部总会有黑色，很快近卫淋巴结转移，迅速转移到重要脏器导致死亡，危害极大。随着大气环境中的臭氧层被破坏，近年来人类皮肤恶性黑素瘤的发病率呈现出了上升趋势。皮肤恶性黑素瘤的治疗方法主要是手术切除和化疗法，但是这两种方法都会对人体产生不同程度的损害，因此，研究一种安全治疗皮肤恶性黑素瘤的方法非常重要。千金藤碱(cepharanthine，CEP)是从植物千金藤中提取的生物碱，其化学结构如下式所示，有研究表明千金藤碱具有诱导细胞凋亡的抗肿瘤作用，并且可以增加抗癌药物的作用，并且已经作为系统化疗用于非小细胞肺癌、口腔鳞癌的抗癌治疗。但是，千金藤碱在皮肤恶性黑素瘤治疗中的作用目前尚无相关研究。
技术实现思路
本专利技术人在研究皮肤恶性黑素瘤的治疗过程中发现，千金藤碱对皮肤恶性黑素瘤细胞有抑制增殖(见实施例1)、促进凋亡(见实施例2)的作用，且作用呈剂量依赖性。在小鼠皮肤恶性黑素瘤模型中，发现局部注射或局部涂抹外用千金藤碱溶液，可缩小小鼠皮肤恶性黑素瘤体积(见实施例5)。同时也在人体皮肤上做了皮肤安全性检测，发现一定浓度的千金藤碱对人体皮肤无刺激且不会引起皮肤接触过敏反应(见实施例4)。因此，本专利技术的目的在于提供一种千金藤碱在制备抑制或治疗皮肤恶性黑素瘤且不产生明显毒副作用的药物制剂中的应用。进一步的，所述千金藤碱包括其药学上可用的盐。进一步的，所述千金藤碱和其他种类的抑制或治疗肿瘤的药物联合使用，或所述千金藤碱及其药学上可用的盐单独使用。更进一步的，所述千金藤碱及其药学上可用的盐以药物制剂的形式被应用，所述药物制剂的形式包括片剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、微囊、微球、注射液、脂质体，所述药物制剂中可选择性地包含药学辅料。为实现以上目的，本专利技术还提供一种用于抑制或治疗皮肤恶性黑素瘤的药物制剂，所述药物制剂的成分包括千金藤碱。进一步的，所述药物制剂的形式包括片剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、微囊、微球、注射液、脂质体，所述药物制剂中可选择性地包含药学辅料。本专利技术的实现具有以下积极意义：(1)通过千金藤碱治疗皮肤恶性黑素瘤，可显著抑制皮肤恶性黑素瘤细胞的增殖，促进皮肤恶性黑素瘤细胞的凋亡，减小皮肤恶性黑素瘤的体积，且无明显毒副作用；(2)本专利技术所述的药物安全性良好，可在确保良好药效的条件下极大地降低患者的治疗风险。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对本专利技术范围的限定。图1为千金藤碱对皮肤恶性黑素瘤细胞增殖的影响结果图。图2为千金藤碱对皮肤恶性黑素瘤细胞凋亡的影响结果图。图3为千金藤碱在人体封闭式斑贴实验结果图。图4a-4b为使用千金藤碱减小皮肤恶性黑素瘤组织的实验结果图。图4a为在皮肤恶性黑素瘤组织中注射千金藤碱前后的实验结果图。图4b为在皮肤恶性黑素瘤组织表面涂抹千金藤碱前后的实验结果图。具体实施方式为了更好的理解本专利技术，本专利技术人提供了下述的实施例，然而，这些实施例仅仅是作为说明性的目的而给出的，并且不解释为对本专利技术的限制，因为其中许多变化是可能的，而不脱离本专利技术的主旨和范围。本专利技术的方法虽然在特定实施方案加以描述，但所属
的技术人员显而易见，可使所述方法的步骤或步骤的顺序发生变化，但不偏离本专利技术的概念和范畴。更具体来说，显而易见的在化学上和生物学上相关的其他药理过程类似的药物可以取代本文所述的药物，同时达到相同或相似的效果。所述
的技术人员显而易见的对所有这种相似的替换或修饰都应被认为在本专利技术的范畴和概念内。在这些实施例中，除非另有指明，所述的份和百分比均按质量计。“质量份”指表示多个组分的质量比例关系的基本计量单位，1份可表示任意的单位质量，如可以表示为1g，也可表示2.689g等。假如我们说A组分的质量份为a份，B组分的质量份为b份，则表示A组分的质量和B组分的质量之比a：b。或者，表示A组分的质量为aK，B组分的质量为bK(K为任意数，表示倍数因子)。不可误解的是，与质量份数不同的是，所有组分的质量份之和并不受限于100份之限制。实施例1千金藤碱对皮肤恶性黑素瘤细胞增殖的影响1、原代皮肤恶性黑素瘤细胞的分离培养(1)切取皮肤恶性黑素瘤病人的肿瘤组织，将新鲜皮肤恶性黑素瘤组织置于培养皿中，加入适量PBS，使用镊子去除组织上的血液、脂肪、坏死组织及结缔组织，保留肿瘤细胞丰富的区域，并用PBS清洗两遍。(2)将皮肤恶性黑素瘤组织放入新的培养皿中，加入少量DMEM高糖培养基，使用剪子将组织剪成约1mm3大小的碎块。(3)转入15ml离心管中，用PBS冲洗数遍，组织块自动下沉后，除去PBS。(4)将组织块转入培养瓶中，加入5ml胶原酶和双抗(稀释至2×)，吹散组织碎块，置于37℃恒温摇床上消化组织，调节速度150r/min，每隔30min于镜下观察一次。(5)待组织块镜下透光性良好，呈絮状时，转入15ml离心管中，1300r/min离心5min，弃上清。(6)加入PBS洗涤数次，反复吹打后，1300r/min离心5min，弃上清。(7)加入DMEM高糖培养基(含1×双抗)，反复吹打，至单细胞悬液。2、CEP给药孵育皮肤恶性黑素瘤细胞并检测细胞增殖活性(1)取上述单细胞悬液接种于96孔细胞培养板，给每孔加100μl的细胞悬液，每组设3个复孔，同时每组设置不加细胞悬液加等量培养基的空白对照实验组，将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃，5％CO2的条件下)，使细胞贴壁；(2)培养24小时后，进行给药，向细胞悬液中加入10μl不同浓度的CEP，CEP购自北京Shiji-Aoke公司，CEP给药组的终浓度分别为0mg/L、1.25mg/L、2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L和40mg/L；(3)将96孔细胞培养板分为三组，在培养箱中分别继续孵育24h、48h、72h后，每孔加入20μlCCK-8液(CCK-8试剂盒，购于日本同仁公司)，在培养箱继续培养2h，酶标仪检测450nm处吸光值(A)，计算细胞增殖活力。细胞增殖活力(％)＝[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)]×100A(加药)：具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度A(空白)：具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度A(0加药本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.千金藤碱在制备抑制或治疗皮肤恶性黑素瘤的药物制剂中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.千金藤碱在制备抑制或治疗皮肤恶性黑素瘤的药物制剂中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述千金藤碱包括其药学上可用的盐。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述千金藤碱和其他种类的抑制或治疗肿瘤的药物联合使用，或所述千金藤碱及其药学上可用的盐单独使用。


4.根据权利要2所述的应用，其特征在于，所述千金藤碱及其药学上可用的盐以药物制剂的形式被应用，所述药物制...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑跃，赖维，刘玉芳，
申请(专利权)人：中山大学附属第三医院中山大学肝脏病医院，
类型：发明
国别省市：广东;44