一种双酶法恒温扩增检测COVID-19的试剂盒和检测方法技术

本发明专利技术公开了一种双酶法恒温扩增检测COVID‑19的试剂盒和检测方法。该试剂盒包括Forward Primer、Reverse Primer，MNAzymePart A、MNAzymePart B和Sub2‑FB。本发明专利技术的检测方法是基于RPA重组酶恒温扩增技术的基础上联合MNAzyme，采用特异的非均一性扩增以产生足够多的线性DNA，使MNAzyme可持续发光；MNAzyme工作温度非常广泛，室温(37℃)条件下即可检测到荧光，与RPA扩增工作温度(37℃)契合；MNAzyme具有较高的发光特异性与催化特异性；与传统的RPA恒温扩增技术相比，本发明专利技术方法无需合成复杂探针序列，可设置多个MNAzyme(2‑3个)得到较强的输出荧光信号，避免了因靶核酸信号较弱检测不到的情况；本方法简便、快捷、可与多种仪器连用，42℃与37℃都可实现扩增且无噪音。

A kit and detection method for covid-19 detection by thermostatic amplification with double enzyme method

【技术实现步骤摘要】
一种双酶法恒温扩增检测COVID-19的试剂盒和检测方法
本专利技术属于新型冠状病毒检测领域，具体涉及一种双酶法恒温扩增检测COVID-19的试剂盒和检测方法。
技术介绍
新型冠状病毒COVID-19由RNA核酸和蛋白等组成，是RNA病毒的一种。病毒通过特定细胞表面的受体入侵细胞造成感染，并且利用宿主细胞进行复制增殖。因此可以通过采集人的特定部位细胞样本，检测其中是否含有病毒RNA核酸，来确认机体是否受到感染。目前病毒检测的技术有以下几种：1.POCT法--CRISPR等温检测法，该方法分为三步：①对提取的RNA进行等温扩增25分钟；②加入Cas13蛋白、向导RNA和报告分子在37℃条件下温育30分钟；③将试纸条浸渍在完成步骤2的反应系统中，5分钟内出结果。检测时长50分钟-60分钟。2.IgM/IgG抗体联检法，IgM抗体在感染早期出现，IgG抗体在感染中晚期出现，滴度有一个持续增高的过程，并在血液循环中保持较长时间存在。但特异抗体检测阳性不能像病毒核酸检测阳性一样作为病毒感染的“金标准”，该方法必须采用IgM和IgG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测COVID-19的引物对和MNAzyme核酸酶，其特征在于，包括Forward Primer、Reverse Primer，MNAzymePart A、MNAzymePart B和Sub2-FB；/nForward Primer：5'-CAAGCCTCTTCTCGTTCCTCATCACGTAGTCGCAA-3'；/nReverse Primer：5'-CTCAGCAGCAGATTTCTTAGTGACAGTTTGGCCTT-3'；/nMNAzyme Part A：5'-AACTTCTCCTGCTAGAATGGCTGGCACAACGAGAGGAAACCTT-3'，3’-P；/nMNAz...

【技术特征摘要】
1.一种检测COVID-19的引物对和MNAzyme核酸酶，其特征在于，包括ForwardPrimer、ReversePrimer，MNAzymePartA、MNAzymePartB和Sub2-FB；
ForwardPrimer：5'-CAAGCCTCTTCTCGTTCCTCATCACGTAGTCGCAA-3'；
ReversePrimer：5'-CTCAGCAGCAGATTTCTTAGTGACAGTTTGGCCTT-3'；
MNAzymePartA：5'-AACTTCTCCTGCTAGAATGGCTGGCACAACGAGAGGAAACCTT-3'，3’-P；
MNAzymePartB:5'-TGCCCAGGGAGGCTAGCTAATGGCGGTGATGCT-3'，3’-P；
Sub2-FB:5'-AAGGTTTCCTCguCCCTGGGCA-3'，5’-FAM，3’-BHQ1。


2.一种双酶法恒温扩增检测COVID-19的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的检测COVID-19的引物对和MNAzyme核酸酶。


3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括反应缓冲液、MgAc溶液和冻干酶制剂。

【专利技术属性】
技术研发人员：杨俊，唐续，范明姣，赵应洪，
申请(专利权)人：广州达正生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44