一种视黄醇结合蛋白检测试剂盒及其制备方法技术

一种视黄醇结合蛋白检测试剂盒及其制备方法，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，所述的试剂R1包括缓冲液、无机盐离子、加速剂、稳定剂、防腐剂，所述试剂R2包括缓冲液、无机盐离子、防腐剂、稳定剂、助悬剂和抗人视黄醇结合蛋白抗体，本发明专利技术检测试剂盒制备成本低廉，灵敏度高、准确性及精密度好，易于保存，数据重复性好，可广泛应用于临床生化分析仪。

A kit for the detection of retinol binding protein and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种视黄醇结合蛋白检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于医学免疫体外诊断领域，具体涉及一种视黄醇结合蛋白检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
视黄醇结合蛋白是在肝脏内合成的一种小分子脂质运载蛋白（分子量为21000道尔顿）。视黄醇结合蛋白在肝脏中合成后将全反式视黄醇（维生素Ａ）转运至上皮组织，为视网膜提供维生素A。研究发现RBP不仅存在于视网膜中，在人体血液、尿液及其他体液中也存在有大量的RBP，其含量与巧脏、肾脏的健康情况密切相关。目前，血清RBP的检测是评价肝功能损伤和肾小球滤过功能障碍的早期指标，而尿RBP检测是评价近端肾小管功能障碍的早期标志物。目前，视黄醇结合蛋白的检测方法有酶联免疫吸附法、免疫透射比浊法、放射免疫法和免疫电泳法等。其中免疫比浊法利用全自动生化分析仪来检测，没有放射源、较环保，而且稳定性、精密度和准确性性能良好，在临床常规检测中有广泛的应用。透射免疫比浊法和散射免疫比浊法，这两种方法都可以在全自动生化分析仪上测定RBP含量，检测方法简单、快速，检测结果准确度髙，对一定程度的溶血、黄痘、血脂等常见的干扰因素有一定的抵抗能力，能满足临床检测的要求，是目前测定视黄醇结合蛋白的方法中使用最广的。然而在体液中RBP的浓度较低，致使其特异性和敏感性不好，不便于临床上的广泛应用。由于免疫比浊法的检测原理是反应生成不溶性抗原-抗体复合物，并产生一定的浊度，浊度的高低反映样品中视黄醇结合蛋白的含量，导致现有的视黄醇结合蛋白试剂盒不可避免的出现灵敏度较低的不足。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述现有技术的不足，提供一种视黄醇结合蛋白的检测试剂盒，该试剂盒可直接应用于全自动生化分析仪上，结果准确性强、灵敏度高、使用方便，且便于大规模推广。一种视黄醇结合蛋白检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2；所述试剂R1包括的成分及相应含量为：缓冲液20～200mmol/L加速剂10～40g/L稳定剂5～15g/L防腐剂0.5～1.5g/L无机盐离子的质量百分比含量为上述总质量的0.5％～10％；所述试剂R2包括的成分及相应含量为：缓冲液20～200mmol/L防腐剂0.5～1.5g/L稳定剂5～15g/L助悬剂10～50mmol/L抗人视黄醇结合蛋白抗体0.5～3.0g/L无机盐离子的质量百分比含量为上述总质量的0.5％～10％。试剂R1中的防腐剂和试剂R2中的防腐剂是指可以抑制试剂中细菌和微生物污染的一类试剂，对试剂具有防腐杀菌的作用。试剂R1中的稳定剂和试剂R2中的稳定剂可以保持抗人视黄醇结合蛋白抗体活性。优选地，所述试剂R1中的缓冲液选自MES缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼砂缓冲液中的任意一种或多种的组合，其pH为7.0～9.0；所述试剂R2中的缓冲液选自PBS缓冲液、硼砂缓冲液、甘氨酸缓冲液Hepes缓冲液、GOODS缓冲液、MOPS缓冲液中任意一种或多种的组合，其pH为7.0～9.0。进一步地，所述试剂R1中的缓冲液为MES缓液；所述试剂R2中的缓冲液为PBS缓冲液。所述试剂R1中的缓冲液、试剂R2中的缓冲液可以采用本领域内公知的各种pH调节剂来进行pH调节。优选地，所述试剂R1中的无机盐离子选自KCl、NaCl、MgCl2、CaCl2中的任意一种或多种的组合；所述试剂R2中的无机盐离子选自NaCl、KCl、Na2CO3、Na2SO4、K2SO4中的任意一种或多种的组合。进一步地，所述试剂R1中的无机盐离子和试剂R2中的无机盐离子均为NaCl，这样可以保持体系长期稳定并且有价格低廉、原料易得的优点。优选地，所述试剂R1和试剂R2中的防腐剂为叠氮钠、硫柳汞或者ProClin300。进一步地，所述试剂R1和试剂R2中的防腐剂均为叠氮钠，具有优良的防腐杀菌性能。优选地，所述试剂R1中的加速剂为PEG6000、PEG8000或葡聚糖。进一步地，所述试剂R1中的加速剂为PEG6000，由于PEG6000属于非离子型水溶性聚合物，在水中的溶解性比较大，可以调节试剂R1的粘度，促进抗原和抗体分子结合为复合物。优选地，所述试剂R1中的稳定剂和试剂R2中的稳定剂均为牛血清白蛋白，稳定剂可以保护抗人视黄醇结合蛋白抗的活性。优选地，所述试剂R2中的助悬剂为阿拉伯胶、甘油、黄原胶或者海藻酸丙二醇酯。进一步地，所述试剂R2中的助悬剂为海藻酸丙二醇酯，可以在加入样本后使抗原-抗体复合物悬浮，提高了反应的准确度。优选地，所述试剂R1由MES缓冲液、NaCl、PEG6000、牛血清白蛋白和叠氮钠组成；所述试剂R2由PBS缓冲液、NaCl、叠氮钠、牛血清白蛋白、海藻酸丙二醇酯和抗人视黄醇结合蛋白抗体组成；所述试剂R1包括的成分及相应含量为：试剂R1：MES缓冲液50mmol/LNaCl0.5％PEG600025g/L牛血清白蛋白10g/L叠氮钠1g/L；所述试剂R2包括的成分及相应含量为：PBS缓冲液50mmol/LNaCl0.5％叠氮钠1g/L牛血清白蛋白10g/L海藻酸丙二醇酯30mmol/L抗人视黄醇结合蛋白抗体3.0g/L一种视黄醇结合蛋白检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：步骤一：在20～200mmol/L的缓冲液中依次加入0.5％～10％的无机盐离子、10～40g/L的加速剂、5～15g/L的稳定剂和0.5～1.5g/L的防腐剂，搅拌混合均匀并通过0.22微米混合纤维素膜过滤，得试剂R1；步骤二：在20～200mmol/L的缓冲液中依次加入0.5％～10％的无机盐离子、10～50mmol/L的助悬剂、5～15g/L的稳定剂、0.5～1.5g/L的防腐剂和0.5～3.0g/L的抗人视黄醇结合蛋白抗体搅拌混合均匀并通过0.22微米混合纤维素膜过滤，得试剂R2。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：1、本专利技术的试剂盒具有检测简单而快速、灵敏度高、准确性及精密度好，且生产成本低的优点。2、本专利技术采用的视黄醇结合蛋白检测方法为免疫透射比浊法，该方法使得视黄醇结合蛋白的检测更为经济、方便和快速，适用于绝大多数医院的自动生化分析仪，特别是对急诊能实现快速定量检测。3、本专利技术创新性的在试剂R2中添加了海藻酸丙二醇酯作为助悬剂，使得在样本加入后参与反应时产生的抗原-抗体复合物悬浮且分散均匀，即使在较低浓度下也可以被检测出来，极大的提高了试剂的检测灵敏度。具体实施方式实施例1一种视黄醇结合蛋白检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2；试剂R1包括的成分及相应含量为：MES缓冲液50mmol/LNaCl0.5％PEG600025本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种视黄醇结合蛋白检测试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2；/n所述试剂R1包括的成分及相应含量为：/n缓冲液 20～200 mmol/L/n加速剂 10～40 g/L/n稳定剂 5～15 g/L/n防腐剂 0.5～1.5 g/L/n无机盐离子的质量百分比含量为上述总质量的0.5％～ 10％；/n所述试剂R2包括的成分及相应含量为：/n缓冲液 20～200 mmol/L/n防腐剂 0.5～1.5 g/L/n稳定剂 5～15 g/L/n助悬剂 10～50 mmol/L/n抗人视黄醇结合蛋白抗体 0.5～3.0g/L/n无机盐离子的质量百分比含量为上述总质量的0.5％～ 10％。/n

【技术特征摘要】
1.一种视黄醇结合蛋白检测试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2；
所述试剂R1包括的成分及相应含量为：
缓冲液20～200mmol/L
加速剂10～40g/L
稳定剂5～15g/L
防腐剂0.5～1.5g/L
无机盐离子的质量百分比含量为上述总质量的0.5％～10％；
所述试剂R2包括的成分及相应含量为：
缓冲液20～200mmol/L
防腐剂0.5～1.5g/L
稳定剂5～15g/L
助悬剂10～50mmol/L
抗人视黄醇结合蛋白抗体0.5～3.0g/L
无机盐离子的质量百分比含量为上述总质量的0.5％～10％。


2.根据权利要求1所述的一种视黄醇结合蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的缓冲液选自MES缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼砂缓冲液中的任意一种或多种的组合，其pH为7.0～9.0；
所述试剂R2中的缓冲液选自PBS缓冲液、硼砂缓冲液、甘氨酸缓冲液Hepes缓冲液、GOODS缓冲液、MOPS缓冲液中任意一种或多种的组合，其pH为7.0～9.0。


3.根据权利要求1所述的一种视黄醇结合蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的无机盐离子选自KCl、NaCl、MgCl2、CaCl2中的任意一种或多种的组合；
所述试剂R2中的无机盐离子选自NaCl、KC...

【专利技术属性】
技术研发人员：张海悦，程慧敏，徐岩，魏滢，张国光，陈寿华，王姝，罗振坤，崔晓兵，翟硕，徐海金，郭海南，
申请(专利权)人：吉林省富生医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22